薛建文林 华黄兴振



高效液相色谱法同时测定口疳吹药中苦参碱和氧化苦参碱的含量

薛建文1林 华2黄兴振3

【摘要】目的 探讨高效液相色谱（HPLC）法同时测定口疳吹药中苦参碱和氧化苦参碱含量的可行性。方法 采用HPLC法同时测定口疳吹药中苦参碱和氧化苦参碱含量。结果 苦参碱和氧化苦参碱质量浓度分别在5.15～103.00 μg/ml （r=0.9997）、4.87～97.40 μg/ml（r=0.9999）时与其峰面积呈良好线性关系；苦参碱和氧化苦参碱的平均加样回收率分别为98.11％、99.09％，相对标准偏差（RSD）分别为1.50％、0.96％。结论 HPLC法快速、灵敏、准确，可作为口疳吹药中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的标准方法。

【关键词】高效液相色谱法；口疳吹药；苦参碱；氧化苦参碱；山豆根；含量测定

1云浮市人民医院药学部，广东云浮 527300

2广西柳州食品药品检验所，广西柳州 213022

3广西医科大学药剂学教研室，广西南宁 530021

口疳吹药是由山豆根、青黛、冰片、黄连、甘草、玄明粉、儿茶、硼砂（煅）、人中白、僵蚕、薄荷11味药物加工而成的中药复方制剂，具有清火消肿的作用，是治疗咽喉红肿、口舌肿痛、风火牙疳等症状的首选药物[1]。原质量标准仅对该制剂的性状进行了规定，未对方中任何药物进行定性或定量研究，不能有效控制该制剂的质量，本研究采用高效液相色谱（HPLC）法对口疳吹药中山豆根[2]所含苦参碱和氧化苦参碱进行定量检测，为进一步控制口疳吹药质量提供参考依据。

1 材料与仪器

1.1 材料 苦参碱对照品（批号：110805-200508）；氧化苦参碱（中国食品药品检定研究院，批号：110780-201007）；口疳吹药（雷允上药业有限公司，批号：NC14013、NC14015、NC14021）；色谱纯乙腈；分析纯异丙醇、磷酸。

1.2 仪器 1200型高效液相色谱仪（安捷伦Agilent）；Chemstation色谱工作站。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：氨基键合硅胶填充柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-异丙醇-3％磷酸溶液（80:5:15）[2-5]；检测波长：210 nm[2,6]；流速：1.2 ml/min；柱温：30 ℃。

2.2 混合对照品溶液配制 分别精密称取苦参碱对照品和氧化苦参碱对照品各适量，加流动相制成浓度分别为0.515、0.487 mg/ml的对照品储备液。再精密吸取对照品储备液，加流动相制成苦参碱和氧化苦参碱浓度分别为0.0206、0.0487 mg/ml的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 取口疳吹药适量，研磨成细粉，取约1.6 g，精密称定其质量，置于具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）混合溶液50 ml，密塞，称定重量，超声处理45 min，再称定其质量，用三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）混合溶液补足损失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 ml，40 ℃减压回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至20 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，振摇均匀，过滤，即得续滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性样品溶液制备 按口疳吹药处方，称取除山豆根的其余药味，参照口疳吹药制备工艺，按照2.3供试品溶液的制备方法制成山豆根空白溶液。

2.5 方法专属性 分别精密吸取供试品溶液、混合对照品溶液及山豆根空白溶液20 μl，进样。结果显示，在与所测组分对照品色谱图相应的保留时间，样品色谱图中有对应吸收峰；而山豆根空白溶液图谱上未显示苦参碱和氧化苦参碱吸收峰，见图1。

2.6 线性关系考察 精密量取苦参碱储备液、氧化苦参碱储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，分别置于5个10 ml容量瓶中，加甲醇制成系列浓度混合对照品溶液，依法测定，以峰面积Y与对照品质量浓度X，得苦参碱回归方程为：A=1.0249×106C－416.7，r=0.9997，线性范围为5.15～103.00 μg/ml；氧化苦参碱A=4.6241×106C+298.4，r=0.9999，线性范围为4.87～97.40 μg/ml。结果表明，苦参碱和氧化苦参碱在各自的线性范围内呈良好线性关系。

图1　苦参碱和氧化苦参碱的HPLC图注：1：苦参碱；2：氧化苦参碱；A：对照品；B：样品；C：阴性对照品

2.7 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液20 μl，连续6次注入高效液相色谱仪中，测得苦参碱和氧化苦参碱峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为0.82％、1.07％。

2.8 重复性试验 取同一批号口疳吹药，按2.3方法制成6份供试品溶液，在上述条件下依法进样测定，计算各成分含量和相对标准偏差，苦参碱和氧化苦参碱的RSD分别为1.22％、1.59％。

2.9 稳定性试验 精密吸取同一批号口疳吹药供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样20 μl测定，测得苦参碱和氧化苦参碱的RSD分别为0.80％、1.15％。

2.10 加样回收率试验 精密称定口疳吹药（苦参碱为0.618 mg/g，氧化苦参碱为1.471 mg/g）0.8 g，研磨成细粉，置于具塞锥形瓶中，精密加入混合对照品溶液25 ml、三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）混合溶液25 ml，密塞，称定重量，超声处理45 min，再称定重量，用三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）混合溶液补足减少重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 ml，40 ℃减压回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至20 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，振摇均匀，过滤，即得续滤液作为加样供试品试液。依法进样测定，平均加样回收率及RSD，见表1。

表1　苦参碱和氧化苦参碱回收率试验

2.11 3批样品测定 取3个批号样品，按供试品制备方法，在上述色谱条件下测定本品中苦参碱和氧化苦参碱含量，结果见表2。

表2　3个批号样品中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定

3 讨论

山豆根为豆科植物越南槐的干燥根和根茎，具有清热解毒、消肿利咽的作用，可用于火毒蕴结、乳蛾喉痹、咽喉肿痛、齿龈肿痛、口舌生疮等的治疗，是口疳吹药的主要成分，而苦参碱和氧化苦参碱为山豆根的主要成分。本研究对口疳吹药中苦参碱和氧化苦参碱进行定量控制研究，结果表明HPLC法快速、灵敏、准确，可作为口疳吹药中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的标准方法。

参考文献

[1] 中华人民共和国国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂(第五册)[M].北京:人民卫生出版社,1996.

[2] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典2010年(一部)[M].北京:人民卫生出版社,2010.

[3] 彭红华,蒋嫦月,林吴,等.不同生长年限山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量比较[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(8):72-75.

[4] 李克,王曙东,吴龙琴,等.HPLC同时检测山豆根中苦参碱和氧化苦参碱含量[J].解放军药学学报,2014,30(1):55-57.

[5] 李南,邓红,张蜀.UPLC法快速测定山豆根中氧化苦参碱和苦参碱的含量[J].今日药学,2012,22(6):347-349.

[6] 杨帆,陆娟,刘春明,等.快速溶剂萃取提取山豆根中苦参碱和氧化苦参碱最佳条件研究[J].中国药学杂志,2012,47(7):495-499.

作者简介：薛建文（1981.6-），主管药师。研究方向：药物制剂和质量研究。E-mail：xuejianwenjianwen@163.com

【中图分类号】R927.2

【文献标志码】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.04.005