张　永　陶金辉　李向培　厉小梅　汪国生　钱　龙

·临床医学·

类风湿关节炎患者治疗前后血清IL-8 IL-10的变化及其临床意义

张永陶金辉李向培厉小梅汪国生钱龙

[摘要]目的检测类风湿关节炎患者(RA)治疗前后血清IL-8、IL-10的变化，探讨其在RA发病机制中的作用及临床意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-8、IL-10 在类风湿关节炎治疗前后的变化，并分析小剂量糖皮质激素治疗的影响。结果① RA患者治疗前与正常对照比较IL-8浓度升高(P<0.05)，治疗后IL-8浓度与治疗前相比降低(P<0.05)，但仍高于正常对照组(P<0.05)；② RA患者治疗前与正常对照比较IL-10浓度降低(P<0.05)，治疗后IL-10浓度与治疗前比较升高(P<0.05)，与正常对照比较差异无统计学意义(P>0.05)；③RA组中血清IL-8、IL-10与ESR、CRP、PLT无相关性；④ 小剂量糖皮质激素治疗后患者血清IL-8浓度明显低于未进行激素治疗的患者。结论IL-8可能在RA病理过程中起重要作用，可作为监测RA炎症过程的一个有价值指标；血清IL-10在RA发病中可能具有抗炎和免疫抑制作用；小剂量的糖皮质激素可有效抑制RA患者炎症反应。

[关键词]关节炎，类风湿；白细胞介素-8；白细胞介素-10；糖皮质激素

作者单位： 230001合肥安徽医科大学附属省立医院风湿免疫科

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是以侵蚀性、对称性多关节炎为主要临床表现的慢性、全身性自身免疫性疾病。主要表现为关节滑膜炎所致的关节肿痛及骨破坏，最终可致残。RA的确切发病机制不明，其典型的病理改变是滑膜炎，该病与免疫系统调节功能紊乱有关，其中细胞因子在诱导自身免疫反应中起了介导作用，细胞因子网络平衡失调是导致病变侵蚀进展的主要因素之一。白细胞介素-8(IL-8)可能通过诱导免疫活性细胞释放软骨降解酶而引起RA的关节损伤；白细胞介素-10(IL-10)能下调巨噬细胞的抗原提呈功能，从而抑制Th1细胞因子及单核巨噬细胞因子的产生，具有免疫抑制和抗炎的作用。本研究通过比较致炎的IL-8与抗炎的IL-10细胞因子在治疗前后的变化，分析其与炎症指标的关系及糖皮质激素对细胞因子的影响，并结合临床资料进行分析，进一步探讨其在RA发病中的作用机制。

1资料与方法

1.1一般资料收集2013年6月至2014年8月我院风湿免疫科91例RA患者临床资料，其中女性82例，男性9例，平均年龄(43.62±11.89)岁，诊断均符合2010年美国风湿病学会(ACR)RA分类诊断标准；其中54例患者收集了治疗3个月前后的资料，男性4例，女性50例，平均年龄(41.09±12.04)岁，所有患者均常规使用改善病情抗风湿药(DMARDs)，其中14例患者合并使用了小剂量糖皮质激素(泼尼松10 mg/d)。正常对照组14例，为我院健康体检者。

1.2方法①收集RA患者临床资料，包括一般情况、临床表现及治疗情况；②常规检测血常规、ESR(魏氏法)、CRP(免疫比浊法)。③采集RA患者与正常对照静脉血5 mL于普通试管中，离心后血清-20℃保存待测。采用ELISA法检测RA及健康对照组血清IL-8、IL-10，具体操作按说明书进行。主要操作步骤：将RA患者治疗前后的血清以1 ∶20稀释；取稀释后血清、标准品加到反应小孔，每孔加100 μL，往反应小孔里加入抗体100 μL；把标准板放在4 ℃冰箱里孵育过夜，使其充分反应。次日把标准板放在洗板机上充分洗脱，标准板里加入200 μL显色液，放在摇床上使其充分反应。酶标仪测其OD值(吸光度)。

2结果

2.1治疗前后血清IL-8、IL-10 的变化RA患者治疗前血清IL-8浓度为144.63(15.92，676.17) pg/mL，治疗后为55.78(20.37，177.82) pg/mL，均高于正常对照组(3.13±1.01) pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后浓度与治疗前相比降低(P<0.05)，见图1。

RA治疗前血清IL-10浓度为5.33(2.04，10.43) pg/mL，治疗后为6.21(3.71，12.40)pg/mL，正常对照为(16.59±3.20)pg/mL。RA患者治疗后IL-10浓度高于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)，治疗前低于正常对照组(P<0.05)、治疗后与正常对照比较差异无统计学意义(P>0.05)，见图2。

2.2血清IL-8、IL-10与炎症指标相关性分析运用Spearman相关分析，RA患者中血清IL-8与ESR、CRP、PLT无相关性；RA患者中血清IL-10与ESR、CRP、PLT 亦无相关性。详见表1。

表1　血清IL-8和IL-10与炎症指标的相关性

2.3小剂量糖皮质激素对血清细胞因子IL-8、IL-10的影响14例RA患者使用了小剂量糖皮质激素(泼尼松10 mg/d)，未使用糖皮质激素患者40例；其中未使用激素患者血清IL-8浓度为(199.78±47.34) pg/mL，使用激素为(26.41±38.93) pg/mL，使用激素治疗后血清IL-8浓度明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；未使用激素患者血清IL-10浓度为4.67(2.5，12.11) pg/mL，使用激素为(16.25±8.09) pg/mL，差异无统计学意义(P>0.05)。

3讨论

RA是免疫介导的炎性疾病，其病理学特征为滑膜炎症、软骨吸收、骨质破坏和骨纤维化。细胞因子网络平衡失调与RA的发病密切相关。

IL-8主要由巨噬细胞和成纤维细胞产生，成熟的IL-8由72个氨基酸残基组成，其氨基酸序列从第28位的丝氨酸开始。IL-8是一种CXCR3的重要配体，具有很强的中性粒细胞趋化作用即促炎作用和促血管生成作用。IL-8对RA的作用机理可能是通过诱导中性粒细胞释放软骨降解酶从而引起RA的关节损伤。有研究[1]发现，RA患者的炎症部位中性粒细胞的浸润除与免疫复合物激活补体途径有关，滑膜细胞生成TNF-α、IL-8等细胞因子也参与了这一作用。炎症部位的各种炎性细胞因子如IL-1、TNF-α等均能刺激内皮细胞、单核巨噬细胞等分泌大量的IL-8。IL-8能使局部血管的通透性增强，改变中性粒细胞与内皮细胞的黏附，并趋化中性粒细胞游走、聚集到炎症部位，释放各种活性酶，参与炎症反应，引起关节软骨和骨质的损伤、破坏[2-3]。本研究结果发现，治疗前RA患者血清中IL-8水平升高，提示IL-8参与了RA患者的免疫病理过程，但血清IL-8水平的升高与ESR、CRP、PLT等指标无明显相关性，与其他文献[4]报道一致。IL-8是一种非特异性炎性趋化因子，在自身免疫性炎症反应过程中广泛起作用，有学者研究[5]发现，几乎所有炎症损伤部位的T细胞均可释放IL-8，推测IL-8可能作为一种独立的炎症因子与RA活动性相关。本组患者治疗后IL-8水平明显降低，表明其可作为监测RA治疗效果的血清学指标。

人IL-10主要由单核巨噬细胞及Tp细胞合成，它能下调巨噬细胞的抗原提呈功能，抑制Th1细胞因子及单核巨噬细胞因子的产生，促进Tp细胞因子的生理功能，可改变单核巨噬细胞的生物学功能，并纠正Th1/Tp偏离；此外，IL-10还可以抑制巨噬细胞产生的细胞因子，它可以抑制脂多糖(LPS)导致的多种炎症因子的释放。IL-10还可抑制PBMC产生TNF、IFN等多种细胞因子，降低树突状细胞(DC)细胞表面表达MHC-Ⅱ类分子、ICAM-1以及共刺激分子，阻碍DC细胞的抗原递呈能力，从而诱发T细胞针对异种抗原的无能反应[6]，因此，IL-10具有免疫抑制和抗炎作用。IL-10还可以通过负反馈作用，下调IL-10 mRNA的表达，进而抑制自身产生。IL-10可减少RA的致病性促炎因子，也可增加抗炎因子的产生，在RA中具有重要的免疫调节作用。用甲氨喋呤(MTX)治疗RA的试验中，IL-10与RA活动性呈负相关，关节炎的改善及ESR、CRP等活动性指标降低后，患者外周血单核细胞产生的IL-10明显增多[7]。有研究[8]发现，IL-10通过抑制致炎因子的产生而减少淋巴细胞向病变关节的迁移，还能增加内源性抗炎物质，如可溶性TNF-α受体和IL-l受体拮抗剂产生，从而抑制TNF和IL-1的作用，进而减少RA滑膜细胞的浸润、破骨细胞的激活，抑制病变发展[9]。IL-10还能够通过抑制环氧化酶-2、基质金属蛋白酶，提高金属蛋白酶组织抑制因子的表达等多途径保持软骨细胞[10，11]。本研究中，治疗后RA患者血清IL-10水平升高，与治疗前相比差异有统计学意义，反映了IL-10在RA患者疾病过程中的保护作用。

糖皮质激素(glucocorticoid，GC)的作用主要是通过与胞浆内的糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor，GR)结合实现的，GC与受体结合后可以增强抗炎基因或抑制炎症基因的转录，相应引起转录增加或减少，改变介质相关蛋白的水平，进而对炎症细胞和分子产生影响而发挥抗炎作用。近年有较多的文献研究提示，小剂量GC(每日泼尼松10 mg或等效其他激素)有减缓RA病情进展的作用。中华医学会风湿病分会推荐的RA诊治指南[12]也指出，在RA急性发作，或伴有心、肺、眼和神经系统等器官受累的重症患者，可给予短效激素，其剂量依病情严重程度而调整。小剂量糖皮质激素可作为DMARDs起效前的“桥梁”作用[13]。本研究中炎症细胞因子IL-8在使用GC后得到了更好的控制，提示GC可以增强DMARDs抗炎，抑制炎症，有助于控制RA疾病进展。

本研究结果显示，IL-8与IL-10在RA中的失衡可能导致炎症的进展，而小剂量糖皮质激素具有抑制IL-8的致炎作用。大量细胞因子参与了RA炎症过程，对细胞因子之间的关联研究有助于阐明RA的发病机理及调控机制。

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(2014-11-21收稿2015-01-20修回)

The changes and clinical significance of serum IL-8 and IL-10 levels after treatment in patients with rheumatoid arthritis

ZhangYong,TaoJinhui,LiXiangpei,etal

DepartmentofRheumatologyandImmunology,AnhuiProvincialHospitalAffiliatedtoAnhuiMedicalUniversity,Hefei230001,China

[Abstract]ObjectiveTo detect the change of IL-8 and IL-10 levels in rheumatoid arthritis (RA) before and after treatment, and study its effect and clinical significance in the pathogenesis of RA. MethodsEnzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the concentration of serum IL-8, IL-10 before and after the treatment. The changes were also analyzed on the effects of small dose of glucocorticoid therapy. Results①RA patients had higher IL-8 concentration than healthy controls before treatment(P<0.05). After treatment, the concentration was significantly decreased(P<0.05), but still higher than that of the normal control group (P<0.05). ②Compared with normal control, RA patients had significant lower concentration (P<0.05). Moreover, treatment increased the concentration of IL-10 in serum (P<0.05), but there was no statistical difference between treatment group and normal controls (P>0.05). ③No correlation was found between IL-8 or IL-10 and ESR, CRP, PLT in RA group. ④ IL-8 concentration in low-dose glucocorticoid treated group was significantly lower than that in non-hormone treatment group. ConclusionIL-8 may play an important role in the pathogenesis of RA, and can be used as a valuable index to monitor the inflammatory process of RA; serum IL-10 may have anti-inflammatory and immunosuppressive effects on the pathogenesis of RA; small dose of glucocorticoid can effectively suppress inflammatory reaction in patients with RA.

[Key words]Rheumatoid arthritis; Interleukin-8; Interleukin-10; Glucocorticoid

通信作者：陶金辉，tao2002055@aliyun.com

基金项目：2012年度安徽省自然科学基金项目(1208085MH141)

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.04.005