吴　剑　周晓红　李真华　葛家华

CD133在涎腺腺样囊性癌中的表达及其意义

吴剑周晓红李真华葛家华

[摘要]目的检测CD133在人涎腺腺样囊性癌组织中的表达水平，探讨其表达水平与腺样囊性癌生物学行为的关系。方法收集人涎腺腺样囊性癌石蜡标本25例，人口腔鳞状细胞癌石蜡标本23例为阳性对照组，腮腺正常组织标本11例为阴性对照组，免疫组化方法检测3组样本中CD133的表达水平，结合临床数据分析CD133的表达与腺样囊性癌发病及生物学行为之间的关系。结果CD133在人涎腺腺样囊性癌中的表达较正常腮腺组织明显增高，在口腔鳞状细胞癌中没有表达，组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD133的高表达可能与人涎腺腺样囊性癌的发生、发展有一定关系。

[关键词]CD133；腺样囊性癌；免疫组织化学

作者单位： 400030重庆市肿瘤医院

近年研究发现CD133在多种肿瘤中表达，如：白血病[1]、脑肿瘤[2]、肺癌[3]、前列腺癌[4]、胰腺癌[5]、恶性黑色素瘤[6]、结肠癌[7]等，可能跟这些肿瘤的侵袭能力、免疫逃逸、耐药性等有关。

本研究采用免疫组织化学方法检测分析CD133在涎腺腺样囊性癌中的表达情况，并结合临床资料进行统计学分析，初步研究其表达水平与临床分期及肿瘤进展之间的关系。现报道如下。

1材料与方法

1.1标本收集人涎腺腺样囊性癌石蜡标本共25例，均为2003年1月至2008年12月四川大学华西口腔医院头颈肿瘤外科收治的患者，所有患者均确诊为涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)，均接受原发灶扩大切除术，未进行非手术治疗(化疗、放疗、热疗或基因治疗)。其中男性13例，女性12例，年龄28～77岁，平均48岁，肿瘤均位于腮腺内。T1期4例，T2期6例，T3期10例，T4期5例(UICC[8,9]TNM分期)。每位患者的临床数据包括年龄、性别、肿瘤直径、临床分期、淋巴结状态、组织学分级等，参照WHO的分级标准。选取22例口腔鳞状细胞癌和11例正常腮腺组织作为阳性和阴性对照。

1.2主要试剂兔抗人CD133多克隆抗体采用Abcam生产的rabbit polyclonal to CD133，CD133 抗体浓度为1 ∶100。

1.3实验步骤如下按照免疫组化SP法操作：载玻片防脱水剂处理后，切片常规脱蜡及水化，枸橼酸盐抗原热修复，滴加CD133 (1 ∶100)过夜，滴加二抗带生物素的山羊抗兔IgG，DAB试剂盒显色，苏木素复染显微镜观察。

1.4结果评价CD133蛋白的阳性表达为棕黄色颗粒，位于胞膜和胞浆。根据Alazawi等[10]的描述设计一个半定量的分级评分系统，用于评估组织块中CD133蛋白的表达。评分系统依据如下，0：整个组织块中未见到染色；Ⅰ：少量膜染色；Ⅱ：片状非细胞膜染色；Ⅲ：细胞外周染色占组织的1/3；Ⅳ：细胞外周染色占组织的2/3；Ⅴ：细胞外周染色遍布整个上皮。

1.5统计学方法将所得数据输入SPASS 14.0统计软件进行处理，计数资料用例或率表示，进行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1免疫组化检测结果正常腮腺组织中有少量的CD133的表达，主要分布在导管的管壁上，而CD133在腺泡和其他组织中的阳性染色较少。在涎腺腺样囊性癌中CD133的表达明显比另外两个对照组增多，呈团块状聚集。而人口腔鳞状细胞癌石蜡标本中未检测到CD133蛋白的表达。见图1、2。

2.2临床数据与免疫组化结果肿瘤的组织学分级与CD133的表达水平有关(r=0.354，P<0.05)，即与肿瘤的增殖和分化、分期有关，但CD133与肿瘤发病的年龄、性别、是否有周围神经侵袭等无关，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

3讨论

1997年 Miraglia等[1]发现了一种新的造血干(祖)细胞表面标志AC133蛋白，该蛋白在第七届国际白细胞分化抗原工作组会议上被正式命名为CD133，并认为是多种干(祖)细胞的表面标志之一。CD133作为肿瘤干细胞的标志在许多实体肿瘤中已经被证实，包括直肠癌[7]、胰腺癌[5]、 肝癌[11]、脑恶性胶质瘤[12]、肺癌[3]和前列腺癌[4]及恶性黑色素瘤[6]等，其中也包含头颈部的肿瘤，如：喉癌[13]，但是在涎腺腺样囊性癌中的研究未见报道。最近研究发现，CD133与肿瘤的多方面生物学特性相关，可能在这些方面对肿瘤起着调控作用，例如：CD133参与细胞的信号转导[12]，CD133参与细胞的免疫逃逸[14]，CD133 参与细胞的药物耐受[15]，CD133还参与了肿瘤的放疗抵抗[16]等。

表1　CD133免疫组化评分和临床参数之间的联系(例)

注：与同项目比较，△P>0.05；与同项目比较，*P<0.05

腺样囊性癌是涎腺中最常见的恶性肿瘤之一，在小涎腺中发病率较高，肿瘤易沿血循环发生远处转移，转移率高达40%，易侵犯神经，沿神经远处转移，淋巴结转移少见，术后复发率高达30%～50%，其高转移率和复发率是患者死亡的主要因素，而肿瘤易侵犯神经并沿神经扩散是其复发的重要因素，也是涎腺腺样囊性癌重要特性之一。目前，研究认为腺样囊性癌嗜神经侵袭性的主要机制是：肿瘤组织的施万(Schwann)细胞分化[17,18]，导致了其嗜神经的特性及侵犯神经并沿着神经转移的能力；除了肿瘤的施万细胞分化外，还有一些神经介质也参与了肿瘤侵犯神经的过程，如神经营养因子及其受体、神经生长因子、神经细胞黏附分子[19-21]等。

研究发现，具有较高的周围神经侵袭能力的实体瘤还包括以下几种：直肠癌[7]、胰腺癌[5]、 肝癌[11]、恶性黑色素瘤[6]等。那么他们之间有什么共同的机制么？根据文献报道，我们发现CD133均在这类肿瘤中高表达，并作为重要的肿瘤干细胞标志物，那么CD133在这类肿瘤中肯定扮演着重要的角色。既然，CD133作为神经系统肿瘤干细胞的标志物早已明确，根据干细胞的特性，神经肿瘤干细胞在一定条件下能分化出相应的神经系统细胞及神经介质，如施万细胞，以及神经生长因子、营养因子和神经细胞黏附分子等。结合目前对腺样囊性癌嗜神经侵袭性的机制的研究，我们推论这类肿瘤的嗜神经侵袭特性可能与CD133有关，但是这种关联需要进一步的实验验证。本实验采用免疫组化的方式证明了腺样囊性癌中有CD133的高表达，而正常组织中CD133的表达量较少，可以初步认为CD133与腺样囊性癌的发生发展相关。但是，本实验未能进一步揭示CD133与腺样囊性癌神经侵袭之间的关系。

研究发现，CD133只在内皮祖细胞表达[22]，在成熟内皮细胞上不表达[23]。多数学者认为，涎腺组织是由润管细胞等不成熟的内皮细胞发展而来的，本实验中CD133在这些导管内皮细胞上的表达，与该观点符合。在正常的涎腺组织中有少量CD133的表达，基本上都位于导管系统的内皮细胞中，其余部位无表达，而鳞状细胞癌中没有表达也进一步验证了这一理论。

CD133与肿瘤的增殖和分化有关，CD133的表达水平越高，肿瘤组织的分化越差，恶性程度越高，分期越晚，与大多数研究的观点一致[24]，但是CD133表达水平与患者的发病年龄、性别、原发灶大小、神经浸润等均无明显关联。

本实验中CD133的表达水平在嗜神经组和非嗜神经组之间差异没有统计学意义，但是在周围神经侵袭阳性组中，CD133的表达水平与腺样囊性癌的嗜神经侵袭能力及分期有关，随着CD133表达的增加，肿瘤发生神经侵袭的程度增加。但是，我们的实验样本含量相对较小，没有继续对CD133表达水平与神经侵袭之间的关系进行定量实验，所以这种关联需要进一步的实验验证。本实验中仅涉及显微镜下病理标本中的神经是否受到侵袭、侵袭程度如何，以及病史记录中有无神经症状等的回顾性研究，样本选择的偏倚性大，可靠的结论仍需要大量的实验支撑，需要建立可靠的动物模型以及定量实验等才能得出进一步的数据，以证明CD133与神经侵袭的相关性。

综上，本实验从免疫组化的角度揭示了CD133在腺样囊性癌中的表达相对于正常组织明显升高，其高表达可能与肿瘤的增殖和分化有关，与患者的发病年龄、性别、原发灶大小等均无明显关联， CD133可能与腺样囊性癌的嗜神经侵袭特性有关。因此，CD133可能是一个较好的研究涎腺腺样囊性癌的分子标志。

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(2014-11-18收稿2015-01-21修回)

Expression of CD133 in adenoid cystic carcinoma and mechanism

WuJian,ZhouXiaohong,LiZhenhua,etal

ChongqingCancerHospital,Chongqing400030,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of CD133 in human adenoid cystic carcinoma，and explore the potential role and mechanism of CD133 in the progress of adenoid cystic carcinoma．MethodsTwenty-five paraffin cases of human adenoid cystic carcinoma tissues and 23 cases of human oral squamous cell carcinoma tissues and 11 fresh cases of normal salivary gland tissue were collected, and CD133 expression level in these three groups were detected using immunohistochemistry, then the relationship between CD133 expression and various clinical parameters was analyzed. ResultsAn obvious higher CD133 protein expression in salivary gland adenoid cystic carcinoma was detected while it was not found in oral squamous cell carcinoma, and its expression level was related to tumor proliferation and differentiation. The difference was statistically significant. ConclusionCD133 may play an important role in the generation and development of human salivary adenoid cystic carcinoma.

[Key words]CD133；Adenoid cystic carcinoma；Immunohistochemistry

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.04.003