胶乳增强免疫比浊法试剂盒测定胰岛素的性能评价

2014-10-31安徽省泾县人民医院242500郭喜

首都食品与医药 2014年6期

安徽省泾县人民医院（242500）郭喜

胰岛素是由胰岛β细胞所分泌的蛋白质类激素，是人体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。胰岛素测定可以反映胰岛素细胞的贮存和分泌情况，临床常用于作为诊断糖尿病和区分糖尿病类型的最可靠方法[1][2][3]。

目前临床实验室常用的胰岛素测定方法主要是化学发光法、ELISA法。化学发光法由于设备和试剂成本较高，临床常作为最后确认使用，而ELISA法由于过程繁琐，结果一般为定性，临床使用有限。胶乳增强免疫比浊法测定胰岛素是将抗体标记在纳米级胶乳的表面，血清中的胰岛素与试剂中的抗体在液相中相遇，即结合成抗原-抗体复合物，产生一定浊度，胶乳颗粒可以相应的增大该浊度变化。通过与相应的标准曲线做对照，可以由浊度变化计算得出血清中胰岛素的浓度。笔者从准确度、精密度、线性、稳定性、抗干扰能力和相关性对美迪生物的胶乳增强免疫比浊法胰岛素测定试剂盒【注册号：浙食药监械（准）字2012第2400072号，执行标准：YZB/浙3033-2012】进行了评价。

1 材料与方法

附表1 批内胰岛素测定结果（n＝36）

附表2 批间胰岛素测定结果（n＝108）

1.1 材料

1.1.1 标本来源收集本院内分泌科住院病人EDTA抗凝血，共30份，标本在采集后2h内检测完毕。标本于-80℃保存待用。

1.1.2 仪器、试剂和应用参数 ①检测系统一：AXSYM雅培全自动化学发光仪及其胰岛素配套试剂、校准品和质控品；②检测系统二：BS400迈瑞全自动生化分析仪，胰岛素测定试剂（胶乳增强免疫比浊法，美迪生物）、校准品和质控品；应用参数：试剂一（200μl）、试剂二（40μl）、样本量（8μl）、主波长（600nm）、测定方法（速率法）、孵育时间（300s）、延迟时间（60s）、反应时间（120s）、反应方向（正反应）、定标方式（两点线性）。

1.2 方法统计学分析采用Microsoft Excel2007，SPSS13.0统计软件。回归分析采用Passing-Bablok回归，回归线性检测采用Cusum方法检测，P＜0.05表示线性回归偏倚有统计学意义。相关性分析采用Pearson相关，P＜0.05表示具有统计学意义。

2 实验与结果

附图1 胰岛素线性试验图

附图2 美迪生物和雅培化学发光的结果比较

2.1 准确度采用中国药品生物制品检定所人单峰胰岛素对照品（批号：0526-9501）配置成四个浓度标准（S12.5μIU/ml、S210μIU/ml、S350μIU/ml、S4100μIU/ml），采用胰岛素胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒在BS400全自动生化分析仪上测定三次，结果均在标示值的±10%内，符合标准要求。

2.2 精密度随机选取胰岛素水平为≤3μIU/ml（A1）、3～23μIU/ml（A2）、23～50μIU/ml（A3）、≥100μIU/ml（A4）的4个样本，分别混匀后分装于子弹头，于-80℃保存。测定时重新溶解测定，上、下午各检验3次，三批不同试剂连续检测6d。批内结果见附表1，批间结果见附表2。

2.3 线性选取两份足量的浓度分别为0.31、108.62μIU/ml血清样本，按以下表格比例混合后用以上试剂盒重复测定三次，取平均值为实测值为Y，理论值为X，用SPSS13.0软件拟合方程，结果Y＝0.9771X-0.2012，R2＝0.9993。见附图1。

2.4 干扰试验取一份胰岛素浓度11.2μIU/ml的血清样本，分别加入高浓度的胆红素、血红蛋白脂浊、类风湿因子以获得干扰样本，用同样的方法加入0.9%生理盐水为对照样品，每个样品按照随机次序测定10次，得出干扰样品和对照样品各自的X并计算干扰率。实验结果表明，在胆红素≤20mg/dl、血红蛋白≤450mg/dl、脂浊≤1550、类风湿因子≤450IU/ml时，测定偏差控制在5%，对本检测方法无明显干扰。

2.5 回收试验在胰岛素浓度为11.2μIU/ml和58.6uIU/ml的2份血清样本中，分别加入47.4μIU/ml的标准品，其回收率为96.6%～98.4%，平均为97.5%。

2.6 方法学比较随机取本院内分泌科住院病人20例血清，分别用美迪生物和雅培化学发光axsym的胰岛素测定试剂盒同时测定，测定顺序1-10，10-1，数据见附图2。相关方程为Y＝0.982X＋3.2655，相关系数（R2）＝0.991，表明美迪生物和雅培化学发光的结果之间有较高的相关性。

2.7 参考范围体检无肝、胆、胰、肾、肺和心脑血管疾病，血清血糖功能试验正常的健康成人，空腹采血，置不含添加剂的洁净玻管内，待血液凝固分离血清，剔除溶血和脂浊血清，2h内完成测定。共获得血清200份，每份血清测定一次，剔除离群值1份，剩余199份（男101、女98）测定结果用百分位数法求得P2.5～P97.5参考范围为：血清3.0～23.0μIU/mL。