邓桂明 吴萍 张志国 谭元生 王宇红 刘林

萝芙木为夹竹桃科植物萝芙木rauvolfia verticillata(Lour.)Baill.的根，分布于云南、广西、广东、台湾、贵州等地，具有降压，镇静，活血， 清热解毒等功效[1]。 目前市面上的萝芙木药材来源混乱，影响萝芙木的药材质量。萝芙木药材中提取出的生物碱，以利血平含量较高[2]。目前以利血平为主要成分开发出的一系列治疗高血压的制剂，在临床上得到了广泛的应用[3]。本文以利血平含量为指标、采用反相高效液相色谱法对不同产地萝荚木药材进行鉴别与含量测定，为萝芙木药材国家质量标准制定提供依据。

1 仪器与试药

1.1仪器 Agilent1100系列高效液相色谱仪(DAD检测器，Agilent1100工作站)；Adventurer TM SOPYJ-020万分之一电子分析天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；KQ-600型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；HH-S4型电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)；DHG-9076A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。

1.2试药 利血平对照品(批号100041-201012，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)，水为蒸馏水，流动相用色谱纯试剂，药材的提取用分析纯试剂。萝芙木药材采集于广西、广东、云南地区，经湖南中医药大学第一附属医院张志国主任药师鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1供试品溶液的制备[4]取萝芙木药材粉末(过四号筛)约3 g，置50 ml圆底烧瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，浸泡2 h，水浴加热回流1 h，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静止，取上清液，过0.45 μm微孔薄膜作为样品溶液。

2.2对照品溶液的制备[4]精密称取减压干燥至恒重的利血平对照品6.1 mg，置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，再取1 ml溶液用甲醇定容至10 ml容量瓶中，摇匀。每1 ml中含利血平24.4 μg。

2.3色谱条件 色谱柱：KromasilC18(5 μm,250×4.6 mm)；流动相：甲醇:0.1%三氟乙酸(55 ∶ 45,V/V)；柱温：30℃；流速：1 ml/min；检测波长：268 nm。

2.4系统适用性试验 将空白溶液、利血平对照品溶液及萝芙木样品溶液依次进样20 μl，见图1，从图中可看出，空白溶液对对照品溶液及样品溶液的测定无影响，利血平对照品溶液及云南萝芙木根样品溶液中利血平峰与相邻组分峰分离完全；理论塔板数不低于4000。

图1

产地样本含量(mg/g)入药部位云南A10.290根A20.220根A30.250根A4/茎A5/茎广西B1/茎B2/茎B3/根茎混杂B40.026根茎混杂广东C1/茎C2/茎C3/根茎混杂

注：“/”表示含量为0

2.4标准曲线 分别精密吸取上述对照品溶液(0.244 mg/ml)0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，2.0 ml，甲醇稀释至10 ml，分别测定，利血平浓度(Y)和其对应的峰面积(X)进行数据回归分析，回归方程为：Y=0.0182X+3.065l，r=0.9994；结果表明，利血平进样量在48.8～488 μg时，峰面积和进样量呈现良好的线性关系。

2.5精密性试验 精密吸取利血平对照品标准溶液10 μl，重复进样6次，利血平峰面积的RSD为1.50%(n=6)。

2.6稳定性试验 取供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，24 h时精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，测定。结果表明，24 h内利血平峰面积无明显变化(RSD为2.10%)。说明供试品溶液在规定贮藏条件下24 h内稳定性良好。

2.7重复性试验 取同一批次药材，采用同一试验方案，制备提取液6份，测定，测得利血平含量的RSD为1.10%(n=6)，表明方法重复性良好。

2.8回收率试验 精密量取6份已知利血平含量的供试液1.0 ml，精密加入对照品溶液1.0 ml，摇匀，精密吸取10 μl进样。算得平均回收率为99.3%，RSD为1.80%。

2.9萝芙木供试品测定 取各种萝芙木供试品，按照2.1项下方法浸提，精密吸取各供试品溶液20 μl，按“标准曲线的制定”项下操作并测定吸收峰面积，计算含量。结果见表1。

3 讨论

3.1波长的选择 利血平的紫外光谱在218nm、268nm 和292nm处均有较强吸收[5]，但218nm靠近末端吸收，292nm是肩峰，而268nm峰形平缓，干扰相对较少，故选择268nm为检测波长。

3.2提取方法与溶剂的选择 提取萝芙木中利血平时比较了超声提取和回流提取，结果回流提取优于超声提取；选择提取溶剂时用到了甲醇，50%的乙醇水溶液，氯仿等溶液结果甲醇溶液优于其他溶液。

3.3萝芙木入药部位的不同 现在市面上萝芙木药材入药比较混杂，有根入药，茎入药，根茎甚至带叶一起入药，本文考察的不同产地与入药部位的萝芙木药材中利血平含量有显著差异，以云南萝芙木根含量最高。由于萝芙木入药部位由单用根扩大到茎、枝叶一起使用，混入其他假劣药材等因素都会影响利血平的提取。现行国家标准中没有收录萝芙木药材，因此，急需规范萝芙木药材的质量标准。本文通过对不同产地萝芙木药材的反相高效液相分析，为以后萝芙木药材质量标准的制定提供了依据。

[1] 南京中医药大学.中药大辞典上下册.上海:上海科学技术出版社,2006:4117.

[2] 洪博,李文静,赵春杰.萝芙木中化学成分的研究.药学学报,2012，47(6):764-768.

[3] 胡蕾,刘松青.复方利血平片治疗原发性高血压的有效性和安全性系统评价.中国药房，2012，23(34):3219-3223.

[4] 邓明,曹福祥,龙绛血,等.云南萝芙木中三种生物碱含量的HPLC法测定.湖北农业科学，2011，50(1):2332-2333.

[5] 朱伟伟,王齐,邓晰朝.不同产地催吐萝芙木中利血平含量的高效液相色谱分析.光谱实验室，2011，28(2):709-710.