刘 辉刘永利

高效液相色谱法测定三黄系列品种中盐酸小檗碱的含量※

刘 辉1刘永利2

目的建立三黄片、三黄胶囊等系列品种中盐酸小檗碱的HPLC含量测定方法。方法C18柱（4.6×150mm，5μm，Capcell pak C18 MGⅡ），以乙腈-水（1：1）（每1000ml流动相中含磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相，检测波长为265nm，流速为1ml•min-1，柱温为室温。结果此方法线性关系良好，平均加样回收率为99.54%。结论本方法分离度好，结果准确可靠。

HPLC；盐酸小檗碱；三黄片；三黄胶囊

三黄系列品种包括三黄片（糖衣片、薄膜衣片）、三黄胶囊，均是由大黄、黄芩浸膏与盐酸小檗碱等三味中药组成的复方制剂，有清热解毒、泻火通便之功效，为中医临床常用中成药。盐酸小檗碱为方中主药，关于其含量测定方法，文献报道较多，以高效液相色谱法最为常见，另外还有液相色谱质谱联用法、毛细管电泳法等[1-6]，为保证药品质量，笔者利用HPLC法对此系列品种的盐酸小檗碱进行了含量测定方法研究。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Shimadzu 2010、LC20A（四元泵、自动进样器、二极管阵列检测器），天平：Mettler AE240，盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110713-200609，105℃干燥5小时，按含（C20H18CINO4）为98.1%计算）。乙腈为色谱纯，水为去离子水，其它试剂为分析纯。

样品来源见表2，阴性样品自制。

2 色谱条件

C18柱（4.6×150mm，5μm，Capcell pak C18 MGⅡ），以乙腈-水（1：1）（每1000ml流动相中含磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相，检测波长为265nm，流速为1ml•min-1，柱温为室温。理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于7000。

3 方法与结果

3.1 溶液的制备

3.1.1 对照品溶液的制备精密称取105℃干燥5h的盐酸小檗碱对照品0.01059g，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

3.1.2 供试品溶液的制备取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细（或取胶囊装量差异项下的内容物，混匀），取0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2%盐酸甲醇20ml（胶囊加50ml），密塞，称定重量，超声处理（功率 160W，频率40MHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.1.3 阴性溶液的制备按处方量取除盐酸小檗碱外的其它药材，按制法项下方法制备阴性样品，取阴性样品0.1g，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

3.2 线性关系考察精密吸取浓度为 0.1039mg/ml的对照品溶液1、2、5、10、15、20µl，进样测定，以进样量（µg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y=4481034.8x＋4175.5（r=0.9999），表明盐酸小檗碱在0.1039～2.0778µg范围内呈良好的线性关系。

3.3 专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液及不含盐酸小檗碱的阴性溶液，按上述色谱条件测定，所得色谱峰峰形对称，分离度良好，阴性溶液中在与盐酸小檗碱相应保留时间处无色谱峰，表明阴性无干扰，专属性好（见图1、2）。

图1 对照品、三黄片样品、阴性样品色谱图

图2 对照品、三黄胶囊样品、阴性样品色谱图

3.4 重复性试验取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，分别取0.08、0.10、0.12g各3份，精密称定，按3.1项下方法制备供试品溶液，进样测定，结果平均含量为12.19mg/g，RSD为1.04%，表明本法重复性良好。

3.5 稳定性试验取同一份供试品溶液，分别在0、1、3、6、8、13、18、21h测定，结果峰面积RSD为0.65%，表明供试品溶液至少在21h内稳定。

3.6 准确度试验取3.4项下的样品粉末（含量为12.1907mg/g），称取9份，每份0.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入三种不同浓度盐酸小檗碱对照品的 0.2%盐酸甲醇溶液（浓度分别为0.020778mg/ml、0.031166mg/ml、0.041555mg/ml）20ml，自3.1项下供试品溶液制备中“密塞，称定重量”起同法制备供试品溶液，测定含量，结果见表1。

表1 准确度试验结果(n=9)

3.7 样品测定取不同厂家样品，按3.1项下方法测定含量，结果见表2。

表2 样品测定结果

4 讨论

4.1 小檗碱为生物碱，在C18柱上保留较弱，而且峰形易拖尾，本文所用流动相PH值为5.5，大于其pKa（2.47）[7]，而且流动相中加入离子对试剂，所得色谱峰形对称，保留时间稳定，经试验，能适应多个厂家不同型号的色谱柱，具有广泛的适用性。

4.2 目前三黄系列品种有 200多个批准文号，近100个生产厂家，其执行标准不一，特别是三黄胶囊未对盐酸小檗碱含量进行控制，本文对多个厂家样品测试均能得到满意的结果，可为日后统一标准作参考。

4.3 分别考察了甲醇、盐酸-甲醇（1：100）、0.2%盐酸甲醇、流动相作提取溶剂，结果表明，用0.2%盐酸甲醇为提取溶剂，超声30min提取率高。

4.4 盐酸小檗碱在265nm和348nm有两个最大吸收峰，经试验，两个波长对色谱行为无甚影响，但265nm吸收较高，故选为检测波长。

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[7] 罗懿妮,赖宇红,薛巧,等.盐酸小檗碱RP-HPLC测定条件的比较[J].中药材,2004,27(9)：647-649.

Determination of Berberine Hydrochloride in Sanhuang series by HPLC

Liu Hui Liu Yongli

ObjectiveTo establish the determination method of Berberine hydrochloride in Sanhuang tablet and Sanhuang capsule by HPLC.MethodsThe C18 column(4.6×150mm,5μm, Capcell pak C18 MGⅡ)was used in this method,and a mixture acetonitrile-water(1:1)(3.4g pltassium di hydrogen phosphate and 1.7g sodium dodecyl sulphate were in 1000ml mobile phase) as a mobile phase, detection wavelength 265nm.ResultsThis method showed a good linear relationship, the mean recovery was 99.54%.ConclusionThis method showed a good separating degree and reliable.

HPLC; Berberine hydrochloride; Sanhuang tablet; Sanhuang capsule

R927.2

A

1673-5846(2013)07-0026-03

1常州市武进中医医院，江苏常州 213161

2河北省食品药品检验院，河北石家庄 050011

河北省自然科学基金资助项目：中成药质量标准模式创新研究（项目号：C2011320007）

刘辉（1971.10-），男，江苏常州人，学士学位，副主任中药师，主要从事中药鉴定、制剂和临床药学等相关工作。Tel：0519-86582510，E-mail：liuhui71101@sina.com。