王 玹张 翔倪 斌朱宏辉赵 帅苏 波苏 琦*（ 长沙市第三医院，湖南 长沙43000； 南华大学肿瘤研究所，湖南省高校肿瘤细胞与分子病理学重点实验室，湖南 衡阳 400）

AP-2γ在胃癌中表达的临床病理意义

王 玹1，2张 翔2倪 斌1朱宏辉1赵 帅1苏 波2苏 琦2*（1 长沙市第三医院，湖南 长沙430100；2 南华大学肿瘤研究所，湖南省高校肿瘤细胞与分子病理学重点实验室，湖南 衡阳 421001）

目的 研究 AP-2γ 表达与胃癌发生、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期的关系。方法 将 81 例胃癌、胃黏膜癌前病变 26 例及正常胃黏膜组织 34 制成组织芯片，采用免疫组化技术检测胃癌、癌前病变及正常组织中 AP-2γ 表达。结果 AP-2γ 表达在胃癌 76.54% 与癌前病变 69.23% 明显高于正常胃黏膜 35.29%(P＜0.05)。癌前病变低于胃癌 (P＜0.05)。高分化腺癌 AP-2γ 表达率 40.00% 明显低于中分化 70.59% 与低分化腺癌 81.36% (P＜0.05)。而低分化腺癌显著高于中分化腺癌 (P＜0.05)。≤ 3.0cm 表达 59.38% 低于 ＞3.0cm的 87.76%(P＜0.05)。淋巴结转移 83.64% 明显高于无转移 61.54%(P＜0.05)。Ⅰ + Ⅱ期表达 59.38% 明显低于Ⅲ + Ⅳ期 87.76%(P＜0.05)。结论 AP-2γ 在胃癌高表达与胃癌的发生、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期密切相关，其可能是胃癌侵袭转移的重要标记。

胃癌；AP-2γ；组织芯片；免疫组织化学

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一。据2008年统计，约100万新发病例与74万死亡病例，分别占所有肿瘤新发病例与死亡病例的8%与10%。东亚、东欧与南美地区发生率最高，70%新发与死亡病例发生在发展中国家[1]。胃癌传统治疗方法是外科手术切除、化疗及放疗，由于患者就诊时大多已经发生侵袭转移，从而疗效差。因此，研究胃癌侵袭转移的分子机制，寻找其关键标记，为早期诊断、预后判断及靶向干预治疗具有十分重要的临床意义。

近年来，AP-2γ在肿瘤细胞迁移侵袭中的作用引起了广泛关注[2]。研究表明，AP-2γ蛋白在乳腺癌、卵巢癌、生殖细胞瘤、前列腺癌等肿瘤组织中高表达[3-6]。目前，尚未见胃癌的报告。本研究采用自制组织芯片检测AP-2γ在胃癌中的表达，并探讨其临床病理意义。

1 材料与方法

1.1 材料

组织芯片收集南华大学附属医院与长沙市三医院2010至2012年间胃癌手术切除标本81例，全部病例均经HE切片复读确认，其中，男性56例，女性25例；肿块体积32例≤3.0cm，49例＞3.0cm；高分化腺癌5例，中分化腺癌17例，低分化癌59例。淋巴结转移55例，无淋巴结转移26例。TNM分期Ⅰ+Ⅱ期32例，Ⅲ+Ⅳ期49例。另外，癌前病变（肠化与非典型增生）26例，正常胃黏膜34例。

1.2 组织芯片制作

组织芯片仪及其2mm组织穿刺针均为Beecher Instruments产品。制作主要步骤如下：①模块制备：石蜡与蜂蜡（上海华灵）混合为7:3，制成2.2cm×3.5cm×1cm受体蜡块，设计5×10点组织列阵，用组织芯片仪打孔制成带孔空白蜡块。②组织芯片制备：将组织蜡块放在39～42℃水浴中软化3min，选定病变部位，逐个取出宽2mm，高3mm的组织柱，随即推入预先设计的空白蜡块的相应孔内，排布成组织芯片，将组织芯片面朝下放在玻片上，于37℃放置30min，轻压玻片使组织柱在模块中排平。

1.3 免疫组化染色

AP-2γ单克隆抗体（sc-12762）购自Santa Cruz Biotechnology，SP试剂盒、DAB显色剂、0.1M PBS、0.01M柠檬酸盐抗原修复液、EDTA修复液均购自福州迈新生物技术公司，按试剂盒说明进行。结果判定：AP-2γ阳性表达为棕黄或棕褐色，定位于胞浆或胞核。根据阳性细胞染色程度及着色细胞百分率进行记分：0分不着色，1分浅棕色，2分深棕色；着色细胞＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，＞50%为3分。两种分值相加，1分为（-），2分为弱阳性（+），3分为阳性（++）；＞4分为强阳性（+++）。

1.4 统计学分析

采用SPSS 16.0软件进行统计学处理分析，不同组间的比较采用χ2检验，组间等级资料采用行×列表χ2检验，P＜0.05有统计学意义。

2 结 果

2.1 组织芯片制备结果

本研究制作5×10组织芯片蜡块3个，每个均以规则的点阵方式植入相同直径的组织样本，组织点阵排列整齐，组织位点的形态可观测率为97.21%。

2.2 AP-2γ在胃癌中表达

图1与表1显示，AP-2γ分别在胃癌与癌前病变表达76.54%与69.23%明显高于正常胃黏膜35.29%（P＜0.05）。癌前病变低于胃癌（P＜0.05）。且正常胃黏膜仅在胞浆表达弱阳性，癌前病变可见胞浆与胞核表达，而胃癌不仅在胞浆高表达，而且在胞核表达强阳性。提示AP-2γ表达与胃癌发生密切相关。

图1 组织芯片检测AP-2γ在胃癌中表达 SP × 20A：正常胃黏膜；B：肠化；C：高分化腺癌；D：中分化腺癌；E：低分化腺癌；F：黏液癌

2.3 AP-2γ蛋白表达与胃癌分化程度的关系

图1与表1显示，高分化腺癌AP-2γ表达率40%明显低于中分化70.59%与低分化腺癌81.36%（P＜0.05）。而低分化腺癌显著高于中分化腺癌（P＜0.05）。并且，随着分化程度越低，AP-2γ不仅胞浆高表达，而且核内阳性更显著。表明AP-2γ表达与胃癌分化程度有关。

表1 AP-2γ在胃癌表达与病理临床的关系

2.4 AP-2γ与胃癌临床病理指标的关系

表1所示，男性与女性胃癌患者AP-2γ表达差异无统计学意义（P＜0.05）。肿瘤体积≤3.0cm明显低于＞3.0cm（P＜0.05）。有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者（P＜0.05）。Ⅰ+Ⅱ期明显低于Ⅲ+Ⅳ期（P＜0.05）。表明AP-2γ表达与肿瘤大小、淋巴结转移和临床分期有关。

3 讨 论

AP-2γ是转录因子AP-2家族成员之一，其通过控制基因转录，在肿瘤发生中调节有关的基因参与细胞增殖，细胞周期调控，细胞黏附和侵袭，从而发挥重要生物功能[2]。

研究显示，AP-2γ高表达可促进乳腺癌增殖，沉默AP-2γ 可发生p21基因部位获得活性染色质构象与基因表达上调，导致p21蛋白表达增加和G1/S阻滞[3]。雌激素受体α（ERα）在乳腺癌进展起着关键作用。全基因组分析显示，大量的AP-2γ与ERα结合共同集中在整个基因组。AP-2γ以配体不依赖的方式结合ERα结合位点ERBS，而干扰AP-2γ表达可抑制结合ERα DNA，大范围的染色质相互作用以及基因转录。表明AP-2γ以不依赖的方式结合ERBS与乳腺癌发生有关，其是一种新的ERα介导转录的协同因子[7]。Allouche等证明，RNA干扰乳腺癌BT-474细胞AP-2γ可抑制内源性ERBB2 mRNA与蛋白表达水平[8]。Ku蛋白与AP-2γ相互作用可促进乳腺癌细胞ERBB2 mRNA和蛋白水平增加[9]。采用ChIP、序列分析、报告基因检测、实时定量PCR、电泳凝胶迁移实验和免疫印迹等方法从乳腺癌MDAMB-453细胞的基因组获得邻近AP-2γ与乳腺癌癌发生相关的HER-2、CDH2、HPSE和IGSF11靶基因。AP-2γ表达的增多或减少都会显著影响这些靶基因的表达。因此，AP-2γ可作为治疗乳腺癌靶点[10]。

Qin等发现，AP-2γ在前列腺癌细胞中高表达，并与ErbB2启动子区域结合，可激活雄激素受体活性和限制雄激素浓度的前列腺癌细胞生长的介导因子ERBB2基因转录，促进前列腺癌细胞的生长及前列腺特异性抗原分泌[4]。Biermann等免疫组化检测2例松果体生殖细胞瘤、28例转移性生殖细胞瘤和10例睾丸生殖细胞瘤表明，AP-2γ是精原细胞瘤转移或原发性性腺外精原细胞瘤最好的标记[11]。Hoei-Hansen等检测209例睾丸生殖细胞瘤发现，50%睾丸原位癌和33.9%生殖细胞瘤表达AP-2γ[12]。

基因剔除小鼠模型显示，AP-2γ对胚外细胞向滋养层细胞系分化的作用是重要的，表明AP-2γ是能使未分化前体或瞬时扩增细胞的增殖的分子，在肿瘤中的重新表达与去分化和进展相关[13]。Salonen等发现，大多数卵巢无性细胞瘤与生殖细胞瘤AP-2γ高表达，而卵黄囊瘤和未成熟畸胎瘤大多数则没有发现，并且，AP-2γ高表达卵巢生殖细胞肿瘤预后较差。因此，AP-2γ可以作为恶性卵巢生殖细胞肿瘤辅助诊断依据[5]。Ødegaard等采用免疫组化检测13例正常卵巢组织，75例交界瘤，22例I期卵巢癌和306例II-IV期晚期卵巢癌显示，37%交界瘤，59% I期卵巢癌和83%晚期卵巢癌的肿瘤细胞核中表达AP-2γ，良性卵巢组织均表达阴性，表明AP-2γ表达与卵巢癌发生有关。此外，晚期卵巢癌的实质性病变与渗出物中AP-2γ表达显著，特异性局限于渗出物的癌细胞，提示AP-2γ在肿瘤进展中起着重要作用[14]。

本研究结果显示，AP-2γ在胃癌表达明显高于癌前病变和正常胃黏膜，癌前病变高于正常胃黏膜；随着分化程度降低表达越高；≤3.0cm表达明显低于＞3.0cm；淋巴结转移表达明显高于无淋巴结转移；Ⅰ+Ⅱ期表达明显低于Ⅲ+Ⅳ期。且正常胃黏膜仅在胞浆表达弱阳性，癌前病变可见胞浆与胞核表达，而胃癌不仅在胞浆高表达，而且在胞核表达强阳性。随着分化程度越低，AP-2γ核内阳性更显著。表明AP-2γ表达与胃癌发生、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移和临床分期有关，其可能是胃癌侵袭转移的重要标记。

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Expression of AP-2γ in Human Gastric Cancer and its Clinicopathologic Significance

WANG Xuan1,2, ZHANG Xiang2, NI Bin1, ZHU Hong-hui1, ZHAO Shuai1, SU Bo2, SU Qi2*
(1 The Changsha Third Hospital, Changsha 430100, China; 2 Cancer Research Institute, University of South China, Key Laboratory of Cancer Cellulal and Moleculay Pathology of Hunan Provincial University, Hengyang 421001, China)

ObjectiveTo investigate the clinicopathologic significance of AP-2γ expression in human gastric cancer.MethodsThe expression of AP-2γ in gastric cancer, precancerosis and normal tissue was examined by immunohistochemistry.ResultsThe level of expression of AP-2γ in gastric cancer was 76.54%. significantly higher than 69.23%in precancerosis and 35.29% in normal tissue (P＜0.05). AP-2γ expression in well-differentiated was 40% lower than 70.21%in moderately differentiated and 96.67% in poorly differentiated adenocarcinoma, and in moderately differentiated was lower than in poorly differentiated adenocarcinoma, respectively (P＜0.05). The expression of AP-2γ was 59.38% in volume≤3.0cm lower than in ＞3.0cm (P＜0.05). The expression of AP-2γ of lymph node metastasis was 83.64% (46/55) significantly higher than 61.54%in non-lymph node metastasis (P＜0.05). The expression of AP-2γ was 60.98% inⅠ+Ⅱ stage, significantly lower than 87.76% in Ⅲ+Ⅳ(P＜0.05).ConclusionsThe expression of AP-2γ is closely related to carcinogenesis, tumor size, pathological classification, lymph node metastasis and clinical stage in gastric cancer, it suggest that AP-2γ may be a important biomark of invasion and metastasis.

Gastric cancer; AP-2γ; Tissue chip; Immunohisochemistry

R735.2

：B

：1671-8194（2013）09-0001-03

国家自然科学基金（31000629）；湖南省卫生厅科研项目（B2008-067）

*通讯作者: