张守琳

（长春中医药大学附属医院，长春130021）

补肾健脾和利湿化瘀法对大鼠IgA 肾病模型的影响研究

张守琳

（长春中医药大学附属医院，长春130021）

目的观察补肾健脾，利湿化瘀法对IgA肾病模型大鼠血尿、蛋白尿的影响。方法选择60只SPF级雄性Wistar大鼠作为实验动物，随机分为正常组，模型组，中药低、中、高剂量组和血尿胶囊组，每组10只。采用口服BSA和尾静脉注射LPS方法建立IgA肾病大鼠模型。造模成功后自第9周起正常组和模型组给予蒸馏水4ml／（kg·d）灌胃，中药组给予中药汤剂4ml／（kg·d）灌胃；对照组给予血尿胶囊4ml／（kg·d）灌胃。上述治疗持续至12周末。观察治疗前后大鼠的一般状态；检测各时相尿红细胞计数、24h尿蛋白定量。结果①正常组大鼠一般状态良好，其余各组大鼠自第6周末开始出现精神萎靡、嗜卧、食欲减退、腹泻、体重减少及尿颜色改变等表现。各治疗组经给予治疗药物后上述症状于1-2周左右逐渐缓解。②正常组大鼠尿检无异常；其余各组大鼠自第6周末开始尿红细胞24h尿蛋白定量明显增多，与正常组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）；经过治疗后，各治疗组尿红细胞计数及24h尿蛋白定量较模型组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05），但仍显著高于正常对照组（P＜0.05）；疗后各治疗组相比，补肾健脾，利湿化瘀中药组疗效优于血尿胶囊组，经统计学处理，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论补肾健脾，利湿化瘀法对IgA肾病模型大鼠有较好的治疗作用，是治疗Ig A肾病的有效方法，其中以中药中剂量组疗效较好。

补肾健脾；利湿化瘀法；IgA肾病；动物模型；实验研究

Ig A肾病在我国是常见的肾小球疾病，也是单纯性血尿的常见病因［1］。本课题组采用补肾健脾，利湿化瘀法治疗慢性肾炎血尿、蛋白尿近20年，疗效显著，为进一步探讨其疗效，我们开展了此项研究，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器

1.1.1 主要试剂牛血清白蛋白，购自上海生物工程有限公司；四氯化碳，购自上海化学试剂厂；蓖麻油，由上海化学试剂厂提供；脂多糖，由美国Sigma公司提供。尿蛋白定量试剂盒购自南京建成生物工程研究所；尿液分析试纸由广州高尔宝生物技术有限公司提供。

1.1.2 仪器光学显微镜，宁波；代谢笼，姑秀实验动物设备厂；大鼠灌胃针，由东西仪科技有限公司提供。

1.2 药物治疗组给予补肾健脾，利湿化瘀中药（由枸杞子、黄芪、女贞子、墨旱莲、小蓟、白茅根、丹参、益母草等组成），水煎后浓缩，给予大鼠灌胃，日1次；对照组给予血尿胶囊（由棕榈子、菝葜、薏苡仁组成；批号：国药准字Z20043081；由江苏天功帝益药业有限公司生产）灌胃，每日1次。

1.3 动物及分组选择6月龄SPF级雄性Wistar大鼠60只，体重在240～260g之间，由长春高新医学动物实验研究中心提供。大鼠共分为6组，每组10只。

1.4 实验方法

1.4.1 模型制备参照陆慧渝［2］等报道的方法：将牛血清白蛋白（bevine Serum albumin，BSA）以蒸馏水配成100g／L的浓度，以400mg／kg（4ml／Kg）灌胃，隔日1次，共8周；皮下注射四氯化碳（carbon tetrachloride，CCL4）0.1ml+蓖麻油0.3ml，每周1次，共9周；于第6周尾静脉注射脂多糖（lipopolysacc haride，LPS）0.05mg／只（以0.9%NaCl配成溶液0.25g／L，0.2ml／只）。正常组则给予4ml／kg的蒸馏水隔日灌胃1次，持续8周；皮下注射0.9%氯化钠溶液（0.9%Nacl）0.4ml／只，每周1次，持续9周；于第6周经尾静脉注射0.9%Nacl0.2ml／只。第9周随机选取模型组大鼠10只及正常组2只，麻醉后取肾组织行光镜检查验证模型是否成功。

1.4.2 给药方法造模成功后将大鼠随机分为5组，每组8只。正常组给予4ml／（kg·d）蒸馏水灌胃，每日1次；模型组给予蒸馏水4ml／（kg·d）灌胃；（补肾健脾，利湿化瘀中药简称为中药组）中药低、中、高剂量组分别给予给予中药汤剂4ml／（kg·d）灌胃（分别相当于生药量8g／kg·d，16g／kg·d，32g／kg·d）；对照组给予血尿胶囊4ml／（kg·d）灌胃（相当于生药量0.5g／kg·d）。上述治疗持续至12周末。

1.4.3 检测指标记录大鼠一般状态、尿液颜色，每周称体重1次。分别于0、4、6、8、10、12周末将各组大鼠放入清洁代谢笼，收集24h尿液，记录尿量，4000r／min离心10min后取上清。应用尿沉渣计数法检测尿红细胞个数。采用磺基柳酸法检测24小时尿蛋白定量。

1.5 统计学方法应用SPSS11.5软件包处理，计量资料采用均数±标准差（±S）表示，采用t检验。

2 结果

2.1 一般情况模型组大鼠死亡1只，其余各组均无死亡。正常组大鼠一般状态较好，其余各组大鼠自第6周后出现程度不等的毛色萎黄，精神萎靡、食欲减退、嗜卧、肛周红肿、腹泻、体重下降、皮下水肿及尿色改变。各治疗组经给予治疗药物上述症状于1-2周左右逐渐缓解。其中中药中剂量组和高剂量组缓解最快，模型组缓解最慢。

2.2 各组大鼠各时相尿红细胞计数的比较见表1。

表1 各组大鼠各时相尿红细胞计数的比较（χ±S，／ul，n=8）

由表1可以看出，正常组大鼠未出现血尿。模型组及各治疗组在第6周末开始出现镜下血尿，部分大鼠出现肉眼血尿，与正常组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；至12周末，各治疗组尿红细胞计数比模型组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05），但仍显著高于正常对照组（P＜0.05）；各中药组与血尿胶囊相比较，尿红细胞计数明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05），其中以中药中剂量组疗效相对较好。

2.3 各组大鼠各时相尿尿蛋白定量的比较见表2。

表2 各组大鼠各时相尿蛋白定量的比较（χ±S，mg／24h，n=8）

由表2可以看出，模型组及各治疗组在第6周末开始24小时尿蛋白水平增高，与正常组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；至12周末，各治疗组24小时尿蛋白水平比模型组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05），但仍显著高于正常对照组（P＜0.05）；各中药组与血尿胶囊相比较，24小时尿蛋白水平明显减少，差异有差异有统计学意义（P＜0.05），其中以中药中剂量组疗效相对较好。

3 讨论

IgA肾病在我国是常见的肾小球疾病，也是导致终末期肾病的重要原因。血尿、蛋白尿是该病的主要临床表现，本病控制不良，可发展为肾功能衰竭。对于24小时尿蛋白量＞2g／d或伴有轻度肾功能障碍者，现代医学主张激素或加用免疫抑制剂治疗，但对于少量蛋白尿或单纯血尿者尚缺乏有效治疗手段。因本病以血尿为主要临床表现，故本病归属到中医学“溺血”、“尿血”范畴。部分医家认为湿热、瘀血及风热交互为患，是导致本病缠绵不愈的主要因素，在治疗上强调清热利湿、活血化瘀、祛风为主［3-6］。但因本病病程长，缠绵难愈，运用清热利湿等祛邪方法为主治疗，在短期内虽有一定疗效，但血尿、蛋白尿仍反复发作，难以根治。究其原因笔者认为，血、蛋白均为人体的精微物质，血尿、蛋白尿长期不愈导致机体气血不足，脾肾亏虚。因此笔者认为单纯注重清热利湿，活血化瘀以治其标，而忽视健脾补肾扶其本，是导致目前临床疗效难以提高的主要原因。针对这一发病机理，本课题组采用补肾健脾，利湿化瘀法治疗IgA肾病，取得了较好的临床疗效。

《脾胃论·脾胃盛衰论》有云：“病脾则怠惰嗜卧，四肢不收，大便溏泄。脾既病，则其胃不能独行津液，故亦从而病焉。”本次研究结果表明，自第6周开始，模型大鼠开始出现毛色萎黄，精神萎靡、食欲减退、倦怠嗜卧、体重下降及尿色改变，尿红细胞计数和24小时尿蛋白定量也明显高于正常对照组，说明模型大鼠出现了脾肾两虚。肛周红肿、皮下水肿说明大鼠存在湿热内盛。各组大鼠经过治疗后自第10周开始尿红细胞计数和24小时尿蛋白定量与模型组相比均明显减少，至第12周末减少更为明显，经统计学处理，差异有显著性意义（P＜0.05），说明IgA肾病模型大鼠存在湿瘀内阻的病理机制。而中药治疗组总体疗效明显优于血尿胶囊组，其中以中剂量组改变明显，说明在清热利湿，活血化瘀治疗的基础上加用补肾健脾以固其本能够提高IgA肾病患者的临床疗效。临床研究也表明，补肾健脾，活血化瘀的方法能改善维持性血液透析病人的营养不良状态［7］，有利于机体抵抗力恢复，这可能是中药组疗效好于血尿胶囊组的主要原因，但其疗效作用机理尚需进一步探讨。

［1］叶任高.内科学［M］.5版.北京：人民卫生出版社，2000：528-530.

［2］陆慧渝，张巧玲，蒋小云，等.Ig A肾病大鼠模型的建立［J］．中国误诊学杂志，2011，（6）：1264-67．

［3］金春花，黄彦彬，于梅，等．张佩青治疗隐匿性肾小球肾炎血尿的经验［J］．中医杂志，2010，51（6）：499．

［4］戴立恒，曹式丽．从湿热论治肾性血尿的经验［J］．辽宁中医杂志，2007，34（5）：563．

［5］齐欢，何学红．何学红教授治疗肾性血尿经验［J］．吉林中药，2008，28（12）：869．

［6］何琳，孔庆歆．IgA肾病血尿的中医证治［J］．中国全科医学，2010，13（21）：2399．

［7］林启展，周敏，宋智智，等．健脾补肾活血膏方对维持性血液透析患者营养不良状态的影响［J］．中华中医药杂志，2012，27（6）：1709-1711．

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.10.101

1672-2779（2013）-10-0153-02

��韩世辉

2013-04-20）