鄢海燕等

[摘要] 目的 研究小鼠最大灌胃量及其对小鼠心电图和心肌组织的影响。 方法 采用不同体重的小鼠灌胃后测定胃最大容量；以PEG6000制备不同黏度的溶液，以不同灌胃量灌胃后，记录小鼠心电图T波变化，制备小鼠心肌组织病理切片，光镜观察。 结果 在一定的体重范围内，小鼠体重与其灌胃量间存在一定的线性关系。与空白组比较，20 g/100 ml和40 g/100 ml两种黏度的PEG6000灌胃后小鼠心电图T波变化没有统计学意义（P>0.05），小鼠心肌组织切片未见异常。 结论 可按线性关系推算小鼠的最大灌胃量；以最大灌胃量灌胃，在一定黏度范围内，小鼠的心电图及心肌组织未受影响。

[关键词] 小鼠；灌胃；最大耐受剂量

[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）01（b）-0004-03

Study on the maximum tolerant dosage of mice by gastric perfusion

YAN Hai-yan ZOU Chun-cai YANG Yang LI Ping DENG Xiao-yang

Pharmacy School of Wannan Medical College in Anhui Province，Wuhu 241002，China

[Abstract] Objective To study the maximum tolerant dosage of mice by gastric perfusion and examine the influence of the electrocardiogram and myocardial tissue. Methods The maximum capacity was determined by using different body weight of mice after gastric perfusion.PEG6000 solution with different viscosity was prepared，and the T wave changes in ECG were recorded after administrating various dosages by gastric perfusion.The pathological sections of myocardial tissue was prepared and observed by using light and electron microscopy. Results In a certain weight range，linear relationship exists between the weight of mice and the gastric volume.Compared with the blank group，T wave changes of ECG in mice after gastric perfusion with 20 g/ml and 40 g/ml PEG6000 solutions had no statistical difference（P>0.05），and myocardial tissue sections in mice showed no abnormalities. Conclusion Maximum intragastric volume of mice can be calculated according to the linear relationship；It has no effect of ECG and myocardial tissue with the greatest amount of intragastic gavage in a certain solution viscosity range.

[Key words] Mice；Gastric perfusion；Maximum tolerant dosage

在口服药物的药理药效研究中常要求以最大给药体积给小鼠灌胃，并习惯性规定灌胃最大容量以20 g体重1 ml药量为限度[1-4]，有的以每鼠0.8 ml为最大限度[5-8]。这种习惯性用法经预试验确认，在多数情况下不会因灌胃量问题而导致小鼠死亡[9-12]，但所给药量是否是最大灌胃量值得商榷，灌胃量对小鼠生理指标（如心电图）及组织（如心肌组织）的影响也未见相关报道。

1 材料与方法

1.1 仪器

AUW-220D型电子天平（日本岛津公司），1015型组织切片机（德国莱卡公司）；BP-600A全自动大小鼠无创血压测量系统（成都泰盟软件有限公司），CKX41显微镜（奥林巴斯公司），日立H-7650透射电子显微镜（日本日立公司）。

1.2 药品与试剂

氨基甲酸乙酯（乌拉坦）（批号：20130916，天津市光复精细化工研究所），聚乙二醇-6000（批号：20120908，天津市化学试剂三厂），无水乙醇（批号：20140405，天津市百世化工有限公司），苏木素-伊红染色液（醇液）（批号：20140311，无锡市江原实业技贸总公司）。

1.3 实验动物

SD健康小鼠（雌雄各半），体重16～38 g，合肥蜀山实验动物繁殖中心提供。

1.4 方法

1.4.1 生理情况下小鼠最大灌胃容量测定 取不同体重的小鼠100只，按（20±0.2）、（23±0.2）、（25±0.2）、（26±0.2）、（27±0.2）、（28±0.2）、（29±0.2）、（30±0.2）、（31±0.2）、（32±0.2） g分为10组，每组10只，雌雄兼有，麻醉后剖腹，暴露胃和小肠，然后用加蓝墨水的生理盐水灌胃至蓝墨水通过幽门时停止灌注，所消耗的生理盐水量就是在生理情况下小鼠灌胃的最大容量。

1.4.2 PEG6000溶液灌胃后对小鼠心脏的影响 取SD健康小鼠150只，随机分为实验组和对照组。实验组用20 g/100 ml、40 g/100 ml的PEG6000溶液灌胃，灌胃剂量为0.6 ml/20 g、1.0 ml/20 g、1.4 ml/20 g，对照组以相同剂量的生理盐水灌胃。各组小鼠用乌拉坦麻醉后仰卧固定，待稳定后记录灌胃后2、4、6、8、10 min的心电图。观察并比较两组心电图的变化。

1.4.3 小鼠心脏的病理切片观察 心电图记录完毕后放血处死小鼠，取心脏组织标本，用4%中性甲醛固定，按病理检验程序进行，常规石蜡包埋，切片，5 μm，HE染色，光学显微镜观察。

1.5 统计学处理

采用SPSS 11.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以x±s表示，采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 生理情况下小鼠体重与灌胃体积的关系

灌胃体积随小鼠体重的增加而增加，趋势逐渐变缓，而且在一定的体重范围内灌胃体积与小鼠体重呈线性关系，线性方程为：y=0.0836x-0.6161，r=0.9598（图1）。

图1 生理情况下小鼠体重与灌胃体积的关系

A.变化趋势曲线；B.线性关系曲线

2.2 PEG6000溶液灌胃后小鼠心电图的变化

不同浓度PEG6000灌胃后，与其相同灌胃剂量的空白组比较，心电图的T波变化值差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.3 心肌组织病理学结果

光镜观察心肌组织的病理学改变，不同浓度PEG6000灌胃后，与其相同灌胃剂量的空白组的心肌组织比较，未见组织病理学改变（图2）。

3 讨论

考察药物的黏稠度、小鼠胃容量对小鼠生理指标、组织的影响而确定一个可以普遍适用的灌胃体积数值十分必要[13-16]。若灌胃量偏小，达不到预期给药剂量；灌胃体积过大并超过胃内最大容积，重则小鼠死亡，轻则药液会沿着针管流出食道，甚至溢出口腔，不仅会使进入胃中的实际药量减少，而且过度舒张的胃壁会刺激并兴奋迷走神经，从而对心脏产生抑制作用，造成小鼠的心电图发生变化，心肌组织发生改变，影响药物特别是心血管疾病药物的药理药效实验结果。对小鼠最大灌胃量问题的考察与研究是药理药效研究的基础性工作，若不能准确把握给药体积，后续实验的准确性和重复性将难以实现[17-20]。

通常情况下，不同体重小鼠间的灌胃量是根据小鼠的体重比值进行换算。通过本实验生理情况下小鼠最大灌胃容量的测定，确认在一定的小鼠体重范围内，灌胃量和小鼠体重存在一定的线性关系，因此确定某一体重小鼠的最大灌胃容量后，可根据不同小鼠的体重情况按线性关系加以调整。

不同浓度的PEG6000溶液，黏稠度不同。本实验可知，与空白组比较，相同灌胃量的不同浓度PEG6000溶液灌胃后对小鼠心电图T波变化的影响差异无统计学意义（P>0.05），心肌组织病理切片也未见改变。在进行药理药效研究时，对于有一定黏稠度的制剂，尽可能提高药物浓度，可达到最大给药量。

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（收稿日期：2014-08-29 本文编辑：李亚聪）