刘红娟 （齐鲁动物保健品有限公司 山东 济南 250100）



浓缩对禽流感(H9N1型)病毒液中灭活剂甲醛含量的影响

刘红娟 （齐鲁动物保健品有限公司 山东 济南 250100）

采用UV法测定了不同甲醛浓度灭活后禽流感(H9N1)病毒液浓缩前、中、后的甲醛含量。结果表明：浓缩对病毒液中甲醛含量影响不大。

甲醛是生物制品研究与制造中最主要的灭活剂，适当浓度的甲醛可使微生物丧失增殖力或毒性，保持抗原性和免疫原性。浓缩是疫苗生产中提高病毒含量通常采用的方法。尤其是多联灭活疫苗的研制成功，更使得浓缩成为不可缺少的生产步骤。甲醛已经被WHO定为致癌和致畸物质，必须对制品中甲醛含量进行限制。《中华人民共和国兽药典》(2010年版)第三部中规定禽用灭活疫苗中甲醛含量应不超过0.2%(含40%甲醛)。为了确定浓缩对病毒液中甲醛含量的影响，为生产提供可靠的技术支持，本文以禽流感(H9N1)病毒液为例，按照《中华人民共和国兽药典》(2010年版)第三部中甲醛残留量测定方法对浓缩前后病毒液中甲醛含量进行了测定。

1 材料与方法

1.1 试药与仪器 甲醛(含量36.0%)；醋酸、醋酸铵、乙酰丙酮、无水乙醇、UV2501分光光度计(岛津公司)。中空纤维超滤膜截留分子量10KD(北京旭邦膜设备有限责任公司)。

1.2 样品 禽流感(H9N1)病毒液三批：20110203、20110204、20110205，分别加0.1%、0.2%、0.3%病毒液灭活后，用北京旭邦截留分子量为10KD的中空纤维超滤膜进行4倍浓缩，取浓缩前、浓缩中、浓缩后、流出液前段、流出液中、流出液后共18个样品。

2 试验方法

（1）试验原理：甲醛与乙酰丙酮及氨作用，生成黄色化合物二乙酰基二氢吡啶后，410nm下进行分光光度比色定量。（2）供试品溶液：用5.0ml移液管取供试品5.0ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：准确称取含量为35.9%的甲醛溶液0.2786g置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。（3）测定法：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各0.5ml，分别加醋酸-醋酸铵缓冲液10ml，置60℃恒温水浴15min，冷水冷却5min，放置20min后，在410nm波长处测定吸光度，按照下式计算：

3 试验结果

见附表。

附表 H9N1病毒液中灭活剂 (%)

批号浓缩前浓缩中浓缩后流出液前流出液中流出液后 201000160.110.130.120.140.110.12 201000170.190.210.220.210.230.20 201000180.300.320.310.290.310.31

4 讨论

中空纤维超滤膜是超滤技术中最为成熟与先进的一种技术。孔径以能截留物质的分子量表达，截留分子量可达几千至几十万。被过滤液在中空纤维外侧或内腔加压流动，分别构成外压式与内压式。超滤是动态过滤过程，被截留物质可随浓缩排除，不致堵塞膜表面，可长期连续运行。广泛用于净水、溶液分离和浓缩等领域。

甲醛分子量为30，和水分子量相差不多，均属于小分子物质，远远小于10KD的截留分子量，和水分子一样在溶液中呈随机分布：一部分留在浓缩液中，一部分随流出液排出。因此浓缩前后甲醛含量差异不大。

5 结论

浓缩前后病毒液中甲醛含量基本不变。浓缩不会造成病毒液中甲醛含量大幅上升，对于高倍浓缩疫苗或多联苗的制备有很好的指导意义。

[1] 中华人民共和国卫生部药典编委会. 中华人民共和国兽药典[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010.

（2012–05–24）

S852.65

A

1007-1733(2012)09-0021-01