刘晓敏，陈 虹

(1吉林医药学院附属医院，吉林吉林132013;2石河子大学药学院药理学系省部共建新疆特种植物药资源教育部重点实验室)

复方苦豆子(CK)由苦豆子、决明子、山楂等八味中药组成。本课题组研究发现其可改善血脂代谢紊乱状态并有降低血压的作用［1～3］。但这些均针对单独疾病模型进行研究，CK对高血压合并高脂血症复合模型是否能同时具有降压调脂作用，其作用机制如何?2006年1月～2007年12月，我们对这个方向进行了研究，为课题的进一步开展提供更宽的思路。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取健康清洁级Wistar大鼠，雄性，2～3月龄，体质量170～190 g，购自新疆维吾尔自治区实验动物研究中心(合格证号:医动字第2号)。

1.2 主要仪器 RBP-1B型清醒大鼠血压心率测定仪(北京中日友好医院);DL-5低速大容量离心机、GL-16M台式高速冷冻离心机(湖南凯达科学仪器有限公司);酶标仪(Thermo electron corporation); XH-6010Y放射免疫计数器(陕西二六二医疗仪器厂);PCUV-2501紫外分光光度计(日本岛津)。

1.3 主要试剂与试剂盒 复方苦豆子流浸膏(石河子大学省部共建新疆特种植物药资源教育部重点实验室自制，1 mL含生药2.50 g);胆固醇(美国进口);胆酸钠(上海蓝季科技发展有限公司);丙基硫氧嘧啶(上海复星朝晖药业有限公司);卡托普利片(上海安源安徽仁济制药有限公司);血脂康胶囊(北京北大维信生物科技有限公司);TC、TG、HDL-C试剂盒(温州津玛生物科技有限公司);LDL-C试剂盒(浙江东瓯生物工程有限公司);ET放射免疫分析测定盒(北京北方生物技术研究所);NOS测试盒(南京建成生物工程研究所);其他试剂均为分析纯。

1.4 模型建立及分组 按文献建立肾性高血压复合高脂血症大鼠模型［4］。复合模型建成后，选取造模成功的大鼠开始分组给药，每组12只，CK高、中、低剂量组［11.13 g/(kg·d)、5.56 g/(kg·d)、2.78 g/(kg·d)］;阳性对照组:卡托普利［0.01 g/(kg· d)］+血脂康［0.8 g/(kg·d)］;模型组:蒸馏水;假手术组(n=10):蒸馏水+基础饲料。每天灌服1次，上午10点灌药，晚上8点灌脂肪乳5 mL/(kg·学处理，实验数据以s表示。组间分析采用One-Way ANOVA两两比较得到相应的P值。以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 大鼠肾性高血压复合高脂血症模型的建立共80只大鼠，其中70只接受两肾一夹(2K1C)法造模手术，10只为假手术组。术后4周末所有实验大鼠测量血压，取血检测血浆TC、TG、HDL-C、LDL-C，与假手术组比较共有10只大鼠造模失败被剔除，建立成功复合模型共60只，造模成功率86%。造模组与假手术组比较，血压、TC、LDL-C明显升高，具有极显著性(P＜0.01)，HDL-C降低显著(P＜0.05)。说明肾性高血压复合高脂血症模型构建成功。结果见表1。 d)，每周称量大鼠体质量，连续灌胃8周。各组灌胃容积相同，不足之处灌胃蒸馏水达到一致。

1.5 观察指标及方法 体质量:每周同一时间称重1次，记录各组大鼠体质量的变化情况。尾动脉收缩压、心率:在给药8周，用RBP-1B型清醒大鼠血压心率测定仪测量血压、心率。肝脏脂质(TC、TG):给药8周末大鼠取血处死后，分离肝脏无菌生理盐水洗净，滤纸吸干，从中摘取动物肝脏0.5 g，放入玻璃匀浆器中，加入4.5 mL甲醇—氯仿混合液(1∶1)，研磨制成10%的肝匀浆，于14 520 g离心30 min，取上清液待测［5］。内皮素(ET):取血后，将血液迅速注入到含酶抑制剂的抗凝管中，低温离心(4℃，14 520 g，10 min)，分离血浆，－70℃保存待测。总一氧化氮合酶(T-NOS)、结构型一氧化氮合酶(cNOS):取血后，将血液置于肝素凝处理过的离心管中，14 520 g离心10 min后取上层血浆，－70℃保存待测。

1.6 统计学方法 采用SPSS13.0软件包进行统计

表1 大鼠实验4周末观察指标变化(s)

表1 大鼠实验4周末观察指标变化(s)

注:与假手术组比较，*P＜0.05，△P＜0.01

组别 血压(mmHg) TC(mmol/L) TG(mmol/L) HDL-C(mmol/L) LDL-C(mmol/L)假手术组 119.74±6.87 0.89±0.07 0.85±0.08 0.60±0.05 0.35±0.03造模组 159.37±18.79△ 5.06±0.47△ 2.37±0.19△ 0.31±0.04* 3.45±0.31△

2.2 CK对肾性高血压复合高脂血症大鼠体质量的影响 实验中大部分大鼠健康状况良好，模型组动物精神较差，饮食饮水少，皮毛粗糙少光泽，部分大鼠出现腹泻。各给药组大鼠之间饮食、二便无明显差别。各组体质量变化比较见表2。

2.3 CK对肾性高血压复合高脂血症大鼠血压、心率的影响 随着用药时间的延长，假手术组血压趋于平稳，处于正常范围内，模型组血压不断上升，到8周时血压达到180 mmHg。各组血压、心率变化比较见表3。

2.4 CK对肾性高血压复合高脂血症大鼠肝脏脂质(TC、TG)含量的影响 给药8周后，中剂量组、高剂量组与模型组比较肝脏TC、TG含量明显下降(P＜0.01);低剂量组降低幅度较小(P＜0.05)。结果见表4。

2.5 复方苦豆子制剂对肾性高血压复合高脂血症大鼠血浆ET、NOS的影响

表2 实验期间各组大鼠的体质量变化比较(g，s)

表2 实验期间各组大鼠的体质量变化比较(g，s)

注:与模型组比较，*P＜0.05，△P＜0.01;与假手术组比较，#P＜0.05，▲P＜0.01

组别 n 给药前 给药1周 给药2周 给药4周 给药8周假手术组 10 242.7±18.2 255.6±16.3 267.3±21.5 287.8±26.2 340.1±18.5模型组 12 246.4±14.7 266.7±23.5 260.3±19.2 250.2±17.7# 245.8±29.3▲高剂量组 12 247.4±12.5 257.7±13.2 250.4±12.1 268.1±17.6*# 317.9±26.3△#中剂量组 12 248.2±18.3 260.3±19.5 255.1±17.0 272.8±21.6*# 325.3±27.1△#低剂量组 12 249.6±17.4 256.8±17.7 250.7±15.2 256.5±25.6# 285.0±26.1△▲阳性对照组 12 250.8±13.9 255.3±18.5 249.9±17.7 278.6±27.8 315.6±28.3△#

表3 用药8周后CK对复合模型大鼠收缩压及心率的影响(s)

表3 用药8周后CK对复合模型大鼠收缩压及心率的影响(s)

注:与模型组比较，*P＜0.01;与假手术组比较，△P＜0.05，#P＜0.01

组别 n 治疗前收缩压(mmHg) 心率(次/min)治疗后收缩压(mmHg) 心率(次/min)假手术组 10 119.7±6.9 342.7±25.2 116.1±8.3 341.6±36.4模型组 12 159.2±7.5# 361.8±33.8△ 180.5±5.1# 379.3±37.6△高剂量组 12 159.7±13.5 369.7±34.8 135.6±8.6* 373.5±34.4中剂量组 12 157.9±10.8 372.6±36.7 133.3±12.2* 378.6±37.3低剂量组 12 159.1±11.9 387.3±34.5 169.3±10.0 382.6±35.5阳性对照组 12 159.4±11.2 369.6±36.7 131.2±10.5*368.4±36.2

表4 用药8周复方苦豆子制剂对复合模型大鼠肝脏TC、TG(mmol/L)含量的影响(s)

表4 用药8周复方苦豆子制剂对复合模型大鼠肝脏TC、TG(mmol/L)含量的影响(s)

组别 n TC TG假手术组10 0.58±0.07 0.52±0.08模型组 12 3.37±0.41## 4.05±0.57##高剂量组 12 2.25±0.29＊＊ 2.38±0.30*中剂量组 12 1.82±0.25＊＊ 2.13±0.32＊＊低剂量组 12 2.95±0.37 3.49±0.28*阳性对照组 12 1.88±0.23＊＊ 2.75±0.34＊＊

2.5.1 用药8周复方苦豆子制剂对复合模型大鼠血浆ET水平的影响 中剂量组与模型组比较明显降低血浆ET水平(P＜0.05)，高剂量组和低剂量组降低幅度较小(P＞0.05)。结果见表5。

2.5.2 用药8周复方苦豆子制剂对复合模型大鼠血浆NOS含量的影响 中剂量组、高剂量组与模型组比较，明显升高血浆T-NOS、cNOS含量(P＜0.01)。结果见表5。

表5 用药8周复方苦豆子制剂对复合模型大鼠血浆ET、NOS水平的影响(s)

表5 用药8周复方苦豆子制剂对复合模型大鼠血浆ET、NOS水平的影响(s)

注:与模型组比较，*P＜0.05，△P＜0.01;与假手术组比较，#P＜0.01

组别 n TC(mmol/L) TG(mmol/L) ET(pg/mL) T-NOS(U/mL) cNOS(U/mL)假手术组 10 0.58±0.07 0.52±0.08 173.74±12.64 37.78±2.26 21.93±1.81模型组 12 3.37±0.41# 4.05±0.57# 272.20±25.43# 26.50±1.87# 9.33±0.85#高剂量组 12 2.25±0.29△ 2.38±0.30* 219.47±19.18 33.18±1.28△ 15.69±1.32△中剂量组 12 1.82±0.25△ 2.13±0.32△ 205.32±18.54* 35.35±2.98△ 19.75±1.65△低剂量组 12 2.95±0.37 3.49±0.28* 238.43±21.85 27.32±1.96 10.01±1.13阳性对照组 12 1.88±0.23△ 2.75±0.34△ 181.35±14.40△ 37.64±2.14△ 19.14±1.96△

3 讨论

从本部分实验结果可以看出，CK可降低高血压复合高脂血症模型大鼠的血压，调节肝脏脂质;在高血压并发高脂血症症状态下，大鼠的内皮损伤更加严重，用药8周后，随着血压血脂的下降，各给药组血浆ET水平不同程度的降低，T-NOS和cTOS都不同程度的升高，说明复方苦豆子制剂的降压调脂作用与ET分泌、NO的合成减少有关系。以高、中剂量组效果明显，与阳性对照药物在改善内皮功能方面具有相似之处［6，7］。ET和NOS与高血压和高脂血症的发病机制密切相关，因此，推测CK降压调脂作用与内皮系统的调节有关。

高血压、高脂血症的发病机制复杂，以往仅从肾素血管紧张素系统对CK的降压机制进行了研究［2］，而其降压调脂作用与内皮系统的关系从未研究。本部分实验探讨了CK降压调脂作用与ET和NOS的关系，反过来也进一步证明了CK的作用。在实验中可看到中剂量组效果最好，好于高剂量组，并没有像许多西药一样呈现较为明显的量效关系。出现这种现象是否由于该制剂仍然是含有多种性质相近的成分的混合物，因而各成分之间的药效可能有不小的差异?在低剂量可能某些成分还没有达到其阈浓度，而在较高剂量其药理活性则充分显示出来，当达到一定浓度时有些成分又出现了副作用而影响了其他成分的作用?在高剂量与中剂量之间是否还有一个最佳剂量还有待进一步研究。阳性对照组采用了降压药物卡托普利和调血脂药物血脂康联合灌胃治疗，与临床高血压复合高脂血症的患者的治疗方案相似，从而使研究更加符合临床实际。

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［5］张均田.现代药理实验方法［M］.北京:北京医科大学中国协和议和大学联合出版社，1998:1259-1306.

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