符丹丹，欧阳瑶

(遵义医学院附属医院，贵州遵义563000)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制尚不清楚，其炎症机制在其发病过程中起着重要的作用。研究表明，中性粒细胞的活化和聚集是COPD发病的一个重要环节［1］。IL-17与IL-8在中性粒细胞的活化和聚集中起重要作用。大量的研究发现，IL-17、IL-8及中性粒细胞在COPD炎症过程中发挥着非常重要的作用，但这些研究都局限于COPD急性加重期。研究证实，COPD缓解期炎症仍持续存在，因此，对缓解期的治疗也日益得到重视。氨茶碱在COPD治疗中的作用已经得到证实，主要是基于其对支气管平滑肌的直接舒张作用，近来发现其在抗炎、免疫调节等方面也起着重要作用［2］。本研究通过观察IL-17、IL-8及中性粒细胞在COPD患者缓解期口服氨茶碱和常规治疗诱导痰中的表达及其相关性，探讨IL-17、IL-8及中性粒细胞在COPD患者缓解期中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入我院2010年1月～2011年12月住院患者50例，分为口服氨茶碱组(治疗组)和常规治疗组。治疗组25例，年龄(71.9±8.4)岁，GOLDⅢ～Ⅳ级;常规治疗组25例，年龄(72.3 ±7.6)岁，GOLDⅢ～Ⅳ级。另选取我院健康体检无吸烟者10例为正常对照组，年龄(68.1±7.9)岁。入院当天采集临床资料。根据2007版慢性阻塞性肺疾病全球倡议(GOLD)评价，对COPD患者按病情严重程度进行分级，对患者的病情进行临床评估。待COPD患者缓解出院后，均给予家庭氧疗及肺功能锻炼，治疗组口服加用氨茶碱100 mg，3次/d，30 d后追踪随访，取3组诱导痰测定IL-17、IL-8及中性粒细胞的含量。

1.2 主要试剂 IL-17试剂盒、IL-8试剂盒及中性粒细胞试剂盒为上海西唐生物科技有限公司提供，美国B＆D公司生产。

1.3 标本采集 采用氧气雾化吸入法收集受试者的诱导痰，采用改良pin法，常用梯度高渗盐水法，试剂配制:3%、4%、5%高渗盐水，0.1%二硫苏糖醇(DTT)等。

1.4 痰液处理及标本测定 痰液称重，加入2倍体积的0.1%的DTT充分混合，在漩涡振荡器上混匀;再置于37℃恒温水浴箱中孵育并震荡30 min，加入与DTT等体积的D-PBS后继续水浴并震荡5 min;将稀释的痰液经4层无菌纱布过滤，滤液在离心机中以1 000 r/min的速度离心10 min，取上清液，置于－80℃冰箱保存;细胞层(沉淀)用D-PBS重悬，用300目尼龙网过滤，离心机中1 000 r/min离心10 min，离心2次，吸管吸去每次离心后的上清液;沉淀用D-PBS重悬，在倒置显微镜下调整细胞数为1× 106/mL;上清液于ELISA实验前1 d放置密封冷冻干燥机进行样本浓缩12 h，后取出解冻备用。

1.5 统计学方法 所有数据采用SPSS13.0统计软件处理，计量资料数据均采用±s表示。两组间的比较，采用两独立样本t检验。两因素相关分析用直线相关分析。以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同受试组基本资料及肺功能比较 对不同受试组的性别及年龄进行两两比较无明显差异(P＞0.05)，具有可比性。各组肺功能测定结果见表1。

表1 不同受试组肺功能的测定结果(±s)

表1 不同受试组肺功能的测定结果(±s)

注:与正常对照组比较，*P＜0.01

组别 n FEV1% FEV1/FVC正常对照组10 91.43±12.37 82.65±9.14常规治疗组 25 33.47±9.25* 45.87±7.36*治疗组 25 35.64±7.93* 42.52±6.89*

2.2 出院30 d后诱导痰中的IL-17、IL-8及中性粒细胞的含量 见表2。

表2 不同受试组痰IL-17、IL-8及中性粒细胞测定结果(pg/mL，±s)

表2 不同受试组痰IL-17、IL-8及中性粒细胞测定结果(pg/mL，±s)

注:与正常对照组比较，*P＜0.01;与常规治疗组比较，△P＜0.05

正常对照组26.75±17.16 18.83±3.16 23.48±9.24常规治疗组 75.86±38.99* 46.29±12.76* 55.27±13.75*治疗组 56.24±17.48＊△31.37±14.51＊△32.36±15.89＊△

2.3 相关性分析 治疗组IL-17与IL-8呈正相关(r=0.652，P＜0.05)，IL-17与中性粒细胞呈正相关(r=0.713，P＜0.05)，IL-8与中性粒细胞呈正相关(r=0.649，P＜0.05);常规治疗组IL-17与IL-8呈正相关(r=0.749，P＜0.05)，IL-17与中性粒细胞呈正相关(r=0.691，P＜0.05)，IL-8与中性粒细胞呈正相关(r=0.648，P＜0.05)。

3 讨论

近几十年来，COPD发病率呈现快速增长趋势，我国40岁以上人群发病率已高达8.2%，成为严重危害中老年健康的常见疾病之一。慢性持续性气道炎症反应是COPD的重要发病机制之一。有研究显示，在COPD患者支气管肺泡灌洗液及诱导痰中，中性粒细胞计数明显增加，且已戒烟的COPD患者中也具有类似现象，这提示COPD患者气道内存在持续的慢性炎症改变。

1995年Yao等首次报道，在T细胞诱导的慢性炎症过程中，可溶性细胞因子IL-17起着非常重要的作用。有研究将经细菌诱导的小鼠模型以酒精处理后，其气道内中性粒细胞较对照组明显减少，且与支气管灌洗液(BALF)中的IL-17水平增加呈正相关［3］。国内沈锋等［4］发现大鼠COPD模型中BALF和肺组织匀浆中IL-17水平亦显著增高。其他研究也显示，COPD急性期患者肺组织中IL-17明显增加，并与病情严重程度相关［5］。本研究发现，在COPD稳定期患者中，IL-17水平亦显著增加，这支持COPD缓解期患者存在持续的气道炎症反应。

IL-8可趋化中性粒细胞在气道内聚集，诱导炎症细胞分泌黏液，促进炎症过程。Pesci等研究发现，COPD患者BALF中IL-8水平明显高于正常无吸烟人群;进一步研究证实，IL-17可激活NF-κB，并诱导IL-8至炎症部位，从而发挥IL-8趋化募集中性粒细胞的功能，促进气道炎症发展。我们前期研究也显示，在COPD急性加重期患者血浆中，IL-17与IL-8的水平明显高于正常无吸烟者，这提示IL-17及IL-8可能共同参与了COPD的发病过程［6，7］。本研究观察了COPD缓解期患者中使用氨茶碱对IL-17和IL-8水平的影响，结果发现，与常规治疗组比较，COPD稳定期患者加用氨茶碱治疗，可以显著降低诱导痰中IL-17、IL-8及中性粒细胞水平;进一步分析发现，氨茶碱治疗组IL-17、IL-8和中性粒细胞三者之间均存在显著的相关，这表明IL-17和IL-8也参与了COPD缓解期的慢性持续炎症反应，而氨茶碱治疗可能通过影响IL-17和IL-8的水平而降低COPD缓解期的气道慢性炎症反应，从而发挥显著的抗炎症作用。

总之，本研究发现COPD缓解期患者口服氨茶碱能降低诱导痰中IL-17和IL-8的水平，进一步阐明了氨茶碱抗炎症机制，为COPD缓解期患者长期口服氨茶碱治疗提供了新的理论证据。

［1］Williams TJ，Jose PJ.Neutrophils in chronic obstructive pulmonary disease［J］.Novartis Found Symp，2001，(234):136-141.

［2］黎友伦，罗永艾.氨茶碱的药理作用与临床应用［J］.医药导报，2005，24(9):807-809.

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［4］沈锋，赵鸣武，贺蓓，等.白细胞介素17在大鼠慢性阻塞性肺疾病和支气管哮喘模型中的变化及意义［J］.中华结核和呼吸杂志，2004，27(10)，654-658.

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［6］刘晓丽，欧阳瑶，张龙举，等.COPD急性加重期患者诱导痰白细胞介素17和中性粒细胞CD11b/CD18的测定及意义［J］.遵义医学院学报，2009，32(3);250-254.

［7］罗登攀，欧阳瑶，张洪球.白细胞介素-17在慢性阻塞性肺疾病急性加重期的变化及意义［J］.中国预防医学杂志，2010，11 (4):366-368.