封苹 孟庆侠

(江苏省沛县疾病预防控制中心 江苏沛县 221600)

1 增菌

(1)当样品中有多种细菌混杂时,容易影响目标菌增菌效果。如检测志贺氏菌时,由于其对酸性环境较敏感,产酸的菌株可使其在数小时内死亡[1]。当用GN增菌志贺氏菌时,若同时存在其它致病性或非致病性细菌且志贺氏菌含量较少时,应尤其注意增菌时间。(2)延长增菌时间有时可以提高阳性检出率[2],如增菌副溶血性弧菌。(3)增菌时也可多选择一种增菌液。

2 分离

(1)如果条件允许,一种致病性细菌可选择2种及以上选择性培养基。如:当志贺氏菌和沙门氏菌混杂在一起,且志贺氏菌含量相对较少,有时在SS上较难挑出志贺氏菌,如果同时接种在山梨醇麦康凯选择平板上,沙门氏菌分解山梨醇而呈红色,多数志贺氏菌不分解山梨醇无色,从而增加分离出志贺氏菌的机会。若样品为大便,用SS平板更有利于分离出志贺氏菌。另外,单核细胞增生李斯特氏菌在含有亚碲酸钾的平板上形成黑色的菌落(BP平板内含有亚碲酸钾)。(2)同一种选择性培养基,不同生产厂家,甚至同一生产厂家不同生产批号,菌落生长情况亦不同。在一次质量控制中,把副溶血性弧菌用同种方法同时接种于2个厂家生产的TCBS平板上,其中一块TCBS平板上菌落生长较多,而另一块TCBS平板上仅在初始接种处有少许蓝绿色菌苔生长。(3)在直接接种平板时,均可接种于普通营养琼脂平板、血平板,便于菌落形态及溶血情况的观察。单核细胞增生李斯特菌溶血情况尤其值得注意。

3 涂片、染色

(1)样品有时可直接涂片染色。(2)KOH拉丝试验[3]:若革兰氏染色效果不理想,可辅以此试验,革兰氏阴性菌此试验阳性;革兰氏阳性菌此试验阴性。(3)区分杆菌、弧菌时可做氧化酶试验。

4 生化试验

(1)接种生化反应管时应挑取三糖铁(或双糖铁)斜面上的纯培养物,亦可用普通营养琼脂斜面上的纯培养物。(2)可多挑取几个可疑菌落接种三糖铁琼脂斜面,以防遗漏。(3)接种三糖铁琼脂斜面产气不明显时,可用带小倒管的单糖复核[4]。(4)若三糖铁(或双糖铁)斜面为黄色(酸性),不宜做氧化酶试验,会出现假阴性,可挑取不含糖培养基上的纯培养物再做氧化酶试验[4]。(5)做ONPG试验时:黄色变化不太明显时,一定要与阴性对照仔细对比观察。(6)尿素试验时:仅上层颜色变红应判为阴性,这可能是细菌在有氧条件下分解蛋白胨产碱变色。(7)微量生化管有时结果不可靠,产生疑问时可再辅以自配生化反应管。(8)API 20E的生化反应结果有时与接种量相关,在一次质量控制中,小肠结肠炎耶尔森氏菌的API 20E试验结果中尿素试验就有不同:若按说明书上要求挑取一个菌落制成接种液,尿素试验阴性;若挑取多个菌落制成微混的接种液,尿素试验阳性。(9)SIM动力试验效果不明显时,可同时接种普通半固体。

5 血清凝集

(1)挑取斜面上的纯培养物做凝集,更易观察结果。(2)要做盐水对照。(3)注意诊断血清的有效性,有时会出现有效期内的诊断血清失效。如果生化、菌落形态均符合而血清不凝集,可用其它批号或生产厂家的诊断血清试试,不能轻易否定。(4)做凝集试验时,若凝集效价低或不凝集,除考虑诊断血清的因素外,还可能是因菌株的变异引起,这时可以多传几代,有时还须诱导。

6 讨论

(1)在食物中毒或病人标本检测中,增菌的同时,可直接接种选择性平板;(2)同一种致病性细菌可同时接种2种及以上选择性平板;(3)同一种致病性细菌接种同一种平板可多种几块,接种时,接种量要有一定的梯度变化;(4)平板当天观察后,可以在室温下多存放2d或培养箱内多培养1d,再观察,菌落形态会更典型;(5)使用显色培养基更易于检出致病性细菌。

[1]李影林.临床微生物学及检验[M].吉林:吉林科学技术出版社,1991:189.

[2]何晓青.卫生防疫检验[M].江西:江西省卫生防疫站,1980:1 6.

[3]李仲兴,郑家齐,李家宏.诊断细菌学[M].香港:黄河文化出版社,1992:96.

[4]齐小秋.病原生物学检验-细菌[M].北京:卫生部病原生物学检验教材编写组,2009:301.