陈玉璞

（焦作市食品药品检验所，河南焦作 454000）

复方四嗪利血平片为常用降压药品，主要成分为利血平和氢氯噻嗪，其中氢氯噻嗪有利尿、降压等作用。复方四嗪利血平片现行国家药品标准中氢氯噻嗪只做定性鉴别，无含量测定。 本实验建立用高效液相色谱法测定其中氢氯噻嗪的含量，作为复方四嗪利血平片质量控制指标之一，为控制药品质量，提供了一种简单、灵敏、快速准确的检测方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UVIKONXL型紫外分光光度计（法国）；AE-240双量程电子天平（瑞士梅特勒公司）；岛津高效液相色谱仪（LC-10ADVP泵；SPD-10AVP紫外检测器；CS-Light Potrun Analysis数据处理系统）。

1.2 试药

氢氯噻嗪对照品(批号：10309-0001，中国药品生物制品检定所，供含量测定用，含量为99.40%）；复方四嗪利血平片（批号：080317，郑州邦泰药业有限公司；批号：080102，新乡中杰药业有限公司；批号：20090602，郑州海缔邦林制药有限公司）；水为纯净水，甲醇为一级色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil-C18（6.0 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-磷酸盐缓冲液（30∶66∶4）（0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH至3.0）；检测波长：272 nm；流速：1.0 ml/min。柱温：30℃；进样量：20 μl；理论塔板数按氢氯噻嗪计不低于3000。

2.2 检测波长的选择

取对照品溶液，在180～300 nm的波长范围内进行扫描。结果在272 nm的波长处有最大吸收，故选用272 nm为氢氯噻嗪的检测波长。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取氢氯噻嗪对照品22.4 mg，置100 ml量瓶中，用流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀。即得。

2.4 供试品溶液的制备

取本品20片，除去包衣后，精密称取细粉适量（约相当于氢氯噻嗪20 mg），置100 ml量瓶中，用流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液5.0 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5 阴性对照试验

按复方四嗪利血平片的处方工艺，不加氢氯噻嗪，制成阴性对照品，同供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。在选定的色谱条件下，准确进样20 μl，从色谱图上看出，在该色谱条件下，在保留时间（tR）4.1 min处，供试品和对照品溶液中出现色谱峰，而阴性对照溶液未见此色谱峰，表明在本实验条件下，氢氯噻嗪的测定不受其他杂质峰干扰。见图1。

2.6 线性关系的考察

分别精密量取“2.3”项下氢氯噻嗪对照品溶液1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 ml，分别置于 50 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取20 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰峰面积，以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程，结果表明氢氯噻嗪进样量在0.0896～0.0896 μg范围内，呈良好的线性关系。回归方程为 Y=44102.9X+1637.05（r=0.9999）。

2.7 精密度试验

取浓度为22.40 μg/ml的氢氯噻嗪对照品溶液，重复进样5次，分别测定峰面积，结果显示，氢氯噻嗪RSD=0.76%，表明该法精密度良好。

2.8 稳定性试验

取“2.3”项下的氢氯噻嗪对照品溶液每间隔1 h进样1次，共8次，结果氢氯噻嗪RSD=0.67%。结果表明样品在8 h内基本稳定。

2.9 重复性试验

取样品（批号：080317，郑州邦泰药业有限公司）适量，依法平行测定6次，结果氢氯噻嗪RSD=0.93%。结果表明该法重现性良好。

2.10 加样回收率试验

取样品（批号：080317，郑州邦泰药业有限公司）约0.11 g，共6份，精密称定，分置100ml量瓶中，分别加入“2.3”项下对照品溶液5.0 ml，用流动相超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，按色谱条件测定，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.11 样品含量测定

取样品3批，各20片，除去包衣后，精密称取细粉适量（约相当于氢氯噻嗪20 mg），置100 ml量瓶中，用流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液5.0 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；另取氢氯噻嗪对照品适量，用流动相制成每毫升中含氢氯噻嗪11.20 μg的溶液。分别精密吸取20 μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件，以峰面积计算，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 讨论

笔者查阅了许多文献，发现许多流动相中含有乙腈。笔者认为，乙腈价格较贵且有毒，故弃用。部分流动相用磷酸盐缓冲液（1 mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH至3.0）-甲醇-水，笔者进行了实验，发现1 mol/L磷酸二氢钾溶液与甲醇混合后有大量浑浊产生。通过反复实验，选用0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液，能达到满意效果。

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