周振宇 谷元廷

多细胞生物体细胞数量恒定取决于细胞增殖与凋亡间的动态平衡，破坏平衡可导致肿瘤的发生。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的一个新成员，是迄今发现最强的凋亡抑制因子［1］。近年研究表明，Survivin与肿瘤的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨乳腺癌组织中Survivin蛋白的表达及其与淋巴结转移的关系，为临床治疗及提高患者的生存率提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 43例乳腺癌标本选自郑州大学第一附属医院乳腺科2008年至2009年手术切除并经病理证实的组织标本，均为浸润性导管癌，术前未行任何化疗、放疗。本组患者年龄30～72岁，中位年龄51岁。临床分期:Ⅰ期和Ⅱ期16例，Ⅲ期和Ⅳ期27例。其中有淋巴结转移28例，无淋巴结转移15例。按组织学分级为:高中分化30例，低分化13例;另取癌旁5 cm外经病理证实的正常乳腺组织作为正常对照。

1.2 Survivin的检测 采用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法染色，SP试剂盒购于北京中山生物技术有限公司，用兔抗人Survivin多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司)检测Survivin的表达，严格按照说明书操作。已知阳性乳腺癌切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。结果判定:以细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞，400倍镜下计数500个细胞，≥10%为阳性，〈10%为阴性。

1.3 统计学分析 采用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析。计数资料的比较采用χ2检验，相关分析采用Spearman相关分析。

2 结果

2.1 Survivin蛋白表达结果 Survivin在正常乳腺组织中不表达，肿瘤组织中Survivin蛋白阳性染色颗粒主要定位于肿瘤细胞胞浆内，细胞膜亦可有少量着色，周围间质亦见少量阳性染色。正常组Survivin阳性表达率为0%(0/12)，乳腺癌组Survivin蛋白阳性表达率62.8%(27/43)，乳腺癌组Survivin蛋白阳性表达率显著高于正常组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 Survivin蛋白阳性表达与乳腺癌临床病理特征的关系淋巴结转移组Survivin蛋白阳性表达率(75%，21/28)显著高于无淋巴转移组(46.2%，6/15)(P＜0.05);根据临床病理分期，Ⅰ+Ⅱ期组与Ⅲ+Ⅳ期组之间Survivin蛋白阳性表达率(50.0%νs70.4%)差异有统计学意义(P＜0.05);随临床分期增加及淋巴结的转移，Survivin蛋白阳性表达率逐渐升高(P＜0.05)。见表1。另外，Survivin蛋白阳性表达与患者年龄及分化程度无关(P＞0.05)。

表1 Survivin与乳腺癌临床病理特征的关系

3 讨论

近年来，乳腺癌的发病率呈明显上升趋势，严重影响着女性的生活质量及威胁其生命。因此，探讨乳腺癌的发生、发展、浸润、转移的机制，成为目前研究的热点。多细胞生物体细胞数量恒定取决于细胞增殖与凋亡间的动态平衡，破坏平衡可导致肿瘤的发生。在恶性肿瘤病变中，细胞增殖和凋亡同时增加，但增殖速率明显大于凋亡速率。当抑制肿瘤细胞增殖和/或促进肿瘤细胞凋亡，则会影响肿瘤的生长。Survivin基因是一个新近发现的凋亡抑制基因［1］，具有强大的凋亡抑制功能，其异常表达与多种人类肿瘤的发生发展及预后密切相关［2］，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子。在大多数肿瘤均有表达，为肿瘤靶向治疗提供了一个良好的前景。

细胞凋亡主要有两条途径:死亡受体途径和线粒体途径，两条途径最终都通过激活下游效应因子使细胞凋亡。1997年耶鲁大学的Altieri等［1］利用效应细胞蛋白酶受体1(EPR1)cDNA在人类基因组文库中杂交筛选并克隆产生了1个IAP基因家族新成员，即Survivin基因，因可延长细胞的生存，故又名生存素。组织分布上Survivin只表达于胚胎和发育的胎儿组织，除胸腺、生殖腺外不见于其他终末分化的正常成人组织。相反在大多数肿瘤组织中均可检测到Survivin的表达［3，4］。Survivin的主要生物学功能就是抗凋亡，可以直接粘附于活化的效应因子上，使其不能发挥作用，从而阻断细胞凋亡过程，是目前已知作用最强的凋亡抑制蛋白。

本研究显示，Survivin在正常乳腺组织中不表达，乳腺癌中Survivin表达率显著高于正常乳腺组织，提示Survivin基因的表达发生在乳腺癌恶性转化的早期，表明Survivin基因与乳腺癌的发生有关。Survivin基因在乳腺癌组织中的表达可能抑制了异常突变的细胞的凋亡，从而扰乱了细胞生长和凋亡途径，促使细胞逃离生长监控，导致肿瘤的发生。对Survivin蛋白的检测可作为早期乳腺癌的辅助诊断。Tanaka等［5］研究表明，Survivin在乳腺癌组织中的阳性率为70.7%，而在癌旁正常乳腺组织中无表达。与本结果相似。Aziz等［6］检测皮肤癌和癌前病变组织，发现皮肤癌组织中Survivin基因高表达(87%)，同时发现在皮肤癌前病变中有Survivin基因部分表达，认为Survivin基因的表达与皮肤角化细胞转化有关，Survivin基因表达可能参与皮肤癌的发生、发展，从而认为Survivin基因的表达是癌变早期事件。

本研究证实，根据临床病理分期，乳腺癌Ⅰ期组与Ⅱ组期之间Survivin蛋白阳性表达率差异有统计学意义;淋巴结转移组Survivin蛋白阳性表达率显著高于无淋巴转移组;随临床分期增加及淋巴结的转移，Survivin蛋白阳性表达率逐渐升高。提示Survivin基因不但参与乳腺原位肿瘤形成过程的调节，促进其发展，可能还参与乳腺癌细胞转移过程的调节，在转移过程中发挥作用。Sarela等［7-8］认为，在恶性肿瘤中，脱落的癌细胞因为Survivin对凋亡的抑制而受到了保护，得以继续存活并分裂增殖，进而形成肿瘤邻近或远离部位的转移，从而引起预后不良。关于预后情况本组正在跟踪调查之中。

Survivin的异常表达与乳腺癌的发生、发展密切相关，其在乳腺癌中的高表达与淋巴结转移及临床病理分期密切相关，可能是影响乳腺癌预后的重要分子指标。

［1］Ambrosini G，Adida DC，Altier DC.A novel anti-apoptosis gene，survivin，expressed in cancer and lymphoma.Nat Med，1997，3(8):917-821.

［2］Salz W，Eisenberg D，Plescia J，et al.A survivin gene signature predicts aggressive tumor behavior.Cancer Res，2005，65(9):3531-3534.

［3］Suga K，Yamamoto T，Yamada Y，et al.Correlation between transcriptional expression of survivin isoforms and clinicopathological findings in human colorectal carcinomas.Oncol Rep，2005，13(5):891-897.

［4］Li JX，Zhou KY，Liang T，et al.Knockdown of survivin Expression by Small Interfering RNA Induces Apoptosis in Human Breast Carcinoma Cell Line MCF-7.Ai Zheng，2005，24(3):268-272.

［5］Tanaka K，Iwamoto S，Con G，et al.Expression of survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas.Clin Cancer Res，2000，6(1):127-134.

［6］Wang M，Wang B，Wang X.A novel antiapoptosis gene，survivin，bcl-2，p53 expression in cervical carcinomas.Zhong Ha Fu Chan Ke Za Zhi，2001，36(9):546-548.

［7］Aziz MH，Reagan-Shaw S，Wu J，et al.Chemoprevention of skin cancer by grape constituent resveratrol:relevance to human disease FASEB J，2005，Apr，18.

［8］Sarela AI，Macadam RC，Farmery SM，et al.Expression of the antiapoptosis gene，survivin，predicts death from recurrent colorectal carcinoma.Gut，2000，6(5):645-650.