陈琦 王尚

鹅不食草(Centipeda minima(L.)A.Br.et Aschers.)为菊科植物鹅不食草的干燥全草。据《本草纲目》记载有通窍，止咳之功。主治风寒感冒，咳嗽痰多，鼻塞不通，鼻渊流涕等。

主要含有甾醇类、黄酮类、三萜皂苷、挥发油、胺类，有机酸等成分。近年来，针对其所含甾醇类、皂苷类、黄酮类等成分［1］研究较多，但有机酸类成分作为其重要组成部分还未见

1 仪器与试药

UV-1700型紫外可见分光光度计(日本岛津);BP211D电子天平(德国赛多利司);超声波清洗器;烘箱;水浴锅;真空泵;加热套;pH试纸;没食子酸对照品(含量测定用，中国药品生物制品鉴定所);鹅不食草(采于吉林长白县);其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 鹅不食草总有机酸的提取［2，3］

2.1.1 超声提取法 取鹅不食草粉末50 g加蒸馏水1000 ml浸泡1 h，超声提取1 h，过滤，残渣加蒸馏水1000 ml，再次超声提取1 h，过滤，合并2次滤液，水浴锅(60℃)上浓缩得浸膏，浸膏减压真空干燥(60℃)，干品即为鹅不食草总有机酸提取物。

2.1.2 碱提酸沉法 取鹅不食草粉末50 g加入蒸馏水1000 ml浸泡1 h，超声提取1 h，过滤，残渣加蒸馏水1000 ml，再次超声提取1 h，过滤，合并两次滤液，加入饱和盐酸乙醚萃取，乙醚层再用2%碳酸氢钠溶液萃取，碳酸氢钠水溶液用浓盐酸调制，pH值到2，再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯后于水浴锅(60℃)上浓缩干燥，干品即为鹅不食草总有机酸提取物。

2.1.3 酸沉后有机溶剂萃取法 精密称取鹅不食草粉末200 g于5000 ml圆底烧瓶中，加蒸馏水3000 ml回流提取。提取三次，每次1.5 h，合并三次提取液，水浴锅(60℃)上浓缩(相对密度1.05)，浓盐酸调制浓缩液，pH值到2，用乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯溶液，回收乙酸乙酯，并于水浴锅(60℃)上浓缩干燥，干品即为鹅不食草总有机酸提取物。

2.1.4 有机溶剂加酸水直接提取法 精密称取鹅不食草粉末200 g于5000 ml圆底烧瓶中，在70%乙醇溶液中加入浓盐酸，pH值到2，在圆底烧瓶中加入70%乙醇酸水溶液3000 ml，回流提取三次，每次1.5 h，合并三次提取液，水浴锅(60℃)上浓缩(相对密度1.05)，用适量乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，并于水浴锅(60℃)上浓缩干燥，干品即为鹅不食草总有机酸提取物。

2.2 鹅不食草总有机酸的含量测定［4，5］

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取一定量没食子酸的对照品，用无水乙醇将其溶解，定容配成没食子酸(20.5μg/ml)储备液。

2.2.2 试品溶液的制备 准确称取以上四种方法所得鹅不食草总有机酸提取物各0.02 g，置25 ml容量瓶中，无水乙醇定容至刻度，在精确量取1 ml样品溶液置10 ml容量瓶中，无水乙醇定容至刻度，即得样品溶液。

2.2.3 最大波长的选择 取没食子酸标准品溶液及碱提酸沉法样品溶液各1 ml，置10 ml容量瓶中，加无水乙醇5 ml，0.3%十二烷基硫酸钠2 ml，1%铁氰化钾-1%三氯化铁(1:1)混合液1 ml，摇匀，暗处放置5 min，加0.1 mol/LHCl至刻度，摇匀，暗处放置20 min，平行空白，在500～900 nm波长范围内扫描。结果表明，对照品和供试品最大吸收波长在730 nm波长处，故选择测定波长为730 nm。吸收光谱图如下。

图1 标准品与样品吸收光谱图

2.2.4 标准曲线的绘制 分别取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8 和1.0 ml，置10 ml容量瓶中，加无水乙醇至6 ml，按2.2.3项下方法进行测定，自“0.3%十二烷基硫酸钠2 ml”起，依法测定其吸收度。以含量(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标进行相关分析，得出回归方程为:A=529.19C+0.0463，R=0.991。结果表明溶液浓度在 0.416μg/ml～2.08μg/ml范围内，吸光度与浓度呈良好线性关系。

2.2.5 样品含量测定 分别量取上述四种方法样品溶液各1 ml，按2.2.3项下方法进行含量测定，自“0.3%十二烷基硫酸钠2 ml”起，依法测定其吸收度，用直线回归法计算总有机酸含量。测定结果见下表。

表1 不同提取方法鹅不食草有机酸含量

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度实验 精密称取鹅不食草粉末50 g，按2.1.2项下提取方法进行提取，同时按2.2.5项下的方法进行含量测定，平行测定6次，记录每次含量测定结果。实验结果RSD为0.35%(n=6)，显示精密度良好。

2.3.2 重现性实验 按2.1.2项下提取方法提取鹅不食草总有机酸，平行制备6份，同时按2.2.5项下的方法进行含量测定。含量测定结果RSD为0.73%(n=6)，实验重现性好。

2.3.3 稳定性实验 精密称取鹅不食草粉末50 g，按2.1.2项下提取方法进行提取，分别于 0、2、4、6、8、12、24 h 时，按2.2.5项下的方法进行含量测定，结果24 h内供试品溶液稳定性较好，RSD为0.612%。

2.3.4 加样回收率实验 精密称取鹅不食草粉末50 g，精密加入没食子酸对照品4 mg，平行6次，按2.1.2项下提取方法进行提取，同时按2.2.5项下的方法进行含量测定，记录每次含量测定结果。平均回收率97.5%，RSD=1.91%。

3 讨论

本实验通过对鹅不食草总有机酸成分提取实验的设计，最终确定碱提酸沉法为其最佳提取方法，总有机酸含量达到67%以上，远远高于其他三种提取方法。但采用碳酸氢钠提取有机酸时未考虑酚性物质的溶解和酯类物质的水解，被溶解或水解掉的部分是否为有效成分，其水解后会不会影响药物的疗效等问题尚需进一步研究。

本实验以铁氰化钾-三氯化铁为显色剂，采用分光光度法测定鹅不食草有机酸含量，方法学考察结果表明，分光光度法法测定鹅不食草药材中的总有机酸的方法简便、快速、准确、重现性好，实用性强。

鹅不食草是我国东北地区常用中药，有机酸类成分是其有效成分之一，但尚无对其含量测定的报道，本实验对其所含有机酸定量的研究，可为其质量标准的建立提供方法学的参考，以控制药材质量，保证临床疗效，为进一步开发鹅不食草资源奠定基础。

［1］刘宇.鹅不食草的化学成分及生物活性研究进展.湖北中医杂志，2005，27(5):52-53.

［2］王媚，吴皓，等.中药有机酸类成分的提取分离及测定方法研究进展.南京中医药大学学报，2004，20(3):190-192.

［3］陈玉昆.中药提取生产工艺学(下).沈阳出版社，1992:109.

［4］付煜荣，张万明，陈桂敏，等.景天三七中没食子酸和总酚酸含量测定.中成药，2006，28(7):1016-1018.

［5］张颖，甄攀，马媛媛，刘淑芬，等.吴茱萸中总皂苷、总黄酮和总酚酸的含量测定.河北北方学院学报，2008，24(3):27-33.