崔静 孙倩

(1.上海市长宁区妇幼保健院乳腺科,上海 200051;2.河源市和平县人民医院外三科,广东 河源 517299)

我国癌症的发病率逐年增高,乳腺癌发病居首位,严重危害女性的生命健康[1]。已有的传统临床病理参数及组化分子指标已经无法满足人们对乳腺癌日益精准化治疗和预后判断的要求。有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD)属于原癌基因MYC家族,且MAD1研究在MAD各亚型中最为广泛,其在乳腺癌、鼻咽癌、白血病等的恶性肿瘤中产生的调控作用显著[2]。本研究主要探讨MAD1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2020年2月至2022年2月上海市长宁区妇幼保健院具备完整的临床病例资料且符合入选标准的乳腺癌组织石蜡标本100例。应用免疫组化法检测MAD1表达。分析MAD1表达与患者预后及肿瘤生物学行为的关系。入选病例组织均已得到患者授权使用。纳入标准:提供详细资料;均为初次确诊;具备手术条件;临床资料完整;标本采集前均未实施留体类激素药物治疗;排除远处转移可能。排除标准:有其它恶性肿瘤患病史;初次治疗时就已经发生远处转移,无法实施手术的患者;术前接受过化疗、放疗等;伴有其他严重内科疾病患者;随访中因各原因脱落病例;非原发性乳腺癌患者。一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法按照AJCC(第八版)分期标准实施患者疾病的临床分析,依据中国抗癌协会乳腺癌《乳腺癌诊疗指南(2017版)》判定患者乳腺癌的分子分型标准[3]。组织样本放置于干冰上,低温条件下切取适宜大小的组织块,放置于预先加入了1 mL Trizol试剂和1个钢柱的2 mL防爆Ep管中。总RNA使用Invitrogen或者Takara公司的Trizol试剂进行抽提。所有使用的试剂、耗材均需预先进行去RNase处理,具体操作步骤参照试剂盒说明书完成。常规脱蜡复水将切片放于烤箱中,烤10 min软化石蜡。3 h后二甲苯、梯度乙醇脱蜡水化,之后抗原修复25 min,选择柠檬酸盐高温煮沸完成,把内源性过氧化物酶阻断剂滴入,通过BS冲洗3次,每次3 min;常规脱水、烘干、封固,上镜观察MAD1表达。通过DNase I(Sigma)处理的方式,去除可能存在于提取的总RNA中的DNA污染。同时选择260/230 mm、260 mm/280 mm值验证纯度,并选择NanoDrop对纯化之后的RNA的质量实施检测。选择工作浓度1∶100的兔抗人Madl多克隆抗体(Bio．swamp公司),工作浓度1∶100的兔抗人Hp多克隆抗体,即用型的兔抗人Ki_67单克隆抗体、迈新公司的DAB酶底物显色和S．P试剂盒。

1.3 观察指标分析MAD1表达与患者预后及肿瘤生物学行为的关系。免疫组化结果选择NikonE800 显微镜拍照观察。结果判断[4]:进行双盲独立读片时,选择两位高年资病理科医师。借助图像分析系统采集显微镜下图像,阳性信号为棕褐色颗粒。以半定量方法进行判定,结果为阳性,则细胞质出现黄色～棕黄色染色颗粒。染色强度分级:(++)～(+++)为弱表达～阳性表达,(-)～(+)分为无表达。

2 结 果

2.1 MAD1在不同乳腺病变的表达在乳腺癌组织中,MAD1蛋白的血管内皮细胞和癌细胞表达,少量定位于细胞核,主要定位在患者的血管内皮细胞的细胞质和癌细胞。阳性显影为棕黄色沉积。在正常乳腺的上皮,MAD1表达为强阳性,乳腺导管内癌的表达稍弱。

2.2 随访结果100例患者中共获得有效随访100例,随访率为100.00%。其中患者的1年生存率为97例(97.00%),高于2年87(87.00%)、3年的80例(80.00%)(P<0.05)。

2.3 MAD1表达同人类表皮生长因子受体2(HER-2)指标的关系MAD1的表达同乳腺癌患者临床常用评价肿瘤高危因素密切关联。通过分析MAD1表达差异,HER-2高表达同低表达患者存在统计学意义(P<0.05)。随着组织学分级的增高,MAD1蛋白高表达率有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 MAD1表达同HER-2指标的关系(n)

3 讨 论

MAD1的过度表达说明乳腺癌患者生命周期在缩短,并存在早期复发的倾向,通过三苯氧胺和化疗均无法取得较佳的疗效[5]。患者乳腺癌组织中MAD1经检测后,能够更方便的指导临床,被视为独立判断乳腺癌预后指标,可选择更为合理、科学、恰当的治疗方案,改善患者疾病预后[6-7]。但免疫组织化学法存在不足,需再次应用荧光原位杂交法检测,规避其假阳性比较高的缺陷,获得乳腺癌患者MAD1状态。MAD1低表达则说明对生存有着潜在的不良影响,通常预示着患者肿瘤的生物学行为差;MAD1的表达同乳腺癌患者临床常用评价肿瘤高危因素密切关联。MAD1在正常体细胞中能够稳定表达,随着乳腺癌肿瘤侵袭性的增强,MAD1发挥的功效逐渐被削弱,提高MAD1的表达可能在乳腺癌早期时产生抗肿瘤的作用[8]。

本研究结果显示,在乳腺癌组织中,MAD1蛋白的血管内皮细胞和癌细胞表达,少量定位于细胞核,主要定位在患者的血管内皮细胞的细胞质和癌细胞。阳性显影为棕黄色沉积。在正常乳腺的上皮,MAD1表达为强阳性,乳腺导管内癌的表达稍弱;100例患者中共获得有效随访100例,随访率为100.00%。其中患者的1年生存率为97例(97.00%)高于2年87(87.00%)、3年的80例(80.00%),说明MAD1的表达在预测乳腺癌患者生存情况时,其作为新的标志物发挥着关键作用,有良好的预后。

综上所述,MAD1是判断乳腺癌患者预后的关键分子标志物,其高表达显示出乳腺癌患者有较好的长期生存和疾病预后。

利益冲突说明/Conflict of Intetests

所有作者声明不存在利益冲突。

伦理批准及知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究通过上海市长宁区妇幼保健院伦理委员会(科学伦理委员会)批准,患者及家属均知情同意。