摘 要：为了研究诃子、金银花、黄连等26种单味中药对鲤（Cyprinus carpio）源嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）体外抑菌活性，该试验采用水煮方法提取诃子、金银花、黄连等26种单味中草药的有效成分，调整中草药药液浓缩为1g/mL（每1mL药液含1g生药），以临床分离鲤的源致病性嗜水气单胞菌（HT333株）为试验菌株，利用平板打孔法和微量二倍稀释法分别测定诃子、金银花、黄连等26种单味中草药对鱼源致病性嗜水气单胞菌（HT333株）的抑菌圈直径和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示，对诃子、五味子、金银花等3种极度敏感，对黄连、苦参、板蓝根、黄芩等4种药物高度敏感，对苏木、五倍子、青皮等9种药物中度敏感，对地丁、白头翁、穿心莲3种药物低度敏感。对诃子、五味子、金银花、黄连、苦参、板蓝根、黄芩等7种药物的MBC在7.825mg/mL～15.65mg/mL之间，对沙棘、五倍子、秦皮3种药物的MBC在31.25mg/mL～62.5mg/mL之间，对青皮、马齿苋、黄柏等8种药物的MBC在125mg/mL～250mg/mL之间，对其他药物则无效果。该研究筛选出了诃子、五味子、金银花、黄连、苦参、板蓝根、黄芩等7种对鲤的源致病性嗜水气单胞菌敏感的中药，为进一步进行组方及中草药防控鲤的嗜水气单胞菌病提供研究基础。

关键词：中草药；鲤（Cyprinus carpio）；嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）；体外抑菌试验

中图分类号：S965.116文献标志码：A

鲤（Cyprinus carpio）属于鲤科鲤属杂食性鱼类，主要在江河、湖泊、水库、池沼的水草丛生的水体底层生活，以食底栖动物为主，具有身体侧扁而腹部圆、口呈马蹄形、鳍基部较长、背鳍和臀鳍均有一根粗壮带锯齿的硬棘及鳞大特征[1]。鲤具有肉多、营养丰富（富含蛋白质和氨基酸）、适应力强、易养殖等特征，在中国不同地区的池塘中被广泛养殖[2-3]。 嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）为临床中的常见的条件致病菌之一，可以感染多种水生动物，同时也可以感染多种动物和人，引起严重的腹泻、肺炎、败血症等系列疾病，嚴重者可以导致死亡，为临床中常见的典型“人－畜－鱼”共患病原菌[4]。相关研究表明，嗜水气单胞菌是多种水生动物（鱼、虾、龟、海参等）的原发性致病菌，对多种水生动物具有较高致死性，可以引起鲤鱼、黄颡鱼、鲫鱼等多种鱼类发病，严重危害着养渔业的发展[5-6]。在鱼类的养殖过程中，抗菌药物的滥用导致其耐药菌的不断产生和其严重的药物残留，同时污染水体养殖环境，给人类造成严重的危害[7]。中国中草药资源丰富，种类繁多，最早记载于药物著作《神农本草经》中，中草药中含有多种生物活性物质（挥发油、黄酮、鞣质、生物碱、多糖、甙类等），具有抗病原菌、免疫调节等多种药理作用，在多种动物养殖中被广泛应用[8]。因此，该研究以临床分离的鲤源致病性嗜水气单胞菌（HT333株）为试验菌株，测定其诃子、金银花、黄连等26种单味中草药对HT333株的体外抑菌活性，为中草药进一步在鲤养殖过程抑菌应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1菌株与中草药

临床分离的鲤源致病性嗜水气单胞菌（HT333株），在实验室保存。五味子、诃子、金银花、黄连、苦参、苏木、板蓝根、黄芩、沙棘、五倍子、秦皮、青皮、马齿苋、黄柏、夏枯草、连翘、地丁、白头翁、穿心莲、女贞子、蒲公英、大青叶、大黄、薄荷、石榴皮、鱼腥草等26味单味中药购自北京同仁堂医药有限公司。

1.2 实验用中药药液的制备

参考李蕴玉等试验方法，采用水煮方法提取有效成分，26味单味中药进行提取有效成分后进行调整浓度为1g/mL（每1mL药液含1g生药）后，进行分装、灭菌、4℃保存备用[9]。

1.3 菌液的制备与计数

将临床分离的鲤鱼源致病性嗜水气单胞菌（HT333株）进行复苏后进行震荡培养（37℃的恒温）至对数期，进行平板菌落计数，用无菌的营养肉汤调整菌液浓度为108CFU/mL

1.4 体外抑菌圈直径的测定

参考张召兴等试验方法，利用平板打孔法测定诃子、金银花、黄连等26种单味中草药体外抑菌圈直径，其判定标准为：10mm<抑菌直径为低敏；10mm≤抑菌直径<15mm为中敏；15mm≤抑菌直径<20mm为高敏；20mm≤抑菌直径为极敏[10]。

1.5 体外最小杀菌浓度（MBC）的测定

参考张赛奇等试验方法，采用改良微量二倍法分别测定其诃子、金银花、黄连等26种单味中草药的最小抑菌浓度（MIC）[11]。在最小抑菌浓度（MIC）基础上，用无菌棉签分区画线法对细菌进行培养，无菌生长的区域为单味中药的MBC。

2 结果

由表1可知，鲤鱼源致病性嗜水气单胞菌（HT333株）对临床中对诃子、金银花、黄连等26种单味中草药具有不同的体外抑菌。对诃子、五味子、金银花3种药物极度敏感，对黄连、苦参、板蓝根、黄芩4种药物高度敏感，对苏木、五倍子、青皮等9种药物中度敏感，对地丁、白头翁、穿心莲3种药物低度敏感，对其他药物无效果。对诃子、五味子、金银花、黄连、苦参、板蓝根、黄芩7种药物的MBC在7.825mg/mL～15.65mg/mL之间，对沙棘、五倍子、秦皮3种药物的MBC在31.25mg/mL～62.5mg/mL之间，对青皮、马齿苋黄柏、夏枯草、连翘、地丁、白头翁、穿心莲 8种药物的MBC在125mg/mL～250mg/mL，对其他的药物则无效果。

3 讨论

嗜水气单胞菌属于气单胞菌科气单胞菌属成员之一，为临床中常见的典型的“人－畜－鱼”共患病原菌之一，该菌广泛存在养殖环境中，如水体环境、土壤环境及动植物体内等，可以通过多种途径感染动物、鱼类及人，尤其是对鱼类的养殖危害较大，具有侵害鱼类各个组织器官、发病急、死亡率高等特点，尤其是对淡水鱼类的危害较大，该菌给鱼类养殖造成严重的经济损失，严重影响着中国鱼类养殖业的发展。在鱼类养殖过程中，抗菌药物的不合理使用带来一系列的问题[6-7]。随着中国禁抗政策的发布与实施后，中草药及中药提取物作为主要替抗性添加剂被开发与应用。该研究利用平板打孔法和微量二倍稀释法分别测定诃子、金银花、黄连等26种单味中草药对鱼源致病性嗜水气单胞菌（HT333株）体外抑菌活性。结果显示，对诃子、五味子、金银花3极度敏感，对黄连、苦参、板蓝根、黄芩等4种药物高度敏感，对苏木、五倍子青皮等9种药物中度敏感，对地丁、白头翁、穿心莲3种药物低度敏感。对诃子、五味子、金银花、黄连、苦参、板蓝根、黄芩7种药物的MBC在7.825～15.65mg/mL之间，对沙棘、五倍子、秦皮3种药物的MBC在31.25mg/mL～62.5mg/mL之间，对青皮、马齿苋、黄柏等 8种药物的MBC在125mg/mL～250mg/mL，对其他的药物则无效果。筛选出了诃子、五味子、金银花、黄连、苦参、板蓝根、黄芩7种对鲤鱼源致病性嗜水气单胞菌敏感的中药。由于中草药成分复杂，需要进一步研究中草药对鱼源致病性嗜水气单胞菌（HT333株）抑菌药理作用。该研究为进一步进行组方及中草药防控鲤鱼嗜水气单胞菌病提供研究基础。

参考文献：

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[3]梁释介，丁宁，冯淳淞，等.河流网箱养殖与池塘养殖鲤鱼营养及品质评价[J].中国农业大学学报，2023，28（05）：154-162.

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[5]黎英，王文成.鲤鱼嗜水气单胞菌和粘孢子虫病混合感染的诊断与防治[J].渔业致富指南，2023（06）：59-62.

[6]焦锦彪，黄雷，林锋，等.循环水养殖系统中高毒力嗜水气单胞菌的鉴定与药敏试验[J].水生态学杂志，2023，44（03）：136-143.

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[8]孫建军.中兽药在动物养殖中的应用及发展趋势简析[J].吉林畜牧兽医，2021，42（10）：102+104.

[9]李蕴玉，张召兴，贾青，等.单味中草药对鸡致病性绿脓杆菌体外抑菌试验[J].中国兽医杂志，2017，53（2）：52-54.

[10]张召兴，李蕴玉，常超越，等.中药对鸡致病性大肠埃希菌的体外抑菌试验[J].动物医学进展，2017，38（3）：63-67.

[11]张赛奇，王米，蕾娜，等.中药对猪源大肠杆菌O8体外抑菌试验研究[J].家畜生态学报，2015，36（8）：62-65.

In vitro bacteriostatic test of traditional chinese medicine against Aeromonas hydrophila of Cyprinus carpio origin

HUANG Zhanglian

（Pingnan County Agricultural Comprehensive Administrative Law Enforcement Brigade， Guigang 537300， Guangxi China）

Abstract：In order to study the in vitro bacteriostatic activity of 26 single herbs such as chebula， Lonicera japonica， Coptis chinensis against Cyprinus carpio source Aeromonas hydrophila， the assay was conducted on chebula， Lonicera japonica， Coptis chinensis and 26 other single herbs， using the boiling method to extract the active ingredients， adjusting the herbal medicinal liquid concentrated to 1g/mL （each 1mL medicinal liquid contains 1g of raw herbs）， the clinical isolation of carpio source pathogenic Aeromonas hydrophila （HT333 strain） as the test strains， the use of plate perforation method and micro two-fold dilution method to determine respectively. The diameter of the circle of inhibition and the minimum bactericidal concentration （MBC） of 26 single herbs， including chebula， Lonicera japonica， and Coptis chinensis， against the fish-derived pathogenic Aeromonas hydrophila （strain HT333） were determined using the plate punch method and the microdouble dilution method， respectively. The results showed extreme sensitivity to three species of chebula， Schisandra chinensis and Lonicera japonica， and extreme sensitivity to four species of Coptis chinensis， Sophora flavescens， Isatis tinctoria and Scutellaria baicalensis Georgi and 4 other drugs are highly sensitive， moderately sensitive to 9 drugs such as Caesalpinia sappan Linn.， Rhus chinensis Mill. and Citrus reticulata Blanco， and Corydalis bungeana， Pulsatilla chinensis， Andrographis paniculata and 3 other drugs with low sensitivity. To seven drugs such as chebula， Schisandra chinensis， Lonicera japonica， Coptis chinensis， Sophora flavescens， Isatis tinctoria， Scutellaria baicalensis Georgi and others the MBC ranged from 7.825mg/mL to 15.65mg/mL， to Hippophae rhamnoides Linn.， Rhus chinensis， and Cortex fraxini 3 drugs ranged from 31.25mg/mL to 62.5mg/mL， and to Citrus reticulata Blanco， Portulaca oleracea， Phellodendron chinense Schneid and 8 other drugs with MBC ranging from 125mg/mL to 250mg/mL， while it was ineffective against other drugs. This study screened chebula， Schisandra chinensis， Lonicera japonica， Coptis chinensis， Sophora flavescens， Isatis tinctoria， Scutellaria baicalensis Georgi Seven Chinese herbal medicines sensitive to Aeromonas hydrophila， the source pathogen of common carp， were used to provide a research basis for further formulas and herbal remedies for the prevention and control of Aeromonas hydrophila disease in common Cyprinus carpio.

Keywords：Chinese herbal medicine; Cyprinus carpio; Aeromonas hydrophila; antibacterial experiment in vitro

作者简介：黄章连（1979-），女，瑶族，广西平南人。平南县农业综合行政执法大队工程师。主要从事水产养殖技术工作。E-mail：1332342252@qq.com。