简 洁，吴其云，杨孝斌，缪丽兰，吴继春

（贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025）

虾脊兰为兰科虾脊兰属草本植物，广泛分布于我国南方地区，俗称九子连环草，具有清热解毒、消肿散结功效，民间常用于瘰疬、痈肿、风湿痹痛、跌打损伤等疾病的治疗。同属植物泽泻虾脊兰、流苏虾脊兰、剑叶虾脊兰等也作为民间草药使用，功效主治相似［1］。虾脊兰属植物含有挥发油、菲类、生物碱、萜类、甾体、黄酮等成分，具有促进皮肤血液循环、抗血小板凝聚、抗肿瘤等活性［2-4］。课题组前期从虾脊兰甲醇提取物的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取部位分离鉴定了34个化合物，有酚酸、甾体、黄酮、生物碱等［5］。为了系统研究虾脊兰的物质基础，本研究继续对虾脊兰正丁醇部位进行分离，得到17 个化合物，其中15 个为首次从虾脊兰属植物中分离得到。

1 材料

AVANCE NEO 400 MHz 型超导核磁共振仪（德国Bruker 公司）； Xevo G2-S QTOF 型质谱仪（美国Waters 公司）； N-1300 型旋转蒸发仪、A-1000S 型循环水式真空泵（上海爱朗仪器有限公司）； ZF-7 型三用紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）。薄层色谱硅胶H、GF254薄层色谱硅胶板（青岛海洋化工有限公司）； 色谱用聚酰胺粉（中国医药集团有限公司）； 反相C18硅胶（日本YMC公司）； MCI 树脂（北京慧德易科技有限责任公司）； Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶 （美国GE 公司）； 聚酰胺薄膜（台州市路桥四甲生化塑料厂）；C18反相硅胶板（德国Merck 公司）。试剂均为分析纯。

虾脊兰采自贵阳市周边，由贵州中医药大学江洪副教授鉴定为兰科虾脊兰属虾脊兰Calanthe discolorLindl.的全草。标本存放于贵州中医药大学苗医药重点实验室。

2 提取与分离

虾脊兰干燥全草15 kg，粉碎后用甲醇室温浸泡提取3 次，每次7 d，提取液减压浓缩得到浸膏1.8 kg。浸膏混悬于水，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取。

取正丁醇部位（600 g） 溶于水，经聚酰胺柱分离，以甲醇-水（0 ∶1 ～1 ∶0） 梯度洗脱，得到Fr.1～Fr.6。Fr.1 经硅胶柱分离，以乙酸乙酯-甲醇（50 ∶1 ～5 ∶1） 梯度洗脱，得到Fr.1.1 ～Fr.1.4。Fr.1.1 经硅胶柱分离，以乙酸乙酯-甲醇（1 ∶0 ～2 ∶1） 梯度洗脱，得到 Fr.1.1.1 ～Fr.1.1.4。Fr.1.1.1 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-乙醇（10 ∶1～5 ∶1） 梯度洗脱，得化合物1 （10 mg）、2（15 mg）、3 （25 mg）； Fr.1.1.2 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-乙醇（10 ∶1） 洗脱，再经重结晶，得化合物8 （27 mg）、9 （11 mg）； Fr.1.1.3 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（4 ∶2 ∶1）洗脱，得到化合物5 （19 mg）； Fr.1.1.4 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶1） 洗脱，得到化合物6 （13 mg）、7 （28 mg）。Fr.1.2 经MCI 柱分离，以乙醇-水（1 ∶9～10 ∶0） 梯度洗脱，经反相C18柱纯化，以乙醇-水（1 ∶9 ～10 ∶0） 梯度洗脱，再经聚酰胺柱分离，以乙醇-水（3 ∶7） 洗脱，最后经Sephadex LH-20 柱纯化，以甲醇洗脱，得到化合物10 （18 mg）。Fr.1.3 ～Fr.1.4 分别经MCI柱分离，以乙醇-水（1 ∶9 ～10 ∶0） 梯度洗脱，经反相C18柱分离，以乙醇-水（1 ∶9 ～10 ∶0） 梯度洗脱，再经硅胶柱分离，以乙酸乙酯-甲醇-水-氨水（10 ∶ 2.3 ∶ 1.5 ∶ 0.5） 洗脱，得化合物11（17 mg）、12 （16 mg）。Fr.2 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇 （10 ∶1 ～2 ∶1） 梯度洗脱，得到Fr.2.1～Fr.2.4。Fr.2.1 经反相C18柱分离，以乙醇-水（1 ∶9 ～10 ∶0） 梯度洗脱，得到化合物14（21 mg）、15 （10 mg）。Fr.2.2 经聚酰胺柱分离，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸-水（10 ∶5 ∶1 ∶1） 洗脱，再经Sephadex LH-20 柱纯化，以甲醇洗脱，得到化合物4 （16 mg）、16 （35 mg）。Fr.2.4 经聚酰胺柱分离，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸-水（10 ∶5 ∶1 ∶1） 洗脱，再经反相C18柱分离，以乙醇-水（7 ∶3） 洗脱，得到化合物13 （45 mg）。Fr.3 经聚酰胺柱分离，以甲醇-水 （1 ∶1） 洗脱，再经Sephadex LH-20 柱纯化，以甲醇洗脱，得到化合物17 （15 mg）。

3 结构鉴定

化合物1： 白色固体，分子式C32H52O2，ESIMSm/z： 469.4 ［M + H］+。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ： 4.68 （1H，d，J＝2.5 Hz，H-29a），4.57 （1H，dq，J＝2.5，1.4 Hz，H-29b），4.47（1H，m，H-3），2.04 （3H，s，H-32），1.68（3H，d，J＝1.4 Hz，H-30），1.03 （3H，s，H-26），0.96 （3H，s，H-23），0.94 （3H，s，H-27），0.85 （3H，s，H-25），0.84 （3H，s，H-28），0.78 （3H，s，H-24）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ： 171.1 （C-31），151.1 （C-20），109.5（C-30），81.0 （C-3），55.4 （C-5），50.4 （C-9），48.3 （C-18），48.0 （C-19），43.0 （C-14），42.8（C-17），40.9 （C-8），40.0 （C-22），38.4 （C-1），38.1 （C-13），37.8 （C-4），37.1 （C-10），35.6 （C-16），34.2 （C-7），29.8 （C-21），27.9（C-23），27.4 （C-15），25.1 （C-12），23.8 （C-2），21.4 （C-32），21.0 （C-11），19.3 （C-29），18.2（C-6），18.0 （C-28），16.5 （C-24），16.2 （C-25），16.0 （C-26），14.5 （C-27）。以上数据与文献［6］报道基本一致，故鉴定为羽扇豆醇乙酸酯。

化合物2： 无色油状，分子式C5H8O4，ESIMSm/z： 133.0 ［M + H］+。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ： 4.41 （1H，dt，J＝7.0，3.1 Hz，H-3），4.34 （1H，m，H-4），3.76 （1H，dd，J＝12.6，3.8 Hz，H-5a），3.65 （1H，d，J＝12.6，3.5 Hz，H-5b），2.85 （1H，dd，J＝18.1，7.0 Hz，H-2a），2.42 （1H，dd，J＝18.1，3.3 Hz，H-2b）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ： 177.4（C-1），88.4 （C-4），68.3 （C-3），61.3 （C-5），38.1 （C-2）。以上数据与文献［7］ 报道基本一致，故鉴定为3，5-二羟基戊-4-内酯。

化合物3： 无色胶状，分子式C6H12O5，ESIMSm/z： 165.1 ［M + H］+。1H-NMR （400 MHz，CD3OD）δ： 4.75 （1H，s，H-1），3.30 （3H，s，-OCH3）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ：109.1 （C-1），85.1 （C-4），80.6 （C-2），77.2（C-3），61.4 （C-5），54.9 （-OCH3）。以上数据与文献［8］ 报道基本一致，故鉴定为甲基α-L-呋喃阿拉伯糖苷。

化合物4： 无色胶状，分子式C6H12O6，ESIMSm/z： 181.1 ［M + H］+。1H-NMR （400 MHz，CD3OD）δ： 4.03 （1H，m，H-5），4.00 （1H，m，H-6a），3.88 （1H，m，H-4），3.81 （1H，m，H-3），3.68 （1H，m，H-6b），3.65 （1H，m，H-1a），3.53 （1H，m，H-1b）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ： 97.3 （C-2），69.9 （C-4），69.1 （C-5），67.6 （C-3），64.1 （C-1），62.7（C-6）。以上数据与文献［9］ 报道基本一致，故鉴定为β-D-吡喃果糖。

化合物5： 黄色针晶，分子式C8H6N2O2，ESIMSm/z： 163.0 ［M + H］+。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ： 7.89 （1H，dd，J＝7.9，1.5 Hz，H-5），7.64 （1H，dd，J＝7.7，1.6 Hz，H-8），7.18 （2H，m，H-6，7）；13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ： 163.3 （C-4），150.7 （C-2），141.2（C-8a），135.4 （C-7），127.4 （C-5），122.8 （C-6），115.7 （C-8），114.7 （C-4a）。以上数据与文献［10］ 报道基本一致，故鉴定为2，4 （1H，3H） -喹唑啉二酮。

化合物6： 黄色油状，分子式C6H7NO2，ESIMSm/z： 148.0 ［M+Na］+。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ： 7.97 （1H，s，H-6），7.26 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-3），7.13 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-4），4.53 （2H，s，H-7）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ： 152.7 （C-5），150.3 （C-2），136.0（C-6），123.9 （C-3），122.0 （C-4），63.9 （C-7）。以上数据与文献［11］ 报道基本一致，故鉴定为5-羟基-2-羟甲基吡啶。

化合物7： 无色块状结晶，分子式C6H11NO3，ESI-MSm/z： 144.1 ［M-H］-。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ： 3.02 （2H，td，J＝7.0，5.7 Hz，H-4），2.20 （2H，t，J＝7.4 Hz，H-2），1.79（3H，s，H-6），1.60 （2H，p，J＝7.3 Hz，H-3）；13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ： 174.7 （C-1），169.9 （C-5），38.4 （C-4），31.5 （C-2），24.9 （C-3），22.9 （C-6）。以上数据与文献［12］报道基本一致，故鉴定为4-乙酰氨基丁酸。

化合物8： 白色针晶，分子式C10H14N2O5，ESI-MSm/z： 265.1 ［M+Na］+。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ： 11.23 （1H，s，-NH），7.68 （1H，s，H-6），6.16 （1H，t，J＝6.9 Hz，H-1＇），4.24（1H，m，H-4＇），3.76 （1H，q，J＝3.6 Hz，H-3＇），3.55 （2H，m，H-5＇），2.07 （2H，m，H-2＇），1.76 （3H，d，J＝1.3 Hz，H-7）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ： 164.2 （C-4），150.9（C-2），136.5 （C-6），109.8 （C-5），87.6 （C-4＇），84.2 （C-1＇），70.9 （C-3＇），61.7 （C-5＇），39.8（C-2＇），12.6 （C-7）。以上数据与文献［13］ 报道基本一致，故鉴定为2＇-脱氧胸腺嘧啶核苷。

化合物9： 白色粉末，分子式C9H12N2O5，ESI-MSm/z： 251.1 ［M+Na］+。1H-NMR （400 MHz，CD3OD）δ： 7.78 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-6），6.13 （1H，t，J＝6.5 Hz，H-1＇），5.63 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-5），4.31 （1H，dt，J＝6.4，3.3 Hz，H-3＇），3.85 （1H，q，J＝3.3 Hz，H-4＇），3.63 （ 2H，m，H-5＇），2.25 （ 1H，ddd，J＝13.5，6.4，3.8 Hz，H-2＇a），2.10 （1H，dt，J＝13.5，6.4 Hz，H-2＇ b）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ： 164.5 （C-2），150.7 （C-4），141.0（C-6），102.1 （C-5），87.3 （C-4＇），85.6 （C-1＇），70.5 （C-3＇），61.5 （C-5＇），40.4 （C-2＇）。以上数据与文献［13］ 报道基本一致，故鉴定为2＇-脱氧尿嘧啶核苷。

化合物10： 白色粉末，分子式C12H14N2O4，ESI-MSm/z： 251.1 ［M+H］+。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ： 8.88 （1H，s，H-3），8.48 （1H，s，H-6），7.87 （1H，s，H-5＇），7.18 （1H，d，J＝3.4 Hz，H-3＇），6.69 （1H，m，H-4＇），3.78（2H，m，H-2″），3.39 （1H，s，H-3″），3.54（1H，dd，H-4″），3.41 （1H，dd，H-4″），3.16（1H，m，H-1″），2.77 （1H，dd，J＝13.9，9.6 Hz，H-1″）；13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ：154.3 （ C-5），151.1 （ C-2＇），144.9 （ C-5＇），144.9 （C-6），141.8 （C-2），138.8 （C-3），112.6（C-4＇），110.1 （C-3＇），75.1 （C-3″），71.5 （C-2″），63.3 （C-4″），39.7 （C-1″）。以上数据与文献［14］ 报道基本一致，故鉴定为2- （呋喃-2＇-基） -5-（2″S，3″S，4″-三羟基丁基） -1，4-二嗪。

化合物11： 白色粉末，分子式C20H27NSO11，ESI-MSm/z： 490.1 ［M+H］+。1H-NMR （400 MHz，CD3OD）δ： 7.78 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-4），7.24 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-7），7.13 （1H，t，J＝7.6 Hz，H-6），7.01 （1H，t，J＝7.5 Hz，H-5），4.94 （1H，s，H-1″），4.44 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-1＇）；13C-NMR （ 100 MHz，CD3OD）δ：141.9 （ C-3），136.2 （ C-8），124.6 （ C-6），121.6 （ C-9），120.5 （ C-5），119.3 （ C-4），113.1 （ C-2），112.2 （ C-7），106.7 （ C-1″），89.5 （C-1＇），81.9 （C-5＇），78.9 （C-5″），78.0（C-3＇），77.8 （C-3″），75.3 （C-2″），73.8 （C-2＇），71.2 （C-4＇），71.1 （C-4″），62.5 （C-6＇），62.1 （C-6″）。以上数据与文献［15］ 报道基本一致，故鉴定为calanthoside。

化合物12： 白色粉末，分子式C13H14N2O2，ESI-MSm/z： 231.1 ［M+H］+。1H-NMR （400 MHz，CD3OD）δ： 7.44 （1H，dd，J＝7.9，2.9 Hz，H-10），7.31 （1H，dd，J＝11.4，8.1 Hz，H-13），7.15 （1H，m，H-12），7.06 （1H，m，H-11），4.68 （1H，d，J＝6.7 Hz，H-3），3.94 （1H，dd，J＝12.0，5.0 Hz，H-6），3.41 （1H，dd，J＝16.3，4.8 Hz，H-7a），3.05 （1H，m，H-7b），1.72 （3H，d，J＝6.7 Hz，H-15）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ： 167.5 （C-5），138.6 （C-14），132.0 （ C-2），127.5 （ C-9），123.2 （ C-12），120.5 （C-11），119.1 （C-10），112.3 （C-13），107.8 （C-8），58.4 （C-6），51.2 （C-3），24.4（C-7），17.2 （C-15）。以上数据与文献［16］ 报道基本一致，故鉴定为ginsenine。

化合物13： 白色粉末，分子式C17H12N2O4，ESI-MSm/z： 309.1 ［M+H］+。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ： 11.52 （1H，s，-NH），8.84 （1H，s，H-4），8.41 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-5），7.82（1H，d，J＝8.2 Hz，H-8），7.65 （1H，m，H-7），7.42 （1H，d，J＝3.3 Hz，H-3＇），7.34（1H，t，J＝7.8 Hz，H-6），6.62 （1H，d，J＝3.3 Hz，H-4＇），4.68 （2H，s，H-6＇）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ： 167.0 （C-10），157.7（C-5＇），151.7 （C-2＇），141.9 （C-8a），137.6（C-3），132.9 （C-1），132.4 （C-1a），130.3 （C-4a），129.4 （C-7），122.5 （C-5），121.4 （C-5a），121.0 （C-6），116.1 （C-4），113.3 （C-8），111.5 （C-3＇），109.7 （C-4＇），56.4 （C-6＇）。以上数据与文献［17］ 报道基本一致，故鉴定为酒渣碱。

化合物14： 白色粉末，分子式C21H22O7，ESIMSm/z： 409.1 ［M+Na］+。1H-NMR （400 MHz，CD3OD）δ： 7.60 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-7＇），7.14 （ 1H，s，H-3＇），7.10 （ 1H，s，H-5＇），6.90 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-2），6.78 （1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H-6），6.73 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），6.35 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-8＇），5.54 （1H，d，J＝6.3 Hz，H-7），3.85 （3H，s，6＇-OCH3），3.77 （3H，s，3-OCH3），3.72 （3H，s，9＇-OCH3）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ：169.7 （ C-9＇），149.2 （ C-1＇），147.7 （ C-3），146.8 （ C-4），145.9 （ C-7＇），145.3 （ C-6＇），134.1 （ C-1），131.0 （ C-2＇），129.7 （ C-4＇），119.8 （ C-6），119.1 （ C-3＇），116.2 （ C-5），115.7 （ C-8＇），113.7 （ C-5＇），110.6 （ C-2），89.9 （C-7），64.6 （C-9），56.8 （3-OCH3），56.4（6＇-OCH3），54.8 （C-8），52.1 （9＇-OCH3）。以上数据与文献 ［18］ 报道基本一致，故鉴定为gardenifolin H。

化合物15： 白色粉末，分子式C20H20O7，ESIMSm/z： 371.1 ［M-H］-。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ： 9.01 （1H，s，4-OH），7.54 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-7＇），7.23 （2H，m，H-3＇，5＇），6.84 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-6），6.69（2H，m，H-2，5），6.45 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-8＇），5.48 （1H，d，J＝6.6 Hz，H-7），4.99（1H，s，9-OH），3.76 （3H，s，-OCH3），3.68（3H，s，-OCH3）；13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ： 167.5 （C-9＇），150.4 （C-1＇），148.1 （C-3），147.0 （ C-4），145.6 （ C-7＇），144.4 （ C-2＇），132.4 （ C-6＇），130.4 （ C-1），128.0 （ C-4＇），119.1 （ C-6），118.5 （ C-5＇），115.8 （ C-8＇），115.1 （ C-5），113.0 （ C-3＇），110.9 （ C-2），88.4 （C-7），63.2 （C-9），56.3 （-OCH3），56.1（-OCH3），51.7 （C-8）。以上数据与文献 ［19］报道基本一致，故鉴定为山橘脂酸。

化合物16： 黄色粉末，分子式C27H30O16，ESI-MSm/z： 611.2 ［M+H］+。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ： 7.54 （2H，m，H-2＇，6＇），6.84（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5＇），6.39 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.19 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8）；13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ： 177.8 （C-4），164.5 （C-7），161.7 （C-5），157.1 （C-2），156.9 （ C-9），148.9 （ C-4＇），145.2 （ C-3＇），133.8 （ C-3），122.1 （ C-6＇），121.7 （ C-1＇），116.7 （C-5＇），115.7 （C-2＇），104.4 （C-10），101.7 （ C-1″），101.2 （ C-1‴），99.2 （ C-6），94.1 （C-8），76.9 （C-3″），76.4 （C-5″），74.5（C-2″），72.3 （C-4‴），71.0 （C-3‴），70.8 （C-2‴），70.5 （C-4″），68.7 （C-5‴），67.5 （C-6″），18.2 （C-6‴）。以上数据与文献［20］ 报道基本一致，故鉴定为芦丁。

化合物17： 黄色粉末，分子式C21H20O12，ESI-MSm/z： 487.1 ［M+Na］+。1H-NMR （400 MHz，CD3OD）δ： 7.62 （1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H-6＇），7.49 （1H，d，J＝2.2 Hz，H-2＇），6.87（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5＇），6.39 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.20 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-6）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ： 177.9 （C-4），164.7 （C-7），161.6 （C-5），157.1 （C-2，9），144.4 （C-3＇），134.2 （C-3），122.2 （C-6＇），121.7 （C-1＇），116.3 （C-5＇），114.7 （C-2＇），103.3 （C-10），101.0 （C-1″），98.6 （C-6），93.5 （C-8），75.8 （C-5″），72.5 （C-3″），70.7 （C-2″），68.3 （C-4″），60.5 （C-6″）。以上数据与文献［21］ 报道基本一致，故鉴定为槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。

4 结果与讨论

从虾脊兰正丁醇部位分离得到17 个化合物，包括三萜（1）、内酯（2）、单糖及苷（3 ～4）、生物碱（5～6、8～13）、酰胺（7）、新木脂素（14 ～15）、黄酮苷 （16 ～17）。化合物1 ～4、6 ～10、12～16 均为首次从虾脊兰属植物中分离得到。化合物1～16 均为首次从该植物中分离得到。本研究表明，虾脊兰含有丰富的氮杂环生物碱，这类化合物往往具有广泛的生物活性，如calanthoside 能够促进皮肤血液循环［15］，ginsenine 具有PC-12 细胞保护作用［22］，酒渣碱具有抗肿瘤［17］、抗HIV-1［23］等活性。虾脊兰化学成分的活性有待进一步研究。