陈基胜 符明君 林玉美 (海口市第三人民医院麻醉科,海南 海口 571138)

胃癌是一种起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,根据胃癌的总发病率和死亡率,其在恶性肿瘤中排名第二,是全球癌症相关死亡的主要原因〔1～3〕。据2018年统计,全球新诊断胃癌病例103.3万,死亡78.3万〔4〕。吸烟、高盐摄入、病毒感染和遗传等因素可能与胃癌肿瘤的发生有关〔5〕。由于耐药和高复发率等,患者的5年生存率低于30%〔6〕。利多卡因具有明显的抗胃癌活性。利多卡因可抑制胃癌细胞恶性行为和增殖潜力〔7〕。利多卡因可抑制人胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡〔8,9〕。微小RNA(miRNA)异常表达与肿瘤细胞的恶性生物学行为有关。研究表明,miR-4461可促进卵巢癌细胞的增殖和转移〔10〕。但miR-4461在胃癌中的表达和作用及利多卡因的抗胃癌作用是否与miR-4461有关仍需探讨。本研究旨在探讨利多卡因对胃癌细胞恶性表型的影响及潜在分子机制。

1 材料与方法

1.1材料 人正常胃黏膜细胞GES-1及胃癌细胞AGS、N87、HGC-27和SNU-484(中国科学院上海细胞库);miR-4461 inhibitor、miR-4461 mimic及其阴性对照(inhibitor-NC、miR-NC,上海吉玛制药技术有限公司);噻唑蓝(MTT)试剂盒、放射免疫沉淀(RIPA)裂解液、二喹啉甲酸(BCA)试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)。

1.2细胞处理 将AGS细胞接种于6孔板中培养,分为对照组、利多卡因组(用含10 mmol/L利多卡因培养基培养)、anti-miR-NC组(转染inhibitor-NC)、anti-miR-4461组(转染miR-4461 inhibitor)、利多卡因+miR-NC组(转染miR-NC后,用含10 mmol/L利多卡因培养基培养)、利多卡因+miR-4461组(转染miR-4461 mimic后,用含10 mmol/L利多卡因培养基培养),转染按照Lipofectamine2000试剂说明书进行。

1.3实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR) 从细胞中提取总RNA,并进行反转录合成cDNA,在实时荧光定量PCR仪上进行扩增。……