任炳秀 王欣 周呈义 靖功伟 陶敏 麻锦心 王娇亚 叶梅

(遵义医科大学第三附属医院(遵义市第一人民医院) 1核医学科,贵州 遵义 563002;2医院感染管理科)

阿尔茨海默病(AD)是最常见的神经系统退行性疾病,主要表现为进行性记忆障碍,研究表明β-淀粉样蛋白(Aβ)和过度磷酸化的tau是AD的核心病理物质〔1〕;既往研究显示,甲状腺激素在大脑学习和记忆中起重要作用〔2〕,但AD与甲状腺功能异常之间的关系目前仍不清楚,尤其是在甲状腺功能异常诱发和(或)加重了AD还是AD诱发甲状腺功能异常方面目前还不清楚。因此本研究以PC12细胞作为研究对象,在体外培养条件下以冈田酸(OA)诱导PC12细胞tau磷酸化以建立AD细胞模型,并对细胞表达甲状腺激素受体表达情况检测,观察AD病理变化对PC12细胞甲状腺激素受体蛋白及基因表达的影响。

1 资助与方法

1.1主要实验材料 未分化PC12细胞(南京金斯瑞生物科技有限公司),OA (Sigma-Aldrich Biotech Co.Ltd.),甲状腺激素受体(THRα,β)PCR试剂盒(yeasen Biotech Co.Ltd.),Western印迹所有抗体、试剂(南京金斯瑞生物科技有限公司),细胞培养基、马血清(15%)胎牛血清(2.5%;Gibco,Invitrogen,USA),噻唑蓝(MTT)及二甲基亚砜(DMSO)(Beijing labgic Technology Co.Ltd.),神经生长因子(NGF,ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.),MTT检测试剂盒(Sigma-Aldrich Biotech Co.Ltd.)。

1.2主要实验仪器 生物安全柜(Jinan Biobase Biotech Co.td),ABI7500 Fast Real-Time PCR System(Applied Biosystems,Co.td,USA),Multiskan FC酶标仪(Thermo Scientific,Co.Ltd.),免疫荧光显微镜检测系统(NOVA View,INOVA Diagnostics,Inc.)十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)仪和转膜仪(Jinan Biobase Biotech Co.td)。

1.3PC12细胞的培养及OA诱导实验 将PC12细胞按1×104/ml 10 ml接种于75 cm2塑料培养瓶中,于37 ℃含20%CO2的培养箱内进行培养,培养基含90%的高糖DMEM、5%马血清、5%胎牛血清、0.01%谷氨酰胺组成。培养5～10 d后,经0.25%胰蛋白酶消化(37 ℃,5 min)传代,以1×104/ml 10 ml接种于75 cm2塑料培养瓶中进行扩增培养。……