李 涛，周永灿，曹贞洁，孙 云

（海南大学海洋生物与水产学院/海南省热带水生生物技术重点实验室/南海海洋资源利用国家重点实验室，海南 海口 570228）

石斑鱼（Epinephelus）主要在我国东南沿海一带养殖，是我国南方渔民重要的经济来源之一[1]。哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）是一种广泛分布于海洋中的嗜盐性条件致病菌，可严重威胁石斑鱼、卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）、矛尾复虾虎鱼（Synechogobius hasta）、方斑东风螺（Babylonia areolata）等多种水产动物的健康[2-5]。由哈维氏弧菌引起的弧菌病被认为是石斑鱼养殖过程中主要的疾病之一，流行时间多处于夏季高温期，当外界条件适宜，哈维氏弧菌大量繁殖，并通过石斑鱼的伤口、鳃或消化道侵染机体，导致机体组织器官发生病变，最终导致石斑鱼的死亡[6]。随着水产动物病害问题的日益突出，“早发现早治疗”变得尤为重要，因此，加强病原早期的快速诊断和筛查，研发病原的快速检测手段迫在眉睫。

环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术是目前等温扩增领域应用最多的方法，其具有高特异性、高灵敏度、设备简单（简易恒温装置即可）、反应快速（可在1 h内对靶序列实现109倍的扩增）等诸多优势[7]。此外，LAMP技术已实现扩增产物的可视化，即可通过在扩增产物中加入钙黄绿素、SYBR Green I、Neutral red、SYTO-9 等染料后直接肉眼观察颜色变化来判定反应情况，避免通过电泳检测、浊度仪等方法的费时现象，突破了该技术使用场合的局限性，在病原快速检测方面具有巨大的发展潜力[8]。目前，LAMP技术已在斑点叉尾鮰（Ictalurus punctatus）病毒（CCV）[9]、迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）[10]、鳗弧……