张 涛,张耀刚,杨紫晗,沈银红,马艳艳

泡型包虫病(Alveolar echinococcosis,AE)是由多房棘球蚴幼虫感染引起的容易被忽视的人兽共患寄生虫病。青藏高原地区是泡型包虫病的高发区,青藏高原包虫病平均检出率是非青藏高原地区的10倍[1-2]。近年来研究发现,多房棘球蚴能在具有免疫能力的宿主体内长期存活并大量繁殖,从而使其实现免疫耐受[3-7],但其具体机制尚不明确。负性协同刺激分子程序性死亡分子1 (programmed death 1,PD-1)通过抑制或下调T细胞活化和IL10等细胞因子的产生增强机体对病原体的耐受,从而引起免疫抑制[8-9]。本研究通过多房棘球蚴原头节(Protoscoleces,PSCs) 感染阻断PD-1分析其对巨噬细胞吞噬功能的影响,明确PD-1在泡型包虫病患者中免疫耐受的作用,为进一步揭示多房棘球蚴致宿主免疫耐受的机制提供依据。

1 材料与方法

1.1 临床组织样本收集 根据术后AE患者肝脏组织的病灶定位,选取小于病灶周围0.5 cm处肝脏组织为病灶近旁肝脏组织 (close liver tissue from the lesion,CLT);同时采集超过病灶2 cm以上的肝脏组织为病灶远端肝脏组织(distant liver tissue from the lesion,DLT)。收集病灶近旁肝脏组织和病灶远端肝脏组织置于10%的中性甲醛中固定过夜,用于病理切片。该研究通过青海大学附属医院伦理批准(P-SL-2019033),并在中国人类遗传资源备案。所有AE患者均签署知情同意书。

1.2 细胞系 RAW264.7细胞购自中国科学院上海细胞库,培养在含有10%FBS 的DMEM培养基中,置于37 ℃,5%的CO2培养箱中。

1.3 主要试剂及仪器 DMEM购自Gibco公司,胎牛血清购自上海达特希尔生物科技有限公司,信迪利单克隆抗体购自信达生物制药有限公司,CD68抗体购自美国Novus biologicals公司,PD-1抗体和CD47抗体购自武汉三鹰生物技术有限公司。……