贺泓霓,王江,胡辉权,袁心柱

人类子宫内膜在经历分娩、月经、感染等损伤后的快速重塑和再生对生殖至关重要[1]。子宫内膜修复障碍会导致月经异常、闭经、流产、不孕等一系列综合征[2]。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞经特定程序向具有间质表型细胞转化的过程[3],在多种疾病的发生发展和治疗中发挥重要作用[4]。若子宫内膜上皮细胞过度EMT,内膜表面会产生大量纤维沉积,使得子宫内膜功能层受损,最终导致宫腔粘连形成[5]。

粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)是一种糖蛋白,在人体多系统中起着重要作用[6-7],G-CSF可改善子宫内膜容受性和妊娠率[8]。到目前为止,G-CSF增加子宫内膜厚度、改善子宫微环境的具体机制和调控因素尚不明确。最近的一项研究发现,lncRNA MCTP1-AS1通过调控SMAD7轴调节子宫内膜细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT过程[9-10]。然而G-CSF能否通过调控MCTP1-AS1和SMAD7来介导子宫上皮细胞EMT尚缺少相关的报道。

本研究拟通过检测G-CSF在子宫上皮细胞中的表达,分别评估沉默G-CSF和过表达G-CSF对子宫上皮细胞EMT的影响,并探讨子宫上皮细胞EMT的过程是否涉及G-CSF-MCTP1-AS1/SMAD7通路,以寻找抑制子宫内膜上皮间质化、促进子宫内膜修复的新疗法和新治疗靶点。

1 材料和方法

1.1 细胞培养

人宫颈上皮细胞株:H8细胞,购自北京中原生物公司(ATCC中国一级代理商),将细胞于37℃、5% CO2条件下培养在含10%胎牛血清的杜尔贝科改良鹰培养基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium,DMEM)中。细胞传代:将细胞培养瓶放入培养箱中静置3 h,吸出DMEM,用磷酸盐缓冲溶液清洗细胞;添加1 mL 0.25%胰蛋白酶消化液以覆盖全部细胞,37℃水浴1～3 min。……