付瑶 刘海婷 施俊超 栾天 文静 张俊 张大军

作者单位：110000 辽宁沈阳，沈阳医学院药学院

实时荧光定量聚合酶链反应（real time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）作为一种高效、灵敏的基因检测技术，是检测各种类型病原微生物的常用方法，也常用于基因检测［1-2］。目前广泛采用RT-qPCR 作为新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）检测的首选方法［3-4］。但是在RT-qPCR 的应用中也存在因其敏感度高导致结果容易出现假阳性，且因检测样本极易受到污染，从而造成检测结果不准确的问题，特别是针对片段长度较短的DNA 和RNA 样本，容易出现假阳性或假阴性结果。

微小RNA（micro RNA，miRNA）作为一类内源性的、长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子，可通过几个miRNA 的组合来精细调控某个基因的表达。miRNA 有多种存在形式，能够在组织样本和无细胞生物液体（如血清或血浆）中被检测到，且已被证明会影响多种重要的生物学过程，如细胞生长、组织分化、细胞增殖、胚胎发育和细胞凋亡［5］。本研究拟选择miR-132 和miR-U6 作为检测对象，分析影响RT-qPCR 实验结果的关键点，并筛选最优检测方法，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1仪器与试剂

1.1.13 种miRNA 提取方法 提取方法1：使用Easy Pure®miRNA 提取试剂盒（由北京全式金生物公司提供）；提取方法2：使用miRNA 提取试剂盒（由德国QIAGEN 生物公司提供）；提取方法3：使用Trans Zol Up Plus RNA 提取试剂盒（由北京全式金生物公司提供）。

1.1.23 种反转录方法 反转录方法1：使用Trans Script®第一链cDNA 反转录试剂盒（北京全式金生物公司）；反转录方法2：使用Evo M-MLV 反转录试剂盒（湖南艾科瑞生物工程有限公司）；反转录方法3：使用miRNA 第一链cDNA 合成试剂盒（美国GeneCopoeia 公司）。……