武峻捷,朱永娜,姜丽娜,武庆华,张伟健,石 昕,刘 茜

2006年SONOYAMA等[1]分离培养人第三磨牙根尖部组织后,发现一种具有高增殖、分化潜能的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),命名为根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)。作为MSCs的一种,SCAPs具有较高的增殖潜能、迁移能力,且易获取[2-4]。因此SCAPs有望作为种子细胞用于牙组织再生,其相关研究在一定程度上可促进牙组织工程的发展。白细胞介素(IL)-34是LIN等[5]发现的一种炎症因子。本课题组前期研究发现, IL-34 对 SCAPS 的增殖、迁移具有调节作用[6-8],但其调节机制尚不清楚。核因子-κB 受体( nuclear factor-kappa B,NF-кB)是细胞内重要的核转录因子[9]。研究[10-11]发现, TNF-α、IL-1β等炎症因子可介导NF-кB信号通路, 提高SCAPs的增殖、迁移能力。而抑制 NF-кB信号通路后,SCAPs的增殖和迁移能力受到显著抑制[12]。此外IL-34也已被证明可以调节MSCs中NF-κB信号通路[13]。本课题组推测IL-34可能通过介导NF-кB信号通路从而调节SCAPs的增殖和迁移。本课题以小鼠SCAPs为研究对象,探讨体外条件下IL-34通过NF-кB信号通路对SCAPs增殖、迁移的影响,现作报道。

1 材料和方法

1.1 主要仪器及试剂 离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司);流式细胞仪(BD,美国);细胞培养板(TRUELINE,美国);CO2恒温培养箱(Thermo,美国);倒置显微镜(OLYMPUS,日本);胎牛血清(GIBCO,美国);DMEM(Hyclone,美国);胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)(Solarbio,美国);CCK-8(SAB,美国);酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 SCAPs的分离培养 取10只1周龄的小鼠麻醉处死后,将小鼠下颌中切牙在无菌条件下拔出,转入无菌超净工作台中,显微镜下用含双抗的磷酸缓冲液(PBS)冲洗分离小鼠根尖牙乳头组织,将其剪碎成约为1 mm3的小块。然后将组织块消化30～40 min,然后1 000 r/min离心5 min后弃上清液,加入含20%FBS和1%双抗的高糖DMEM培养基中,37 ℃,5%CO2培养。……