杨小苗，申成香，潘成娜，曹 明，朱燕燕，蒋 艳，怀建国

芜湖市第一人民医院 病理科，安徽 芜湖 241000

幽门螺杆菌(hclicobacter pylori，HP)是革兰氏阴性菌，形态呈螺旋状，主要生存于胃部及十二指肠，HP感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴瘤和胃癌等疾病密切相关。有研究报道，根除治疗HP可以使胃癌发病风险降低至原来的53%，并同时降低了无症状感染者和胃癌切除术后患者的胃癌发生风险[1]。一般认为，胃癌(肠型胃癌为主)的经典病理进展过程为正常胃黏膜→浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠上皮化生→异常增生→胃癌[2]。HP感染是诱发萎缩、肠化生的主要原因。有研究报道，根除HP可部分逆转萎缩，但难以逆转肠化生[3]。在胃黏膜萎缩或肠化生前根除HP获益最大，若已发生胃黏膜萎缩或肠化生者，根除HP可延缓胃黏膜萎缩和肠化生的进展，大大降低胃癌发生的风险[4]。本研究旨在探讨应用13C-尿素呼气试验(urea breath test，UBT)法及特染硼酸亚甲蓝法(以下简称特染法)检测HP的效果。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2020年5—12月芜湖市第一人民医院收治的149例患者为研究对象，其中，男性78例，女性71例；年龄24～87岁，平均年龄67.5岁。纳入标准：(1)有或无胃部不适等临床症状；(2)行胃镜检查前均进行了13C-UBT法检测HP，胃镜活检后标本均进行了特殊染色；(3)均具备良好的语言沟通能力及行为认知能力。排除标准：(1)1个月内使用过抗生素、铋制剂、质子泵抑制剂等HP敏感药物；(2)1周内出现过消化道出血症状。149例患者均有或无胃部不适等临床症状，病理诊断结果均有不同类型的炎症表现，其中，75例表现为黏膜慢性炎、活动性炎；23例表现为萎缩性炎及轻、中或重度肠化；15例表现为上皮内瘤变；4例表现为胃癌。本研究经医院伦理委员会批准。所有患者均对本研究知情同意。

1.2 研究方法

1.2.113C-UBT法 患者空腹或禁食2 h以上，首先，吹满带有“服药前”字样的气袋，拧紧盖帽，即收集0 min呼气袋；随后，用50 ml左右的饮用水送服1片13C药片，静坐20 min，等待期间不可进食、饮水、抽烟及剧烈运动；然后，20 min后吹满带有“服药后”字样的气袋，拧紧盖帽，即收集20 min呼气袋；最后，将0 min呼气袋和20 min呼气袋与13C呼气分析仪连接进行检测。尿素13C片呼气试验试剂盒购自北京海德润医药集团有限公司，检测仪器为北京华源康达13C呼气分析仪(型号HY-50)，检测软件为北京华源康达13C呼气软件。

1.2.2 特染法 黏膜组织取样后放入甲醛标本瓶中保存送至病理科，常规取材、脱水、包埋、切片(4 μm厚度)，脱蜡至水洗，滴加HP特染试剂100 μl硼酸亚甲蓝于切片组织上，染色5～10 min(染色时间控制可在显微镜下观察)，蒸馏水冲洗，切片烤干或风干，二甲苯透明，中性树胶封固，镜检。HP特染试剂硼酸亚甲蓝购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 诊断标准

1.3.113C-UBT法 C呼气分析仪通过计算20 min分析值与0 min分析值的比值，即13C-UBT超基准值(delta over baseline，DOB)，DOB≥4‰判定为阳性，DOB<4‰判定为阴性。

1.3.2 特染法 根据显微镜(高倍40×)下观察到有无HP以及量的多少，判断是否存在HP感染及感染的严重程度。HP多散在或簇状分布于胃黏膜黏液层、表面上皮、小凹上皮和腺管上皮内，蓝色，弯曲状或杆状。根据我国慢性胃炎诊断标准和新悉尼系统判定HP感染细菌的密度[5-6]：无(-)，特殊染色切片上未见；轻度(+)，偶见或<标本全长1/3，有少量菌体；中度(++)，菌体分布于标本全长的1/3～2/3或连续性，稀疏分布在表面；重度(+++)，菌体成堆存在，基本分布标本全长。高倍(40×)显微镜下染色结果图片见图1、2。

图1 HP阴性特染法染色结果(40倍) 图2 HP阳性特染法染色结果(40倍)

1.3.3 结果判定 内镜检查由消化内科医师进行，根据内镜下观察，并钳取病变部位胃黏膜。病理诊断参照《慢性胃炎及上皮性肿瘤胃黏膜活检病理诊断共识》[7]，由两名诊断医师采用双盲法独立判读。

1.4 统计学方法 采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行处理。计数资料用例(百分率)表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

149例患者中，13C-UBT法检测HP阳性且特染法检测HP阴性7例，13C-UBT法检测HP阴性且特染法检测HP阳性68例。

2.1 两种方法检测HP感染阳性率比较 149例患者中，13C-UBT检测HP阳性40例，阴性109例，阳性率为26.85%(40/149)；特染法检测HP阳性101例，阴性48例，阳性率为67.79%(101/149)。特染法阳性检出率明显高于13C-UBT方法，组间比较，差异有统计学意义(χ2=48.462，P=0.000)。

2.2 两种方法在诊断伴有肠化患者中检测HP感染阳性率比较 在诊断伴有肠化生的64例患者中，13C-UBT检测HP阳性20例，阴性44例，阳性率为31.25%(20/64)；特染法检测HP阳性42例，阴性22例，阳性率为65.63%(42/64)。特染法阳性检出率高于13C-UBT方法，组间比较，差异有统计学意义(χ2=13.795，P=0.000)。

3 讨论

HP感染是一种感染性疾病，无论有无症状，伴有或无消化性溃疡以及胃癌[8]，一经感染可能终生携带[9]；并且，HP可以在人与人之间传播，主要是经口传播[10]。因此，采用合理、有效、准确的HP检测方法是预防和控制HP感染引起的消化道疾病的强有力的手段。目前，用于检测HP的方法大致分为两大类，一类为非侵入性检测，如UBT(包括13C-UBT和14C-UBT)；另一类为侵入性检测，如内镜检查、病理组织学检查等。非侵入性检测方法中临床较为常用的是UBT，两种方法中因13C-UBT使用药剂不含放射性物质而受到广泛使用；侵入性检测方法较为常用的是内镜检查结合快速尿素酶试验或病理组织学检查。《中国慢性胃炎共识意见(2017年,上海)》指出，70%～90%的慢性胃炎患者患有HP感染[5]，慢性胃炎活动性的存在高度提示HP感染[11-12]。本研究结果发现，病理学方法(特染法)的HP阳性检出率达67.79%，更接近于共识意见中指出的70%～90%的数据。

大多胃癌的发生是由于长期的HP感染，继而触发Correa级联反应，最终发展为恶性肿瘤，HP感染是肠化生的首要致病因素[13]。有研究报道，HP感染者发生肠化生的危险系数较非HP感染者高4.7倍，因此，肠化生的发生可间接反映出感染HP[14]。本研究149例患者中，64例病理诊断伴有肠化生，对其HP感染检测结果进行比较后发现，病理学方法检出的阳性率为65.63%，13C-UBT方法检出的阳性率仅为31.25%。由两组数据比较可以看出，13C-UBT方法对HP感染阳性的检出率过低，与“肠化生的发生可间接反映出感染HP”这一观念并不相符，仍需后续研究进一步验证。

胃黏膜活检组织病理学方法检测HP感染是一种侵入性检查手段，进行胃黏膜活检的主要目的是发现病变并明确病变性质，做出准确的病理诊断，从而指导临床医师做出精确而有效的治疗方案[7]。组织学检查曾被认为是HP检查的“金标准”[15]。胃黏膜活检组织通过病理特殊染色硼酸亚甲蓝法染色后，显微镜下菌体呈蓝色，弯曲或短杆状分布于黏膜表面上皮或腺腔内，菌体形态清晰，较为直观，易于观察；此检测方法敏感性高，结果准确可靠，切片可永久保存，便于回顾性调阅[16]；染色流程操作简便、快捷，仅需5～10 min；因此，在HP检测方面得到大力推广，为临床治疗提供可靠的依据，可作为胃黏膜活检判断HP感染人群的首选方案之一。

13C-UBT方法利用HP的尿素酶活性分解患者服下含13C标记的尿素胶囊，通过特定仪器测出分解产物13C来判断有无HP感染[17]。13C-UBT方法检测HP感染是一种非入侵式手段，患者依从性好，具有无创、简便、快捷等优点，特异性高，可实现较为准确的“全胃”式检测，避免了HP“灶性”分布而造成的假阴性结果。但有研究报道，UBT试验检测值的大小与HP感染的密度有关[6]。本研究结果发现，两种检测方法的结果中病理检查特殊染色方法阳性但13C-UBT方法阴性者68例，回顾查阅这些病历资料发现，其中，47例病理诊断结果为阳性(+),提示HP轻度感染，此时可能由于细菌含量较少，密度较小，导致分解产物中13C含量不足或接近于临界值附近，准确性下降，敏感性降低，继而出现假阴性结果。

本研究结果发现，特染法HP阳性检出率明显高于13C-UBT方法，差异有统计学意义(P<0.05)。这提示，病理检查方法更加直观、准确，相比13C-UBT方法更胜一筹，具有更高的阳性检出率；而且，还可以观察到胃黏膜发生的病理变化，对于其他疾病诊断具有很大的价值[18]。13C-UBT方法作为一种无创的检查方法，具有安全、快捷、无交叉感染等优点，更容易被患者接受。但此检查方法也受很多因素的影响，导致出现假阴性或假阳性，如胃胆汁返流、质子泵抑制剂、消炎药、上消化道出血或吹气不当等问题造成假阴性结果，消化道中除HP外还存在其他细菌产生的尿素酶[19]，而影响检测结果造成假阳性。因此，仅针对本研究的两种检测方法，可根据受检者情况而定，采用分流策略[18]。一般常规人群HP感染筛查或根除治疗后的复查，可采用无创伤的13C-UBT方法；日常有不适临床症状者或胃恶性肿瘤高危人群，可采用胃镜检查结合胃黏膜活检病理学检查(常规病理+特殊染色)。HP的多种检测方法结合使用获取最可靠的结果是临床操作中常用的最佳选择[15，19-20]。

综上所述， 特染法检测幽门螺杆菌的效果更优于13C-UBT法。两种方法同时应用能更加准确地进行幽门螺杆菌的检测，更有效地指导临床用药治疗。HP相关疾病应尽早发现，及时治疗，定期复查，以控制相关疾病的进一步发展、恶化。