刘艳春，舒淑芬，项飞兵，陈文煜，肖 妙，崔晨燕

（黄冈市公共检验检测中心，湖北黄冈 438000）

蔬菜中农药残留（以下简称“农残”）超标，会严重影响消费者安全与健康。为应对该类产品保质期短、流动性快的特殊性，在短时间内完成从样品制备到检测结果出具整个过程的快检是非常必要的。快检设备可有效避免大型仪器对场地、人员等的高要求，实现在实验室外对新鲜蔬菜等初级农产品的快速检测。有机磷及氨基甲酸酯类杀虫剂使用广泛，占杀虫剂用量的70%以上[1]，是蔬菜中残留的主要农药种类，也是目前农药残留检测的重点。此外，对于该类物质的检测已有相关国标方法[2]，因此对这两类农残的快速检测方法进行研究具有非常重要的意义。

常见的农残快检方法有酶抑制法、免疫分析法、生物传感器法等多种方法[3]，每种方法具有不同的特点，适用于不同的检测环境。且已开发出速测卡法、快速测定仪、胶体金法以及生物传感器[4-6]等多种类型的产品，农残快速检测仪以其快速、灵敏便捷、低成本等特点，被广泛应用于商超市场、蔬菜基地等的产品质量检验工作中，成为果蔬类农药残留初筛的重要工具[2]，通过初筛、定性分析，最终获得农残初步结果。本文介绍的是采用乙酰胆碱酯酶抑制方法为原理的农残快速检测仪在检测过程中的影响因素，旨在通过对影响检测结果的因素进行考察，保证检测结果的准确性，从而降低检测风险，为其推广应用提供技术支持。

1 工作原理

农残快速检测仪的工作原理是比色法[7]，利用农药靶标酶活性受抑制的程度，通过测定特定波长处吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，从而对有机磷和氨基甲酸酯类农药进行定性判定。

2 检测前的质量控制

2.1 设备与试剂

设备管理人员应做好仪器设备定期检查检修工作，做好量具的定期检定工作，确保仪器设备能满足检测需求。

试剂管理人员应做好试剂验收及管理工作，按要求合理存放试剂。配制的酶、显色剂、底物应于4 ℃冰箱中储存；缓冲溶液应以蒸馏水或去离子水配备，配好后于4 ℃冰箱中储存。同批次样品的检测中，为减少数据的误差，应选用同一批次的试剂。此外，还应定期处置过期试剂。

2.2 样品

抽样人员应按照农业部相关要求[8]，按操作规程抽取有代表性样品，抽样器具、包装材料要干净独立，杜绝污染，标签信息要完善，所抽样品应及时送检避免变质、受损或污染；他人送检样品，抽样人员应做好收样工作，分别包装登记，及时送检。

2.3 人员

抽样人员、检测人员应具有一定水平的知识储备和业务能力，经培训后，持考核通过证上岗。抽样人员要保证所抽样品能够反映所抽批次真实情况；检测人员应能熟练理解测试原理，能准确使用快检仪器，能及时发现异常数据并处理常见故障，能对所检测数据负责。

3 检测中的质量控制

3.1 样品前处理

将待检样品剪成1 cm2的碎片，选取1 g样品，加提取液5 mL，振荡萃取2 min后静置，滤液即为样品提取液。

3.1.1 取样

取样不可过碎，以免色素过多干扰；对汁水过多的番茄等样品，要拭去多余汁液，避免提取液混浊，干扰透光。

3.1.2 萃取

用5 mL提取液提取，时长以2 min为宜，该条件下既能充分提取又能避免色素漫出。有研究表明，直接浸提法对农残的提取率不高，且不能利用相似相溶原理采用有机溶剂进行提取，因有机溶剂会使酶失活，而去除有机溶剂的大型设备及烦琐过程将使快检失去快这一重要特点[9]。姜露等[9]发现通过超声萃取可以有效提高农药提取效率；对颜色较深的提取液经有机滤漠过滤后，可以在保证较好的回收率的前提下，排除有色物质的干扰。苏明伟等[10]通过条件优化，首次实现将亚临界水萃取技术用于果蔬中的农药残留样品的预处理，并得到了耗时短、提取率高的亚临界水萃取的最优条件。也有研究表明，对易产生假阳性的含硫化合物的蔬菜可采取整株蔬菜浸提法，对叶菜类含色素较高的蔬菜采用茎处表皮也能减少干扰[11-12]。

3.2 样品检测

3.2.1 酶

酶是一种高度专一，被广泛应用的强催化剂。酶的来源主要有两种，即动物或植物。有研究表明来源于动物或植物的酶作用相同，其准确度和精密度相近[13]。酶活性及对农药的敏感度会直接影响检测的准确性及可信度，因此对其改良优化一直是研究热点。因此，在实际工作中，同批次检测中酶应保证其同一性，选用同一厂家同一批次的，且合理保存以保持活性，减少其对结果的影响。购置的酶于4 ℃冰箱中储存时，处于休眠状态，使用时，应取出后放置至室温，苏醒活性。例如，空白试样的ΔA＜0.3，则活性已不能满足实验要求，不可再用。

3.2.2 pH值

pH值会影响酶活力。有研究表明不同胆碱酯酶具有最佳活力的pH值略有不同[14]。也有研究显示，适宜的pH值范围可以减少某些特殊种类样品出现假阳性。有些辛辣类的蔬菜，如葱、大蒜、韭菜等，因其切口会产生硫化物，与有机磷和有机氯类农药性质相似，从而产生假阳性[15]，严重影响检测结果。加热理论上可以去除硫化物，从而避免假阳性，但同时也会不可避免的造成农药的分解[16]。王文等[1]研究发现，通过改进检测条件（pH值），可以减小检测中含硫物质对乙酰胆碱酯酶的抑制作用，同时还能保证有机磷和氨基甲酸酯类农药的正常检测，为后续研究开辟了一种新的研究思路。

3.2.3 温度

提取温度会影响提取效率及酶的活性，温度过高，酶失活，会降低抑制反应；在温度不足37 ℃的情况下，酶反应的速度会降低；反应温度为37 ℃时测定结果较好[17]。因此，检测中应配备恒温水浴锅，保持温度恒定，使试样在恒温水浴锅中的反应结果的重现性较好[18]。苏明伟等[10]研究获得了抑制率对温度的校正公式，真正实现了野外检测。通过温度较正，实现了在无恒温水浴的条件下，将现场温度下测得的抑制率校正到37 ℃的抑制率。

4 检测后的质量控制

2022年新修订的《中华人民共和国农产品质量安全法》中，第五十条规定，经相关部门认定的快速检测方法可以作为行政处罚的证据。但从业人员须知由于快检仪检测中大量假阳性的存在，因此快检结论通常只作定性结论，不可轻易作为处罚依据。对易出现假阳性的品类，应谨慎对待。必要时，应将前述品类样品进行定量检测，测得农药品种和含量，再作出最终定断。

5 结语

农残快检仪可及时筛查不合格食用农产品，避免不合格食用农产品流入市场，对加快推进食用农产品集中交易市场快检室建设显得尤为重要。例如，可形成安全预警前移，为重大活动提供食品保障；价廉快速，有利于大规模推广应用，对违规使用农药形成震慑。相关从业者应深刻学习研究农残快检的相关知识，做好关键点的控制，确保检测数据的真实可靠。相关农业部门应做好农技、农药宣传工作，鼓励绿色种植，少用或不用农药，绿色种植，从根本上减少农药残留。