邓松岳，孟建升，蒋俊春

(商丘市食品药品检验检测中心，河南 商丘 476000)

华蟾素有抗肿瘤、免疫调节等作用，其制剂是临床常用药物。对于肿瘤患者，经过积极的手术、放射治疗、化学治疗等综合治疗以后，同时配合使用华蟾素，可以起到一定的辅助治疗作用，对于防止肿瘤的复发、延缓疾病的进展、改善预后具有一定作用。华蟾素肠溶胶囊是由干蟾皮加工制成的中药制剂，蟾皮及其制品临床应用广泛，特别是以干蟾皮为主要原料制成的水溶性制剂华蟾素为我国自行研发的二类新药，对各种原发性恶性肿瘤具有较好的疗效。蟾皮的化学成分复杂，目前分离获得的主要单体有蟾蜍二烯羟酸内酯类、吲哚生物碱类、蟾蜍环酰胺等化合物；其中吲哚生物碱类化合物具有一定的药理作用，特别是抑制性神经递质5-羟色胺。为了加强华蟾素肠溶胶囊的质量控制，保证产品疗效，本研究参照《中国药典》2020年版四部通则(溶出度与释放度测定法)[1]，采用第三法小杯法，以5-羟色胺为测定指标，探讨华蟾素肠溶胶囊的体外溶出度测定方法，以期为该制剂的临床应用提供质量保障。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器5-羟色胺盐酸盐对照品由中国食品药品检定研究院提供(批号：111656-200401)，五氧化二磷、对二甲氨基苯甲醛(天津市大茂化学试剂厂)、盐酸(洛阳市化学试剂厂)、磷酸钠(天津市德恩化学试剂有限公司)均为分析纯，华蟾素肠溶胶囊购自陕西东泰制药有限公司(每粒 0.25 g；国药准字Z20050846)；紫外分光光度计购自安捷伦(中国)有限公司，电子分析天平购自岛津企业管理(中国)有限公司，全自动溶出试验仪购自禄亘仪器设备(上海)有限公司，真空干燥箱购自上海博迅实业有限公司，超声处理机购自深圳福洋科技集团有限公司。

1.2 方法

1.2.1 溶出方法由于样品含量比较低，故采用小杯法测定华蟾素肠溶胶囊在盐酸和磷酸盐缓冲液中的溶出情况。将4粒华蟾素胶囊样品加入到100 mL 溶出杯中，溶出介质分别为0.1 mol·L-1盐酸溶液和酸碱度(hydrogen ion concentration,pH)6.8磷酸盐缓冲液，溶出介质体积 100 mL，将溶出杯置于全自动溶出试验仪，溶出温度(37.0±0.5)℃，仪器转速 100 r·min-1，样品于0.1 mol·L-1盐酸溶液和pH 6.8磷酸盐缓冲液中的取样时间分别为2 h 和 30 min。将溶出液经0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液。

1.2.2 建立标准曲线取5-羟色胺盐酸盐对照品适量，在真空干燥箱中干燥至恒重，称取约10 mg(精确至0.1 mg)，加水制成浓度为40 mg·L-1的溶液，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分别置于10 mL量瓶中，加水至5.0 mL，再加入体积分数15%对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液至刻度，摇匀，放置30 min，以水作空白对照，使用紫外分光光度计于555 nm波长处测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标(y)，以对照品浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线。

1.2.3 紫外-可见分光光度法检测溶出度取1.2.1 所得续滤液10 mL，置于20 mL量瓶中，用体积分数15%对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液稀释至刻度摇匀，放置30 min，以水作空白对照，使用紫外分光光度计在555 nm波长处测定吸光度值，带入标准曲线，计算华蟾素肠溶胶囊在0.1 mol·L-1盐酸溶液和磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中5-羟色胺的溶出度。实验重复3次，取均值。《中国药典》[1]中要求：肠溶制剂在酸中溶出度不大于标示量的10%；在缓冲液中溶出度不低于标示量的70%。

1.2.4 精密度试验取5份5-羟色胺对照品溶液5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加入体积分数15%对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液至刻度，摇匀，放置30 min，以水作空白对照，使用紫外分光光度计于555 nm波长处测定吸光度值。

1.2.5 重复性试验取同一批华蟾素肠溶胶囊样品，按照拟定的溶出度测定方法检测华蟾素肠溶胶囊在0.1 mol·L-1盐酸溶液和pH 6.8磷酸盐缓冲液中5-羟色胺的溶出度，实验重复5次，取均值。

1.2.6 回收率考察取华蟾素肠溶胶囊2粒，置于100 mL量瓶中，精密加入5-羟色胺盐酸盐对照品溶液(0.3 g·L-1)1.0 mL， 加入pH 6.8的磷酸盐缓冲溶液溶解后，再加pH 6.8的磷酸盐缓冲溶液至刻度，摇匀，精密量取该溶液5 mL，置于另一10 mL量瓶中，加入体积分数15%对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液至刻度，摇匀，放置30 min，以水作空白对照，在555 nm波长处测定吸光度值，计算回收率。

2 结果

2.1 线性关系考察结果标准曲线的回归方程为y=0.021 85x+0.034 29，相关系数r=0.999 7，5-羟色胺对照品浓度在4.802～21.008 mg·L-1范围内与吸光度值呈良好的线性关系。

2.2 溶出度测定结果华蟾素肠溶胶囊在0.1 mol·L-1的盐酸溶液中的溶出度为(0.04±0.03)%，在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中的溶出度为(84.6±1.9)%，符合《中国药典》有关溶出度的要求。

2.3 精密度相对标准偏差(relative standard deviation，RSD) 为0.76%，精密度良好。

2.4 重复性华蟾素肠溶胶囊在0.1 mol·L-1的盐酸溶液中5-羟色胺溶出度重复性测定的RSD为0.04%，在pH 6.8磷酸盐缓冲液中重复性测定的RSD为2.9%，重复性良好。

2.5 回收率华蟾素肠溶胶囊在0.1 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中5-羟色胺的回收率为97.47%，RSD为1.6%。

3 讨论

体外溶出度测定是考察口服固体制剂生物利用度的主要手段，溶出度测定方法在化学药品中的应用已经发展的比较成熟。因为中药制剂化学成分复杂，体外生物利用度的研究方法不够成熟，所以关于中药制剂体外溶出方法的研究发展相对较慢。但随着传统中药的发展和仪器、技术的不断更新，溶出度测定方法在中药制剂质量控制中的应用也逐渐增多[2-4]。目前，华蟾素片的溶出度测定方法已有文献报道[5-7]。华蟾素肠溶胶囊中华以蟾素毒基和酯蟾毒配基为测定指标的溶出度测定方法也有相关文献文献报道[8]。但华蟾素肠溶胶囊中5-羟色胺在0.1 mol·L-1盐酸和pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶出度测定方法尚未见报道，肠溶胶囊可以有效地缓解药物的不良反应和胃部不适感，由于华蟾素肠溶胶囊有效成分的复杂性和难溶性，使得对其溶出度的测定研究意义重大。

华蟾素肠溶胶囊是以干蟾皮为主要原料加工制成的制剂。《中国药典》[6]中记载的蟾酥以华蟾酥毒基和酯蟾毒配基为测定有效成分。有研究报道，蟾酥药材的另一有效成分为5-羟色胺，其生物活性也特别明显[10-14]。华蟾素肠溶胶囊中5-羟色胺含量比华蟾酥毒基和酯蟾毒配基要高，在溶出介质中更易于溶出，且稳定性较好；而且采用紫外-可见分光光度法测定华蟾素肠溶胶囊中5-羟色胺含量在保证准确性的同时较液相色谱法更易于操作且省时，减少了有机溶剂的使用，更利于环保。故本研究建立华蟾素肠溶胶囊中5-羟色胺溶出度测定方法，以0.1 mol·L-1盐酸溶液模拟胃液，以磷酸盐缓冲液(pH 6.8)模拟肠液，采用紫外-可见分光光度法测定华蟾素肠溶胶囊的体外溶出情况，以期用于华蟾素肠溶胶囊的质量控制。

肠溶制剂在体内的溶出和定位吸收情况要通过溶出度的测定来进行评价[15-17]。本研究结果显示，华蟾素肠溶胶囊在0.1 mol·L-1盐酸溶液中的溶出度为(0.04±0.03)%，在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中的溶出度为(84.6±1.9)%，华蟾素肠溶胶囊在模拟胃液中的溶出度不超过10%，在模拟肠液中的溶出度不低于70%，符合《中国药典》的要求。本研究方法线性关系考察结果显示， 5-羟色胺盐酸盐对照品浓度在4.802～21.008 mg·L-1范围内与吸光度值呈良好的线性关系。本研究方法精密度、重复性良好，且华蟾素肠溶胶囊在0.1 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中5-羟色胺的回收率较高。

综上所述，本研究所建立的华蟾素肠溶胶囊中5-羟色胺的体外溶出测定方法在模拟胃液中的溶出度不超过10%，在模拟肠液中的溶出度不低于70%，精密度、重复性良好，回收率高，可为华蟾素胶囊的质量控制提供参考。