三种动物体虱玻片标本制作及其种类鉴定

2022-09-27陈晓晓梁高星宋军科

家畜生态学报 2022年8期

宋静，陈晓晓，梁高星，宋军科*

(1.陕西省榆林市吴堡县动物疫病预防控制中心，陕西吴堡 718200；2.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100)

虱是哺乳动物及鸟类动物体表的永久性寄生虫，常具有严格的宿主特异性，宿主被感染后可造成慢性皮炎，出现持续性地瘙痒、摩擦和啃咬皮毛等临床特征，甚至导致寄生部位的皮肤破损，从而产生继发性感染。此外，虱还可以传播某些疾病，例如人虱能传播多斑疹伤寒、鼠虱传播地方性斑疹伤寒、还有一些虱类可传播非洲及欧洲回归热等。因此，在临床中对由虱类寄生引起的虱病进行准确诊断及防治，显得尤为重要。目前一般是以其形态学特征为依据对虱类进行种属鉴定，这就需要检测人员对虱类寄生虫的形态结构有清楚的认识。

玻片标本是寄生虫教学和研究中不可或缺的重要材料，虱类玻片标本按照保存时间长短分为临时玻片标本和永久性玻片标本。永久性玻片一般以加拿大或者中性树胶封固，由于可以长久保存，常用于存档分类或者教学，制作步骤一般要经过软化、脱水、封片和干燥等过程，由于步骤繁杂，所用试剂多，常常让基层科研工作者望而却步。

本研究通过对寄生于山羊、羚牛和猪等3种动物体表的虱类进行玻片标本制作，以期探索更加简便、高效、优质的标本制作方法，为教学和科研提供一些基础资料。同时，对寄生于山羊、羚牛和猪体表的虱类进行形态学种类鉴定，也可以为虱病的临床诊断及流行病学的调查提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 寄生虫样品

本研究所用的山羊、羚牛和猪体虱各20只均由西北农林科技大学寄生虫实验室采集并提供。

1.2 虱的采集与固定

用镊子或者细刷子等从动物的体表直接采集并分离虱子，将采集到的虱子盛放在安瓿瓶内保存。一般在采集到虫体后，将虫体放于阴凉干燥的地方2～3 d后，使用固定液(一般为10%甲醛溶液或者75%酒精)对虫体进行固定。

1.3 玻片标本的制作

(1)将固定液中的虫体放入5%氢氧化钠或氢氧化钾中水浴5～10 min(可加入少量甘油使煮后的虫体更加柔软)，水浴至虫体稍微半透明即可。(2)将标本从碱液中取出后置于蒸馏水中，浸泡5～24 h，使其体内容物自然排出。可使用微针轻轻按摩虫体，加快虫体内容物排出。(3)将经过洗涤的虫体放入蒸发皿中，然后加入染色液，经过15～20 min后，先用清水冲洗掉虫体表面和蒸发皿中的染液，再用75%的酒精对虫体脱色30 min。(4)将处理的虫体在浓度为30%、50%、70%、80%、85%、90%、95%和100%的酒精依次浸泡5～10 min，然后在100%酒精中加入二甲苯(1∶1)，并浸泡2 h，最后移入纯二甲苯中浸泡1 h。(5)先在盖玻片上滴加一滴中性树胶，然后用挑虫针将虫体标本挑到液滴上并小心移至载片中心，腹面向上，将载玻片靠近，尽量放低，接触盖玻片上的标本后迅速翻转过来。(6)玻片制好后放在阴凉通风干燥的地方干燥，注意干燥时不要叠放，避免玻片标本相互溢出粘连。有条件的也可以将玻片放入45～50 ℃烘箱中烘干。

1.4 形态学鉴定

将干固的玻片标本放在显微镜下观察，进行形态鉴定：触角的节数、形状以及是否隐藏或者外露；上颚水平或者垂直；爪的数目；前胸与后胸的形状；中、后胸有无缝线分隔；头部的形状；腹部气门的位置；下颚须的节数等。随机挑选出3种动物不同种虱各20只，测量虫体长、虫体宽、头长、头宽、前胸长、前胸宽、后胸长、后胸宽、腹长和触角长等并记录结果。

2 结果

2.1 山羊虱形态学鉴定结果

山羊虱形态学观察结果显示，虫体分头、胸、腹3部分，头部窄长，可见触角1对，触角由5节组成。头部触角前的距离和触角间的距离大约相等。胸部近似矩形，前、中、后3对足分别位于前胸、中胸和后胸。第1对足比后2对足较小，其爪细而锐利；第2、3对足的爪则较粗大。足基部和胸部密切相联，胫节发达，末端生有刚毛。腹呈椭圆形，上有许多刚毛。中央部较密集而短，两侧部较长而疏，每节呈不规则的双行排列，腹表面有鳞状的纹理构造，生殖器官位于体尾端(图1)。通过对比发现与颚虱科(Linognathidae)颚虱属()非洲颚虱()描述的一致，初步鉴定为非洲颚虱()。

图1 非洲颚虱(L. africanus)的形态学特征(400×)

2.2 羚牛虱的形态学鉴定结果

羚牛虱形态学观察结果显示，标本中的虫体头、胸、腹3部分，头部较大呈扁圆形，前段钝圆，比胸部略宽，可见触角1对，触角较短，由3节组成。无触须。触角后无三角形突起。咀嚼式口器。胸部有前、中、后3对足，分别位于前胸、中胸和后胸。腹部由7节组成，生殖器官位于体尾端(图2)。通过对比发现与于三科等描述的毛虱科(Trichoddectidae)毛虱属()羚牛毛虱()形态一致，初步鉴定为羚牛毛虱()。

图2 羚牛毛虱(D. budorcas)的形态学特征(100×)

2.3 猪虱形态学鉴定结果

猪虱玻片标本形态学观察结果显示，标本中的虫体分头、胸、腹3部分，头部可见触角1对，触角由5节组成。刺吸式口器。胸部有前、中、后3对足，分别位于前胸、中胸和后胸。胸板近梯形，前缘略内凹，无明显中央突，前侧角钝，后侧角较尖细，后缘外凸。腹部由8节组成，生殖器官位于体尾端(图3)。

图3 猪血虱(H. suis)的形态学特征(40×)

通过对比发现与血虱科(Haematopinidae)血虱属()猪血虱()描述的一致，初步鉴定为猪血虱()。

2.4 3种动物体虱主要部位的长度

3种动物体虱标本主要部位长度测量结果见表1。结果显示：山羊虱与颚虱科(Linognathidae)颚虱属()非洲颚虱()描述的一致；羚牛虱与于三科等描述的毛虱科(Trichoddectidae)毛虱属()羚牛毛虱()形态一致；猪虱与血虱科(Haematopinidae)血虱属()猪血虱()描述的一致。

表1 3种寄生虱主要部位长度测量结果

3 讨论

虱主要以宿主血液和毛发为食，其种类繁多，传染性极强，而且常携带和传播各种疾病，给人和各种动物健康造成危害。因此，在临床中对由虱类寄生引起的虱病进行准确的诊断及防治显得尤为重要。形态学鉴定是虱类鉴定的重要方法，它是以虱类的形态学特征为依据，一个不完整的标本不仅给虫种的鉴定带来一定的困难，甚至失去原有的鉴定价值，所以在进行玻片标本制作时要尽量使虫体结构完整、清晰。

本研究通过形态学方法对采集到的山羊、羚牛和猪3种动物体表寄生的虱进行玻片标本制作和种类鉴定，结果表明本研究中寄生于山羊体表的为非洲颚虱()，寄生于羚牛体表的为羚牛毛虱()，寄生于猪体表的为猪血虱()。此外，研究进一步通过显微镜观察对虫体、胸、腹及触角等主要部位进行长度测量和比较分析，发现3种寄生于不同动物体表的虱具有明显的形态学差异，比如，猪血虱与非洲颚虱和羚牛毛虱相比体态更大，猪血虱的头部的长宽比为2.40(1.25/0.52)，与非洲颚虱的1.38(0.47/0.34)和羚牛毛虱的1.02(0.61/0.60)头部的长宽比相比，猪血虱不仅拥有更大的头部，而且与非洲颚虱和羚牛毛虱相比更加狭长。细微的形态结构对比基于理想的玻片染色标本，这就要求在标本制作的过程中尽量避免对样品的损害。基于此，本研究在寄生虱永久性玻片标本制作的过程中注意了很多细节，比如，在软化虱子时水浴温度不易太高(70 ℃～85 ℃)，且软化时间也不宜过长，否则虫体部分结构就会变得模糊，不利于标本的观察；在脱水时可以用吸管将蒸发皿内的酒精吸走，然后再加入新的酒精，这样避免了标本的多次移动，利于保持标本结构的完整性。有研究表明，在封片之前增加一个预封步骤，可使标本在盖片时不易移动位置，使标本的特征清晰可见。用于制作的玻片也可能影响玻片标本的质量，因此要在使用前要进行清洗，先用洗衣粉水清洗，然后用盐酸浸泡，再用5%酒精擦拭，然后用蒸馏水冲洗。这样可以清除玻片表面的杂质，使做出来的片子干净，易于观察。