任鹏飞，刘 晨，冉 翔，王恒毅

作者单位：1安徽医科大学第一附属医院普外科，合肥 2300322安徽医科大学附属阜阳医院急诊科，阜阳 2360003安徽医科大学药学院，合肥 230032

肝癌是恶性程度最大的肿瘤之一。化疗耐药是肝癌患者预后差的重要原因[1]。铂类药物是肝癌治疗的一线药物，但长期使用往往会出现耐药性[2]。DNA损伤修复是导致肝癌耐药最主要的机制[3-4]。研究[5-6]表明，DNA修复酶多聚 (ADP-核糖) 聚合酶-1[poly (ADP-ribose) polymerase-1, PARP-1]在耐药肝癌细胞中高度表达, 在临床上显著降低铂类药物对肝癌的治疗作用。吐根碱是一种异喹啉生物碱，近年来研究[7-8]发现吐根碱联合化疗药物能够增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，但是机制尚不明确。因此，该研究构建了顺铂(cisplatin, DDP)耐药肝癌细胞株HepG2/DDP，评价吐根碱是否通过结合PARP-1而发挥增敏顺铂的抗肿瘤作用，希望为临床逆转肝癌耐药的研究提供一定的思路。

1 材料与方法

1.1 实验材料吐根碱(货号：E275439)、瑞卡帕布(货号：R288628)、DDP(货号：C295225)、3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物(MTT，货号：T100896)购自上海阿拉丁试剂有限公司；PARP-1购自美国Sigma-Aldrich 公司。抗PAR抗体、抗γH2AX抗体、抗PARP-1抗体、抗β-actin抗体、抗BAX抗体、抗Bcl2抗体、抗Caspase-3抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；PARP-1 siRNA、NC siRNA购自广州市锐博生物科技有限公司；Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；HepG2细胞来源于安徽医科大学药学院细胞存储中心。

1.2 反向虚拟筛选与分子对接采用Discovery studio 2017软件进行反向筛选和分子对接。用Chemdraw 2010绘制吐根碱结构，Discovery studio 2017优化加氢，Libdock程序与Discovery studio 2017软件蛋白数据库组件对接，选取排名前十的蛋白进行分析，选择目标蛋白，再次利用Libdock程序与目标蛋白进行对接，获得三维(合)二维结合模式图，分析小分子与配体间的键合作用。……