吴 婕 戴玉柱 张英杰 成 军 （蚌埠医学院检验医学院，蚌埠 233000）

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是引起丙型肝炎的病原体，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）［1］。HCV 的核衣壳蛋白（Core）、包膜蛋白（E1、E2）及跨膜蛋白（P7）是构成HCV 外壳蛋白骨架的主要部分，其中P7 是由HCV 基因组2 580~2 768 核苷酸编码63 个氨基酸残基组成的小疏水性蛋白，其编码基因位于结构蛋白和非结构蛋白之间，在细胞体内表达后整合于内质网膜，形成六聚体的阳离子通道，以利于成熟的病毒颗粒释放，对HCV 病毒颗粒释放有一定促进作用，与HCV 病毒颗粒合成、HCV 感染的机制密切相关［2］。为了解 P7 蛋白在 HCV 感染者体内的免疫应答情况及应答产物抗P7（anti-P7）抗体及循环免疫复合物（P7-IC）与HCV 不同基因型、不同临床分期、抗病毒治疗前后的相关性，本文重组表达P7蛋白和建立检测HCV 感染者血清中抗P7 抗体的方法，并进行应用评价。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 重组表达P7 蛋白的相关材料 含HCV1b基因型P7 核酸序列（Accession No：AJ238800）的质粒PUC-P7（杭州擎科生物技术有限公司合成）；大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3，本实验室保存）；限制性内切酶Bam HⅠ、HindⅢ（美国NEB 公司）；KODPLUS 系列高保真性聚合酶（日本ToYoBo 生物公司）；T4 DNA连接酶（上海生工生物工程股份有限公司）；谷胱甘肽S 转移酶（glutathione S-transferases，GST 蛋白，100 µg，北京义翘神州科技股份有限公司）；D2000 DNA Marker（100~2 000 bp）、D5000 DNA Marker（100~5 000 bp，莫纳生物科技有限公司）；蛋白Marker（14.4~116.0 kD，美国Thermo Scientific公司）；Ni-NTA-agarose亲和层析柱（德国QIAGEN公司）。

1.1.2 检测血清中抗P7抗体的相关材料 微孔板Nunc（美国Thermo Fisher 公司）；包被液（pH=7.4 的0.02 mol/L 磷酸缓冲液）、封闭液（含5%牛血清白蛋白、1%蔗糖、4%明胶、0.2%Proclin 300 防腐剂、pH=7.4 的0.01 mol/L 磷酸……