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紫檀芪对人结直肠癌细胞生物行为的影响及作用机制研究①

2022-08-30吴雪峰贵州中医药大学第一附属医院肛肠科贵阳550001

中国免疫学杂志 2022年13期
关键词:水平检测

李 志 冷 羽 蔡 涛 吴雪峰 (贵州中医药大学第一附属医院肛肠科,贵阳 550001)

结直肠癌是威胁我国人口生命安全的恶性肿瘤之一,其早期临床症状较为隐匿导致大部分患者失去最佳治疗时机[1]。不能接受根治性手术的患者需要接受药物治疗,中草药具有毒副作用小、效果好等优势,并可抑制结直肠癌细胞的增殖及转移,促进细胞凋亡[2-3]。紫檀芪为芪类化合物,且属于白藜芦醇天然二甲基化类似物,广泛存在于蓝莓、葡萄中,具有抗癌、抗氧化作用[4]。LncRNA ELFN1-AS1 在结直肠癌细胞中表达水平升高,其可通过调节miR-4644/TRIM44促进结直肠癌细胞的增殖和迁移[5]。生物信 息学分 析 显示 ELFN1-AS1 与 miR-1205存在结合位点,miR-1205在结直肠癌细胞中表达水平降低,研究表明,LncRNA ZEB2-AS1 通过miR-1205/CRKL 途径促进结直肠癌细胞转移[6]。但ELFN1-AS1/miR-1205 是否参与紫檀芪调控结直肠癌细胞生物学行为过程尚未可知。因此,本研究主要探讨紫檀芪是否可以通过调控ELFN1-AS1/miR-1205影响结直肠癌细胞的生物学行为。

1 材料与方法

1.1 材料 紫檀芪(537-42-8)购自美国Selleck;人结直肠癌细胞Caco-2 购自中国典型培养物保藏中心;DMEM 培养基(PM150310B)购自美国Hyclone;胎牛血清(10099141C)购自美国Gibco;CCK-8 试剂(20181203)购 自 上 海 碧 云 天 ;Transwell 小 室(p002439)购自美国Corning;基质胶(356234)、凋亡检 测 试 剂 盒(556507)购 自 美 国 BD;Lipo‑fectamine2000(11668019)购自美国Invitrogen;si-NC、si-ELFN1-AS1、miR-NC、miR-1205 mimics 购自广州锐博生物;pcDNA、pcDNA-ELFN1-AS1 购自上海吉玛;Trizol(20190203)购自北京全式金生物;反转录试剂(20190216)、SYBR Green 试剂(20190106)购自北京天根生化;E-cadherin、N-cadherin、GAPDH 一抗购自美国CST;羊抗兔二抗购自美国Abcam。

1.2 方法

1.2.1 实验分组 Caco-2 细胞分别接种于含不同浓度(20、40、80 µmol/L)紫檀芪的培养基内培养24 h,分别记为紫檀芪20µmol/L组、紫檀芪40µmol/L组、紫檀芪 80 µmol/L 组[7]。同时将正常培养的 Caco-2细胞作为对照组。……

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