马 鹏 王建村 黄 杰 薛 强

胶质瘤是最常见的颅内原发性恶性肿瘤，其发病机制尚不清楚，即使采用手术联合术后放化疗等综合治疗，预后较差。跨膜蛋白（transmembrane protein，TMEM）家族参与多种病理生理过程，包括细胞信号转导、细胞趋化、粘附、凋亡和自噬。Xu等[发现，TMEM168在胶质母细胞瘤细胞中高表达，通过Wnt/β-Catenin 信号通路促进细胞增殖和侵袭。本文探讨胶质瘤组织TMEM168 表达水平及其与病人预后的关系。

1 资料与方法

1.1 病例选择标准 纳入标准：年龄≥18岁；临床资料完整；术后病理证实为脑胶质瘤；术前未接受放、化疗。排除标准：合并其他部位肿瘤；合并急慢性感染；合并严重心肝肾等脏器疾病；合并内分泌疾病。

1.2 标本来源 选取2014 年6 月至2016 年9 月手术切除的符合标准的脑胶质瘤140例，其中男88例，女52例；年龄23～78岁，平均（53.01±8.23）岁；高级别胶质瘤76例（WHO分级Ⅲ级26例，Ⅳ级50例），低级别胶质瘤64 例（WHO 分级Ⅰ级12 例，Ⅱ级52 例）。选取颅脑损伤内减压术中切取的非肿瘤脑组织50 例为对照，其中男29 例，女21 例；年龄29～65 岁，平均（54.13±5.54）岁。

1.3 免疫组化染色检测TMEM168 的表达 组织标本石蜡包埋，制备切片（4 μm）。根据免疫组化染色试剂盒（泉州市睿信生物科技有限公司）说明书进行操作。切片脱蜡、水化后，进行抗原修复。用封闭液封闭2 h，加入兔抗人TMEM168一抗（1:1 000，美国Sigma公司）温室孵育2 h，PBS洗涤2次，加入二抗室温孵育30 min。用DAB显色、苏木精复染，最后封片显微镜下观察，TMEM168 蛋白定位于细胞质内（图1）。每张切片随机选择5个高倍（×200）视野进行评分：染色评分由染色强度评分（无着色0分，浅棕色1分，中棕色2分，深棕色3分）和染色细胞百分比评分（无染色为0 分；＜25%为1 分；25%～75%为2 分；＞75%为3分）相乘得出，其中4～9分为高表达。

图1 免疫组化染色检测组织TMEM168表达（EnVision二步法，×200）

1.4 随访方法 术后进行电话和门诊随访。术后第一年每3 个月随访一次，随后每半年随访1 次，随访时进行MRI检查。随访截止2021年10月，记录总生存期（overall survival，OS）及无进展生存期（progressfree survival，PFS）。OS 指术后首日至末次随访或者死亡的时间；PFS 指术后首日至首次发生疾病进展或任何原因所致死亡的时间。

1.5 统计学方法 采用SPSS 20.0软件分析；计数资料采用

χ

检验；采用多因素Cox比例回归风险模型分析生存预后的影响因素；生存曲线分析TMEM168表达水平与病人生存预后的关系；

P

＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胶质瘤组织TMEM168 的表达情况 胶质瘤组织TMEM168 高表达率[70.71%（99/140）]明显高于对照组[22.00%（11/50）；

P

＜0.05]。高级别胶质瘤组织TMEM168 高表达率[81.58%（62/76）]明显高于低级别胶质瘤组织[57.81%（37/64）；

P

＜0.05]。

2.2 胶质瘤的预后 术后随访3～60个月，死亡46例，复发87例。

2.3 胶质瘤生存预后的影响因素 多因素Cox回归分析显示，年龄≥55岁、高级别胶质瘤、术前KPS评分＜80 分、TMEM168 高表达是胶质瘤病人OS 和PFS 不良的独立危险因素（

P

＜0.05；表1、2）。

表1 本文140例胶质瘤病人总生存期影响因素的Cox比例回归风险模型分析

危险因素年龄≥55岁男性术前KPS评分＜80分高级别胶质瘤肿瘤直径＞3 cm肿瘤未全切除术后未化疗TMEM168高表达单因素风险比1.300 1.417 2.981 4.116 1.231 1.047 1.013 3.442 95%置信区间1.098～3.276 0.901～1.514 1.673～3.990 2.003～7.651 0.547～1.672 0.774～1.130 0.783～1.316 1.605～7.742 P值0.008 0.552＜0.001＜0.001 0.513 0.624 0.101＜0.001多因素风险比1.261 95%置信区间1.115～4.008 P值0.013 2.683 3.170 1.515～3.654 2.000～6.333＜0.001＜0.001 2.251 1.412～4.971＜0.001

表2 本文140例胶质瘤无进展生存期影响因素的Cox比例回归风险模型分析

危险因素年龄≥55岁男性术前KPS评分＜80分高级别胶质瘤肿瘤直径＞3 cm肿瘤未全切除TMEM168高表达单因素风险比2.615 1.004 3.054 5.233 1.132 1.212 4.100 95%置信区间1.422-3.098 0.564-1.123 1.232-5.101 2.611-9.231 0.603-1.231 0.803-1.452 2.314-8.142 P值0.011 0.574 0.000 0.000 0.459 0.338 0.000多因素风险比1.800 95%置信区间1.096-2.938 P值0.035 2.131 3.163 1.462-4.000 1.202-7.451 0.000 0.000 3.100 1.323-5.282 0.000

2.4 胶质瘤TMEM168 表达水平与病人预后的关系生存曲线分析结果显示，TMEM168高表达胶质瘤病人中位OS、PFS 较低表达病人明显缩短（

P

＜0.05，图2）。

图2 生存曲线分析胶质瘤TMEM168表达水平与病人生存预后的关系

3 讨论

TMEM 家族参与细胞膜结构组成，参与细胞间和细胞内的信号转导，与免疫炎症损伤和线粒体功能障碍有关。TMEM家族与肿瘤的关系近年来引起重视，研究发现，TMEM 可通过影响细胞增殖、侵袭、凋亡，影响肿瘤的发生、发展，例如TMEM116通过PDK1 信号通路促进肺癌细胞的侵袭和转移，与肺癌不良生存预后有关。TMEM168 蛋白是由697 个氨基酸残基组成，在人类和啮齿类动物中均有表达。TMEM168高表达参与感觉门控缺陷、精神分裂症和成瘾性疾病等。TMEM168 基因突变也与家族性Brugada 综合征有关。有研究发现，TMEM168 在胶质母细胞瘤细胞中高表达，可通过Wnt/β-Catenin信号通路促进细胞增殖和侵袭。本文发现，TMEM168在胶质瘤组织中的高表达率明显高于非肿瘤脑组织，并且高级别胶质瘤组织明显高于低级别胶质瘤组织。这提示TMEM168 可能参与胶质瘤的发生、发展。然而，TMEM168 在胶质瘤中的具体作用机制，尚不明确，有待进一步研究。

胶质瘤病人预后的影响因素较多。本文发现年龄、高级别胶质瘤、术前KPS 评分是OS 及PFS 的独立影响因素。这与文献报道一致。Xu 等发现TMEM168 高表达的胶质母细胞瘤总体生存率明显降低。本文也发现，TMEM168高表达是胶质瘤病人OS 和PFS 不良的独立危险因素（

P

＜0.05）；生存曲线分析显示TMEM168高表达胶质瘤病人的中位OS及PFS较低表达病人明显缩短（

P

＜0.05）。

本文也存在一些局限性，例如未分析TMEM168在胶质瘤中的作用机制；未分析TMEM168与胶质瘤手术疗效及放化疗效果的关系。另外，未来需要开展细胞和动物学研究，分析TMEM168在胶质瘤病情进展中的作用及机制。

总之，胶质瘤组织TMEM168 呈高表达，与胶质瘤病人不良生存预后有关。