汪 安，朱志祥，程桂林，程 倩，苏 敏

(池州市质量监督检验研究院，安徽 池州 247000)

保济丸由钩藤、菊花、蒺藜、厚朴、木香、苍术、天花粉、广藿香、葛根、化橘红、白芷、薏苡仁、稻芽、薄荷、茯苓、广东神曲 16 味中药材配伍组合而成，具有解表、祛湿、和中的功效，主要用于暑湿感冒引起的发热头痛、腹痛腹泻、恶心恶吐、肠胃不适等[1-2]，也可以用于晕车晕船等。研究发现，保济丸具有抗菌、解热、止泻。镇痛等药理作用。《中国药典》2020年版一部收载的保济丸以厚朴酚、和厚朴酚作为其含量检测指标[3], 因此我们选定了保济丸中的厚朴酚、和厚朴酚作为指标性成分，参考《中国药典》及文献[4-8]，采用高效液相色谱法测定保济丸中厚朴酚、和厚朴酚的含量，以有效控制其内在质量，能够为保济丸质量控制提供方法，保障用药安全。

1 仪器和试药

1.1 仪 器

Waters E2695型高效液相色谱仪，美国 Waters；XP205电子天平，梅特勒-托利斯仪器上海有限公司；Elma PH180H超声波清洗器，德国Elma公司。

1.2 药品与试剂

厚朴酚(批号：110729-200412，纯度：100%)，中检院；和厚朴酚(批号：110730-201112，纯度：99.8%)，中检院；乙腈SIGMA 公司；冰醋酸(分析纯)，天津市科密欧化学试剂有限公司；甲醇试剂(分析纯)，国药集团化学试剂有限公司；超纯水；0.45 μm微孔滤膜，上海兴亚净化材料厂；保济丸厂家与批号信息见表1所示。

表1 保济丸厂家与批号信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱： SHIMADZU C18色谱柱(150 mm×4.6 mm， 5 μm)；流动相： 乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4); 流速： 1.0 mL/min; 柱温： 30 ℃; 检测波长： 294 nm; 进样量： 10 μL，以进行保济丸中厚朴酚、和厚朴酚含量的检测分析。

2.2 对照品溶液的制备

精确称量厚朴酚、和厚朴酚对照品13.70 mg、12.72 mg，放置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用 0. 45 μm 的微孔滤膜进行过滤，得到浓度为 0.1370 mg/mL 和0.1272 mg/mL的对照品溶液。在该色谱条件下，对照品峰型良好，见图1所示。

2.3 供试品溶液的制备

保济丸，称定重量，研细，精密称取1 g，放置于具塞锥形瓶中，用石油醚(30～60 ℃)作溶剂，超声处理2次(100 mL、 50 mL)，每次30 min。提取液滤过，滤液合并，挥干，残渣用甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。在该色谱条件下，样品分离度较好，见图1所示。

图1 厚朴酚(A)、和厚朴酚(B)和样品

2.4 线性关系试验

分别精密量取“2.2”项下厚朴酚、和厚朴酚对照品贮备液2、4、10、12、16、20 mL分别置于100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，配制成浓度依次递增的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪进行分析，测定对照品的峰面积，记录色谱图，以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标绘制线性方程，计算得线性方程：以峰面积(Y)对溶液浓度(X)进行线性回归分析。得厚朴酚、和厚朴酚回归方程分别为：y=19025x+488912(r=0.9993)、y=2254.1x-6418(r=0.9992)。结果表明厚朴酚、和厚朴酚在27.4～274μg·mL-1、25.44～254.4 μg·mL-1内线性关系良好。实验结果证明对照品峰面积与浓度有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取“2.2”项下制得的对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果厚朴酚、和厚朴酚的RSD分别为1.25%、1.36%，结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取“2.3”项下供试品溶液，分别于放置0、2、4、8、10、12、24 h后，注入高效液相色谱仪按“2.1”项下的色谱条件进行测定，记录峰面积。测定结果显示厚朴酚、和厚朴酚色谱峰平均峰面积分别为1912787.204和2044268.887，RSD分别为 1.24%、1.03%，表明供试品溶液在 24 h 内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同一批号药材，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，平行6份，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录峰面积并计算厚朴酚、和厚朴酚含量及平均值。结果厚朴酚、和厚朴酚的平均含量分别为0.7 mg/g、0.5 mg/g，RSD分别为0.3%、0.4%，结果表明本法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的供试品(厚朴酚含量：0.73 mg/g，和厚朴酚含量：0.56 mg/g)6份，样品按“2.3”项下操作制备供试品溶液，分别加入一定量的厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液，均匀混合，按“2.1”项下的色谱条件进样并测定含量，计算回收率，结果表明厚朴酚、和厚朴酚的平均回收率为97.5%、96.6%，RSD为0.53%和0.77%，如表2、表3所示。表明该方法加样回收率结果良好。

表2 厚朴酚加样回收率试验数据

表3 和厚朴酚加样回收率试验数据

2.9 样品含量测定

照“2.3”项制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液 10 μL，在“2.1”项下色谱条件下进样分析，测定峰面积，根据回归方程计算样品中厚朴酚、和厚朴酚含量，见表4。结果表明广州省罗浮山白鹤制药厂(2112005)生产的保济丸中厚朴酚含量较高而广州王老吉药业(2110012)生产的保济丸中和厚朴酚含量较高。

表4 样品含量测定结果(n=3)

3 讨 论

(1)检测波长得选择。参考《中国药典》2020版一部保济丸项下规定，检测波长294 nm，并根据文献选择了278 nm和 225 nm两种波长进行比较，利用二极管阵列检测器，预实验发现厚朴酚、和厚朴酚在294 nm处有最大吸收，在上述色谱条件下，在294 nm处所得的HPLC图谱峰型较好，有利于分析。故在后续实验中选择294 nm作为检测波长。

(2)流动相的选择。参考《中国药典》2020版一部保济丸项下选择乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作为流动相，并同时采用了了水-乙腈梯度洗脱以及甲醇-水(78∶22)两种方法的流动相，预实验结果显示乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作为流动相响应值良好，峰形佳，理论板数和分离度、基线等均符合要求，且效果优于水-乙腈梯度洗脱以及甲醇-水(78∶22)这两种流动相，故在实验中选择了乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作为流动相。

(3)提取方法的选择。在预实验中采取了加热回流提取和超声提取两种提取方法对保济丸进行提取，结果表明超声提取和加热回流提取两种方式效率相当，根据实验操作效率以及安全简便的原则，故在后续实验中选择了超声提取作为保济丸的提取方法。

4 结 论

通过上述实验方法，选定了市面上3个厂家5个批号的保济丸作为供试品，对其厚朴酚、和厚朴酚含量进行检测分析，结果显示选定的不同厂家及不同批号的保济丸中厚朴酚、和厚朴酚含量范围分别为0.3～1.7 mg、0.2～0.6 mg，含量差异较大，部分批号的保济丸中厚朴酚、和厚朴酚含量较低。造成保济丸含量差异较大的原因可能与各个厂家具有不同的生产工艺流程，且不同批号间的药材来源与质量等方面存在差异。由此可见，加强对市面上保济丸中厚朴酚、和厚朴酚的含量检测，有利于保障保济丸的产品质量控制，确保其发挥更好的药效作用。

保济丸的药品标准收载于中国药典2020版一部，但保济丸中所含药材成分较多，现行质量标准含量测定规定较少，缺乏专属性。目前，提高保济丸的质量标准，增加专属性成分的检测，是控制其质量的有效途径。另外，中成药质量的源头，原料药材质量的控制更需有关部门进行严格把关，生产企业用质量合格的原料药材，严格按标准投料和生产，更是保证药品质量的关键。本实验采用高效液相法，通过乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作为流动相，检测保济丸中厚朴酚、和厚朴酚的含量，该方法线性良好，精密度、准确度、稳定性及回收率均符合要求，可作为保济丸中质量控制指标之一。