王月玲，冯 蕙，赵新玉，周灿灿，李 运，邵长春

（1.兰州市食品药品检验检测研究院，甘肃 兰州 730050；2.山东国投鸿基检测技术股份有限公司，山东 济南 250000）

化妆品由于基质复杂、辅料繁多，又与人体皮肤直接接触，常引起过敏反应，其主要过敏原有防腐剂、芳香混合物、重金属、激素、中药提取物等[1-2]。为防止过敏反应发生，化妆品中有添加组胺类抗过敏药物的可能。然而，长期使用抗组胺类药物会引起多种不良反应，如嗜睡、变应性接触性皮炎、心脏毒性等，还会让皮肤对其产生依赖性，停止使用后过敏症状加重，可能引起毛细管扩张、色素沉着、内分泌紊乱等不良反应[3-5]。我国《化妆品安全技术规范》（2015年版）明确规定禁止添加地氯雷他定等15种抗组胺类药物[6]。目前，关于抗组胺类药物的检测方法主要有液相色谱法和液相色谱－质谱法[7-11]，其检测对象主要为药物、保健食品，而关于化妆品中抗组胺类药物的检测研究较少[12-14]。而热解吸-电喷雾-三重四极杆质谱（TD-ESI-MS/MS）是目前比较先进的质谱技术之一，与传统质谱方法相比，检测器相同，但是取样方法发生较大变化，传统方法需要称样、提取、净化、浓缩等前处理步骤，而该方法具有无需样品前处理，快速、简便、灵敏等优势,操作时只通过简单的金属探针接触固体表面或液体样品采集待测物，以高温加热的方式完成探针表面吸附物质的解吸过程，解吸后的气相物质分子经载气流轨道收束并吹送至电喷雾区域，完成离子化过程，最终进入三重四极杆质谱检测器分析，适用于不同形态样品的检测[15]。因此，本实验采用热解吸-电喷雾-原位质谱仪对化妆品中9种抗组胺类药物（盐酸曲吡那敏、马来酸氯苯那敏、盐酸苯海拉明、阿司咪唑、地氯雷他定、盐酸异丙嗪、盐酸赛庚啶、地氯雷他定、盐酸萘替芬）建立数据库，并对市售17批次祛痘类护肤品、30批次美白祛斑类护肤品中抗组胺类药物进行筛查，以期为化妆品中违禁使用的抗组胺药物的分析提供技术支持。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

三重四极杆Ultivo质谱仪（美国Agilent公司），热解吸－电喷雾离子源，取样环线直径0.6 mm，环径2 mm，长5～6 cm（山东国投鸿基检测技术股份有限公司）；电子天平XSE205DU（瑞士梅特勒公司）；移液枪（德国艾本德公司）；Milli-Q 超纯水仪（美国密理博公司）；超声波清洗仪（灵芝）；FaVEx-NM与FaVEx-HP固相萃取小柱（山东巨研科技股份有限公司）。

表1 对照品信息

样品：市场采购的美白祛斑与祛痘类化妆品共47批次，其中祛痘类产品17批次，美白祛斑类产品30批次。具体样品信息见表2、表3。

表2 祛痘类产品

表3 美白祛斑类产品

1.2 实验方法和结果

1.2.1 对照品溶液的制备

分别精密称取9种抗组胺类药物对照品各10 mg，置10 mL量瓶中，分别用50%甲醇溶解并定容，得到浓度分别为1 mg/mL的对照品储备液，储存于-18 ℃冰箱中。精密吸取各对照品储备液0.1 mL，分别置于10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为10 μg/mL的对照品溶液。

1.2.2 灵敏度溶液的制备

将各对照品溶液逐级稀释，直至仪器信噪比显示为3∶1，此时溶液浓度为仪器检出限，测得9种抗组胺类药物的仪器检出限均为10 ng/mL。

1.2.3 质控溶液的配制

精密吸取各对照品溶液适量，置同一容量瓶中，用乙腈稀释为浓度为100 ng/mL的混合对照品溶液，作为质控溶液。

2.3 通气指标 两组患者PETCO2各个时间点比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。组间比较，B组Ppeak于T2-T5时明显高于A组，且差异有统计学意义（P＜0.05）； 同时间点，B 组 Pplat于 T2、T5时明显高于 A 组（P＜0.05）。 见表 3。

1.3 仪器条件

1.3.1 热解吸电喷雾检测参数条件

温控仪温度280 ℃，注射泵溶剂为0.1%甲酸水溶液-甲醇（1∶1，v/v），流速为150 μL/h。

1.3.2 质谱条件

正离子模式，干燥气流速为3 L/min，干燥气温度为280 ℃，雾化器压力为34.5 kPa(5psi），毛细管电压为4 000 V。

1.3.3 抗组胺类药物质谱数据库建立

精密移取各对照品溶液3 μL至探针表面取样环，进行检测分析，找到各化合物特征碎片离子。盐酸西替利嗪在原位质谱仪上无响应，不适合用该仪器筛查，其他各物质谱数据库信息见表4。

表4 9种抗组胺类药物质谱数据库

1.4 样品分析

1.4.1 供试品溶液的配制

水剂化妆品：原液直接测试；

乳剂和霜剂化妆品：称取样品0.2 g，置具塞比色管中，加入甲醇10 mL，手动振荡30 s，使试样与溶剂充分混匀，超声提取3 min，摇匀，即得。

1.4.2 分析测试

量取供试品溶液3 μL，至探针表面取样环上，按照1.3 项下的仪器方法，测试17批次祛痘类护肤品、30批次美白祛斑类护肤品，每个样品平行测定3次，若样品与对照品溶液具有相同的分子离子峰和碎片离子峰，而且所选择的碎片离子丰度比与对照品溶液的离子丰度比相一致或在一定偏差范围内，则可判断样品中存在这种化合物。

2 方法学验证

2.1 专属性试验

取化妆品空白基质（水、乳、霜各一批），按1.4.1项下的方法制备，然后按1.3项下仪器条件上机测试，结果显示空白基质均未检出与对照品溶液具有相同的分子离子峰和碎片离子峰，表明空白基质对实验结果无干扰，本方法专属性良好。

2.2 检出限

由于质谱的基线噪声非常低，以信噪比计算出的检出限可能与方法的实际检测值存在差别，采用标准溶液混合基质逐级稀释方法至仪器能检出的最低含量作为各化合物的检出限应该更合理。因此，精密吸取混合对照品溶液适量，分别加入化妆品空白基质中（水、乳、霜各一批），按1.4.1项下方法制备，并逐级稀释至仪器信号恰好能检出即得方法检出限。结果显示，化妆品3种基质中9种抗组胺类药物的检出限中，同一介质中9种抗组胺类药物检出限基本相同，水剂为15 ng/mL，乳剂和霜剂检出限是水剂的2倍为30 ng/mL，其原因可能是因为乳剂和霜剂基质中含有较多油脂，复杂的成分会影响待测物的检测灵敏度。

2.3 重复性

称取0.2 g化妆品基质（水、乳、霜各一批），精密加入质控溶液2 mL，配制成含9种抗组胺类药物的加标样品，分别按1.4 项下的方法制备并上机测试，每个样测定6次，结果表明各化合物响应值的RSD值为6.6～12.9，表明方法重复性良好。

2.4 稳定性

将上述重复性实验的加标样品溶液分别在1 h、4 h、12 h、24 h、48 h重新测定，每个时间点重复测定3次，结果显示，9种抗组胺类药物在1～48 h均可检出，响应值稳定，说明本方法能够满足实验要求。

3 结果与结论

本研究建立了热解吸－电喷雾－原位质谱仪同时筛查化妆品中9种抗组胺类药物的方法与数据库，该方法适用于水、乳和霜类等多种基质样品分析，可以实现不需要对照品对化妆品中9种抗组胺类药物的快速筛查，并应用该法对市售17批次祛痘类护肤品、30批次美白祛斑类护肤品进行检测，结果显示1批次祛痘类护肤品检出氯雷他定。

4 讨论

4.1 样品前处理方式考察

实验考察比较了3种前处理方法，第一种方法无需前处理，通过金属探针直接接触进样；第二种参照文献《超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中21种抗组胺类药物》的前处理方法，并在后期实验中适当地进行了调整：称样0.2 g，加甲醇10 mL，涡旋震荡30 s，超声3 min，过滤，取续滤液测试；第三种方法为山东巨研科技股份有限公司根据前期研究基础推荐的方法：称样0.2 g，加入10 mL0.5%甲酸乙腈振摇、离心后，取上清液分别过FaVEx-NM、FaVEx-HP固相萃取小柱净化，流出液上机测试。结果显示，第一种方法简便易行，可作为水剂化妆品筛查前处理方法，乳剂和霜剂因基质复杂，基质效应较大，干扰测定；第三种方法中FaVEx-HP固相萃取小柱响应较FaVEx-NM柱强，总体呈现基质效应减小，但比较费时费力，成本也高，不适合快速筛查；第二种方法前处理相对简单省事可作为乳剂和霜剂化妆品筛查的前处理方法。

4.2 与其他检测方法比较

参照《化妆品安全技术规范》（2015年版）中的方法，采用高效液相色谱－三重四极杆液质联用仪对筛查出氯雷他定的阳性样品进行进一步的验证，结果显示，热解吸－电喷雾－原位质谱仪与三重四极杆液质联用仪检测结果一致，表明该方法操作简单、定性准确，可用于美白祛斑类和祛痘类化妆品中非法添加抗组胺类药物的多组分快速筛查。