miR-221-3p 靶向FGF14 调控肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的分子机制①
2022-07-21李淑勤赵树强郑丽琴山西医科大学汾阳学院临床医学系内科教研室吕梁032200
李淑勤 赵树强 郑丽琴 (山西医科大学汾阳学院临床医学系内科教研室,吕梁 032200)
肺腺癌患者中常见病理类型为转移性肺癌,但转移的分子机制仍未完全阐明,微小RNA(miRNA)调节基因表达可参与癌症的发展过程,miR-576-3p通过靶向SGK1 可抑制肺腺癌细胞迁移和侵袭[1]。miR-21-5p 通过靶向SET/TAF-1α 促进肺腺癌的进展[2]。miR-145 通过靶向N-cadherin 而抑制肺腺癌细胞的侵袭和迁移[3]。miR-138-5p 通过靶向E 盒结合锌指蛋白2(E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2)抑制肺腺癌细胞上皮-间质转化、增殖和转移[4]。表明miRNA 可介导肺腺癌发生及转移过程。miR-221-3p 在非小细胞肺癌细胞中表达水平升高,并可通过靶向p27 促进非小细胞肺癌细胞生长[5]。靶基因预测显示成纤维细胞生长因子14(fibroblast growth factor-14,FGF14)与miR-221-3p 存在结合位点,FGF14 在肺腺癌中低表达并发挥抑癌作用[6]。但miR-221-3p 是否可通过调控FGF14 的表达从而参与肺腺癌发生及发展过程尚未可知。因此,本研究主要探讨miR-221-3p 对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,探究其对FGF14的调控作用。
1 材料与方法
1.1 材料 人支气管上皮细胞BEAS-2B 与人肺腺癌细胞A549、A-427、PC-9 购自美国ATCC 细胞库;DMEM 培养基购自美国Gibco 公司;胎牛血清、Lipo‐fectamine2000、Trizol 试剂、反转录合成及qRT-PCR试剂盒购自美国Thermo Fisher 公司;miR-inhibitor-NC、miR-221-3p inhibitor、si-NC、si-FGF14 购自广州锐博生物科技有限公司;MTT 试剂购自美国Sigma公司;凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司;Transwell小室购自美国Corning公司;Matrigel基质胶购自美国BD 公司;兔抗人FGF14 抗体购自北京义翘神州科技股份有限公司;兔抗人CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2、P21、Bax 抗体购自美国Santa Cruz 公司;HRP 标记的山羊抗兔二抗购自美国Abcam公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞转染及分组 BEAS-2B、A549、A-427、PC-9 细胞常规培养,待细胞生长融合度达到80%时进行细胞传代培养。……
