黄平 钟细妹 陈光元 张梅芳 刘文毅 刘霄

卵巢癌会威胁到女性身体健康,从而形成恶性肿瘤,于妇科恶性肿瘤中占据第二,死亡率第一。此病发病隐匿,早期不会有显著症状且容易转移,患者预后不良。当前,卵巢癌病因不够清楚,所以,卵巢癌的形成原因、恶性进展分子机制为临床的重要热度课题［1］。lncRNA 转录长度高于200 nt,编码蛋白质功能不会有DNA 分子,是以RNA 形式存在遗传、转录层面的调控基因表达,继而加入机体诸多生理与病理环节。近几年研究发现：lncRNA 在肿瘤发生与发展中发挥作用显著,容易发展为部分恶性肿瘤比较特异的标志物,治疗需用靶向疗法［2］。NEAT1 为大小约3.2 kB 的lncRNA,所处位置为细胞核亚结构关键的lncRNA。研究发现：lncRNA NEAT1 可参与多种肿瘤的发生、发展过程［3］。CtBP2 为进化上高度保守的辅助转录抑制因子,能通过下调特定的肿瘤抑制因子,参与多种恶性肿瘤的发生、发展［3］。但当前lncRNA NEAT1、CtBP2 在卵巢癌形成和恶性进展中发挥的作用尚未有明确定论。本研究主要对卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 表达与患者临床病理特征进行剖析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年12 月～2020 年12 月本院收治的卵巢癌患者68 例,患者均经术后组织病理检查确诊,年龄20～68 岁,平均年龄(54.31±7.17)岁。另选取本院同期收治的卵巢良性囊肿患者20 例,年龄21～69 岁,平均年龄(55.20±6.66)岁。两组患者年龄比较差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 手术切除,剥离卵巢癌组织、卵巢囊肿组织,液氮下碾为粉末,用TRIzol 法提取组织总RNA,使用紫外分光光度计鉴定,OD260/OD280为1.8～2.0,可用于后续实验。依据Revert AidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit 描述,将提取的总RNA 逆转录为cDNA,以cDNA 为模型,按SYBR Green 荧光定量PCR 试剂盒说明进行PCR 扩增。全部引物均由沈阳万类生物科技有限公司设计合成,引物序列：lncRNA NEAT1上游引物5'-GGGATGAT-GCAAACAATTAC-3',下游引 物5'-TACCATACA-GAGCAACATAC-3'；CtBP2 上游引物5'-ATCCAC-GAGAAGGTTCTAAACG-3',下游引 物5'-CCG-CACGATCACTCTCAGG-3'；GAPDH 上游引物5'-CACCCACTCCTCCACCTTTG-3',下游引物5'-CCAC-CACCCTGTTGCTGTAG-3'。PCR 反应体系共25 μl：2×SYBR Green qPCR Mix 12.5 μl,上下游引物各0.5 μl,模板cDNA 2 μl,去离子水9.5 μl；反应条件：95℃ 15 min、95℃ 15 s、60℃ 40 s 共40 个循环。以GAPDH 为内参,采用2-△△CT法计算目的基因相对表达量。实验重复3 次,取平均值。术后,电话或门诊定期随访9～60 个月,平均随访33 个月。

1.3 观察指标 比较卵巢癌组织与卵巢囊肿组织中lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量,分析卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量与患者临床病理特征的关系。临床病理特征包括肿瘤FIGO 分期(1 期、2 期、3～4 期)、淋巴结转移(有、无)、年龄(≤55 岁、＞55 岁)、肿瘤直径(≤3 cm、＞3 cm)、病理类型(浆液性、黏液性、其他)。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0 统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示,采用t检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢癌组织与卵巢囊肿组织中lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量比较 卵巢癌组织中lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量均明显高于卵巢囊肿组织,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 卵巢癌组织与卵巢囊肿组织中lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量比较()

表1 卵巢癌组织与卵巢囊肿组织中lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量比较()

注：与卵巢囊肿组织比较,aP＜0.05

2.2 卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量与患者临床病理特征的关系 卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量与患者肿瘤FIGO 分期、淋巴结转移情况有关,差异具有统计学意义(P＜0.05)；卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量与患者年龄、肿瘤直径、病理类型无关,差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量与患者临床病理特征的关系()

表2 卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量与患者临床病理特征的关系()

注：不同肿瘤FIGO 分期及淋巴结转移情况比较,P＜0.05

3 讨论

目前,我国卵巢癌发病率相对较低,但是死亡率一直居高不下,近几年其5 年生存率仅30%左右,严重危害女性的生命健康［4-6］。随着我国逐渐脱贫致富踏上小康道路,我国人民生活质量与生活水平都得到显著升高,同时卵巢癌的发病率呈现出上升趋势,且呈现年轻化趋势。由于医学界对卵巢癌的发病病因尚未得出确切结论,因此,探索研究卵巢癌的病因与医治方式成为当前医学界临床研究的重大热点之一［7,8］。

lncRNA 是一类非编码的RNA,其广泛存在于真核生物体内,其序列长、结构复杂。研究发现：lncRNA NEAT1 能够促进卵巢癌OVCAR-3 细胞的增殖和侵袭,而敲除lncRNA NEAT1 的卵巢癌OVCAR-3 细胞增殖和侵袭明显受到抑制［9,10］。

CtBP 家族因能够和不同的氨基酸序列结合,进化上高度保守,是一类辅助转录抑制因子,家族有多个亚型,最为重要的当属CtBP2,基因定位在染色体21q21.3。CtBP2 的中心结构域可与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸结合,碳基末端能够对基因进行翻译后修饰,氨基末端则可特异性识别并结合特定转录抑制因子,三个结构域协同发挥辅助转录抑制因子功能［11］。CtBP是一类辅助转录抑制因子,可参与多种卵巢癌的发生、发展。研究表明：CtBP2 高表达可引起患者预后不良,因此,CtBP2 有可能成为测定卵巢癌患者预后的指标之一［12］。本研究中,卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量与患者肿瘤FIGO 分期、淋巴结转移情况有关,差异具有统计学意义(P＜0.05)；卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 相对表达量与患者年龄、肿瘤直径、病理类型无关,差异无统计学意义(P＞0.05)。表明lncRNA NEAT1、CtBP2 在卵巢癌组织中呈高表达,参与了卵巢癌的发生和转移全程。

综上所述,卵巢癌组织lncRNA NEAT1、CtBP2 表达水平均高,两者表达变化可能协同促使肿瘤恶性进展,致使患者预后不良。lncRNA NEAT1、CtBP2 有可能成为卵巢癌早期诊断和预后监测的生物标志物。