杨夏，王秀丽，李伟

（安钢总医院 检验科，河南 安阳 455000）

溃疡性结肠炎（UC）为临床常见的消化系统慢性疾病，临床症状多表现为腹泻、腹部胀痛、食欲衰退、便血等，且近年来其发病率逐渐上升，对患者身体健康、生活质量造成严重影响［1］。辅助性T 细胞17（Th17）、调节性T 细胞（Treg）为近年来新发现的T 淋巴细胞亚群，可参与机体多种免疫调节，当机体受炎性因子刺激后可释放多种血管细胞因子及活性物质，加重炎症反应［2］。相关研究结果表明［3-4］，Th17/Treg 免疫平衡与UC病情程度及进展具有紧密联系，其水平失衡可促进机体炎性因子释放，加重UC 病情发展。因此，临床应尽早改善患者免疫调节功能，防止病情进展［4］。本研究选取86 例于安钢总医院就诊的UC患者，旨在探讨肠道菌群数目与Th17/Treg 免疫平衡的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取86 例安钢总医院2018 年8 月至2020 年8 月就诊的UC 患者，根据病情程度不同分为两组（缓解期41 例、活动期45 例）。缓解期男24 例，女17 例；年龄38～54 岁，平均（45.82±2.43）岁；体 质 量 指 数21.9～29.4 kg/m2，平 均（25.28±1.47）kg/m2。活动期男26 例，女19 例；年龄37～56 岁，平均（45.73±2.38）岁；体质量指数21.6～29.2 kg/m2，平均（25.35±1.42）kg/m2；两组基线资料（性别、年龄、体质量指数）比较差异有统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经院伦理委员会审核批准。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：均符合UC 诊断标准［5］；对本研究知情并签署同意书。排除标准：合并其他消化系统疾病；有严重精神障碍无法配合者；合并肾、肝及造血系统严重疾病；合并其他恶性肿瘤疾病者。

1.3 方法

1.3.1 肠道菌群数量检测 采集所有患者新鲜粪便1 g，采用北京天根生化50T 型DNA 提取试剂盒对粪便中总DNA 进行提取，采用软件设计乳酸杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、拟杆菌、场球菌DNA引物，采用聚合酶链反应试剂盒对其进行扩增，根据循环数计算细菌数目，以lgN/g 表示。

1.3.2 Th17、Treg 细胞百分比检测 采集所有患者空腹状态下外周静脉血液5 mL，采用密度梯度离心法采集单个核细胞，试管中分别加入CD3-Cy5、白细胞介素（IL）-17、CD8a，避光条件下静置30 min 后，加入100 μL 固定剂，再次静置30 min后，加入100 μL 破膜剂，采用磷酸盐缓冲液冲洗后，经离心半径12 cm，800 r/min 离心6 min，室温下静置20 min 后加入500 μL 磷酸盐缓冲液重悬，采用贝克曼DX 流式细胞仪对Th17 细胞占比进行检测。再次抽取所有患者空腹状态下外周静脉血液5 mL，分别加入10 μL CD25-Cy5、CD127-Cy5及CD4-异硫氰酸荧光素，室温下静置15 min 后，加入1 mL 溶血素，经离心半径8 cm，1 500 r/min离心10 min 后，加入500 μL 磷酸盐缓冲液重悬，采用贝克曼DX 流式细胞仪对Treg 细胞百分比进行检测。

1.4 观察指标

①统计比较两组肠道菌群数目，包括乳酸杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、拟杆菌、肠球菌。②统计比较两组Th17、Treg 细胞百分比及Th17/Treg比值。③分析肠道菌群数目与Th17、Treg 细胞百分比相关性。④比较预后不同Th17/Treg 患者肠道菌群数目。⑤分析Th17/Treg 免疫平衡的相关因素。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件分析处理数据。计量资料以均数±标准差（）表示，用t检验；通过Logistic 进行多因素回归分析，采用Pearson 进行线性相关性分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者肠道菌群数目比较

与活动期患者相比，缓解期患者的乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌数目较多，肠杆菌、肠球菌数目较少，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者肠道菌群数目比较（,lgN/g）

表1 两组患者肠道菌群数目比较（,lgN/g）

2.2 两组患者Th17、Treg 及Th17/Treg 比值比较

与活动期患者相比，缓解期患者Th17、Th17/Treg 较低，Treg 较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组患者Th17、Treg 及Th17/Treg 比值比较（）

表2 两组患者Th17、Treg 及Th17/Treg 比值比较（）

2.3 肠道菌群数目与Th17、Treg 相关性分析

经Pearson 相关性分析可知，乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌与Th17、Th17/Treg 呈负相关，与Treg 呈正相关，肠杆菌、肠球菌与Th17、Th17/Treg 呈正相关，与Treg 呈负相关（P＜0.05）。见表3。

表3 肠道菌群数目与Th17、Treg 相关性分析（）

表3 肠道菌群数目与Th17、Treg 相关性分析（）

2.4 不同预后Th17/Treg 患者肠道菌群数目比较

随访1 个月后，Th17/Treg 平衡患者52 例，Th17/Treg 失衡患者34 例。与Th17/Treg 失衡患者相比，Th17/Treg 平衡患者乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌数目较多，肠杆菌、肠球菌数目较少，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 不同预后Th17/Treg 患者肠道菌群数目比较（,lgN/g）

表4 不同预后Th17/Treg 患者肠道菌群数目比较（,lgN/g）

2.5 Th17/Treg 平衡相关因素分析

将预后Th17/Treg 平衡作为因变量，以肠道菌群数目作为自变量，纳入Logistic 回归模型进行分析，结果显示，肠道菌群数目为UC 患者Th17/Treg平衡的影响因素。见表5。

表5 Th17/Treg 平衡相关因素分析

3 讨论

UC 为临床常见的消化系统慢性疾病，多由患者免疫功能失调而引起，如未得到及时有效治疗，极易引起肠穿孔、中毒性肠扩张的疾病，对患者身体健康、生活质量造成严重影响，因此，临床需尽早给予有效治疗，调节免疫功能，控制病情进一步发展［6］。

Treg 细胞为具有特异性免疫调节效果的专职抑制细胞，其可通过信号刺激激活后抑制机体CD4+等T 细胞的增殖分化，从而抑制其免疫功能，其对机体部分T 细胞选择性抑制是维持免疫平衡的重要机制［7］。相关研究结果发现［8］，Treg 细胞可有效抑制病理性T 淋巴细胞增殖及组织浸润，其细胞数量减少可致使机体免疫功能异常，从而导致各种免疫性疾病的发生。Th17 细胞为机体T淋巴细胞前体分化而成，具有独立的分化调节机制，可分泌IL-17 等多种炎性因子，从而促进机体炎症发生，引起多种免疫性疾病［9］。相关研究表明［10］，UC 患者机体Th17 细胞比例增加，Treg 细胞比例降低，机体抑制能力显著下降，从而致使自身反应性T 细胞增多，因此，调节Th17/Treg 免疫平衡对于治疗UC 具有重要意义。机体处于正常生理情况下，肠道内双歧杆菌等优势菌可形成肠道屏障维持其正常功能，当肠道菌群数目紊乱时，优势菌将转化为肠球菌等厌氧菌，从而导致肠道功能障碍，引起免疫功能失调［11-12］。相关研究表明［13］，UC 患者双歧杆菌、乳酸杆菌等优势菌数目显著减少，场球菌等致病菌数目显著升高。本研究结果显示，缓解期组肠道菌群数目优于活动期组，Th17、Th17/Treg 低于活动期组，Treg 高于活动期组，说明Th17、Treg 细胞比例及肠道菌群数目与UC 病情具有一定联系，进一步进行Pearson相关性分析可知，乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌与Th17/Treg 呈负相关，肠杆菌、肠球菌与Th17/Treg呈正相关，说明肠道菌群数目与UC 患者Th17/Treg免疫平衡具有紧密联系。

本研究对不同预后Th17/Treg 患者肠道菌群数目进行分析，结果显示，UC 患者肠道菌群数目为Th17/Treg 免疫平衡的重要影响因素，临床可通过监测患者肠道菌群数目评估其免疫功能，从而制定相应治疗方案，控制病情进展。

综上所述，肠道菌群数目、Th17、Treg 细胞比例与UC 病情具有紧密联系，其数目与Th17/Treg免疫平衡存在相关性，为临床评估病情、制定治疗方案提供可靠依据。