刘兰凤， 刘海燕， 田斌， 王晓荣， 梁红

(衡水市第五人民医院，河北省衡水市 053000)

高敏肌钙蛋白T(high-sensitivity cardiac troponin T，hs-cTnT)是心肌损伤标志物，在急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)早期诊断中具有重要价值[1]。微小RNA(miRNAs)可通过靶基因调控心肌细胞增殖和凋亡，在心血管疾病中发挥重要作用，有研究发现，ACS患者血清miR-208a水平升高，与cTnT水平呈正相关[2]，对ACS早期有一定诊断价值。miR-448属于miRNA的一种，研究显示，大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型中miR-448表达上调[3]。然而miR-448在ACS患者中的研究尚未见报道，本文研究胸痛ACS患者血清hs-cTnT、miR-448水平的变化，进一步探讨其在ACS临床诊断中的意义。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选择本院2018年6月—2021年6月因胸痛入院的ACS患者206例为ACS组，其中不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris，UAP)31例、ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction，STEMI)142例、非STEMI(non-STEMI，NSTEMI)33例；根据冠状动脉造影Gensini评分[4]将其分为轻度、中度、重度狭窄组。选择同期因胸痛入院的非ACS患者(非冠心病患者)100例为对照组。收集所有观察对象年龄、性别、高血压病史、糖尿病史、吸烟史等临床资料。本研究经本院伦理委员会批准，患者签署知情同意书。纳入标准：①符合欧洲心脏病协会(ESC)和美国心脏病学会(ACC)诊断标准[5-6]；②ACS均为首次发病，且经冠状动脉造影确诊；③临床资料完整。排除标准：①陈旧性心肌梗死、心脏瓣膜病、心源性休克病史；②近期使用免疫抑制剂、免疫增强剂；③合并其他心功能不全、血液系统疾病、恶性肿瘤及自身免疫性疾病。

1.2 qRT-PCR检测血清miR-448水平

入院后采集空腹静脉血5 mL，加入促凝管中，2 000 r/min离心15 min，收集血清置-80 ℃待检。采用qRT-PCR检测血清miR-448水平，TRIzol试剂提取血清总RNA，使用反转录试剂盒合成cDNA后，使用荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司)进行qRT-PCR扩增。miR-448上游引物(5′-3′)：TGCATATGTAGGATGTCC，下游引物(5′-3′)：GAACATGTCTGCGTATCTC；U6上游引物(5′-3′)：CTCGCTTCGGCAGCACATATACT，下游引物(5′-3′)：ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC。总反应体积为20 μL，其中上下游引物各0.5 μL，PremixTaq 12.0 μL，cDNA 2.0 μL，ddH2O 5.0 μL。反应条件为预变性95 ℃ 60 s；变性95 ℃ 15 s；退火60 ℃ 60 s；熔化曲线95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s，95 ℃ 15 s，40个循环。以U6为内参，采用2-ΔΔCt法计算miR-448相对表达量。

1.3 hs-cTnT、cTnI、CK-MB等的检测

入院后采集空腹静脉血3 mL，加入促凝管中，3 000 r/min，离心15 min，收集血清置-80 ℃待检。采用全自动化学发光分析仪(型号Cobas e602、CobasC502，罗氏公司)检测血清hs-cTnT和血清心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)，采用免疫抑制法测定肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme，CK-MB)，血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoproteins cholesterol,HDLC)水平按照相应试剂盒检测。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 各组临床特征和血清指标的比较

ACS组血清hs-cTnT、cTnI、CK-MB、TC、TG、LDLC、miR-448水平高于对照组，HDLC水平低于对照组(P<0.05；表1)，其他指标两组间比较差异无显著性(P>0.05)。

表1 各组临床特征和血清指标的比较

2.2 各组血清miR-448水平的比较

UAP、NSTEMI、STEMI患者间血清miR-448水平差异无显著性(P>0.05；表2)。中度和重度狭窄组miR-448水平高于轻度狭窄组；重度狭窄组miR-448高于中度狭窄组(P<0.05；表2)。

表2 各组血清miR-448水平的比较

2.3 ACS影响因素分析

以是否ACS为因变量，以有统计学差异的指标为协变量进行Logistic回归分析显示，miR-448、hs-cTnT、cTnI、CK-MB、LDLC是ACS的危险因素(P<0.05；表3)。

表3 ACS的影响因素分析

2.4 miR-448与血清指标及Gensini评分的相关性

ACS患者血清miR-448水平与血清hs-cTnT(r=0.473，P<0.001)、cTnI(r=0.523，P<0.001)、CK-MB(r=0.501，P<0.001)、TG(r=0.401，P<0.001)、TC(r=0.415，P<0.001)、LDLC(r=0.497，P<0.001)、Gensini评分(r=0.505，P<0.001)呈正相关，与HDLC(r=-0.395，P<0.001)呈负相关。

2.5 血清miR-448、hs-cTnT对ACS的诊断价值

血清miR-448和hs-cTnT诊断ACS的AUC、灵敏度、特异度均高于cTnI、CK-MB，且二者联合cTnI和CK-MB诊断效能最高(表4和图1)。

图1 血清miR-448、hs-cTnT对ACS的诊断价值

表4 血清miR-448、hs-cTnT、cTnI、CK-MB对ACS的诊断价值

3 讨 论

miRNAs在心血管疾病如高血压、心肌梗死、心力衰竭等中发挥重要作用，其异常表达与多种疾病有关[7]，miRNAs可参与调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)、血管内皮细胞、心肌细胞等多种细胞的增殖、凋亡，还可参与炎症反应、氧化应激等与动脉粥样硬化有关的病理过程[8-9]。miR-448属于miRNAs的一种，研究显示，lncRNA AK006774可通过靶向调控miR-448抑制缺氧/复氧处理心肌细胞的凋亡和氧化应激[10]。另有研究显示，缺血性心肌病患者心脏组织中与心肌梗死小鼠心脏组织中miR-448表达显著增加，抑制miR-448表达可降低心肌梗死后的心律失常风险[11]。本研究结果显示，ACS组患者血清miR-448水平较对照组显著升高，提示miR-448水平变化与ACS发生有关。本研究还发现，中度狭窄组和重度狭窄组ACS患者血清miR-448水平显著高于轻度狭窄组，重度狭窄组ACS患者血清miR-448水平显著高于中度狭窄组，提示ACS患者血清miR-448水平与冠状动脉狭窄程度有关。研究显示，冠状动脉粥样硬化斑块的形成与VSMC增殖、凋亡有关，朱彦彬等[12]研究表明，大鼠颈动脉损伤组织VSMC miR-448高表达，miR-448可靶向负调控SIRT1，促进VSMC增殖、侵袭和迁移，减少细胞凋亡。Zhang等[13]研究表明，冠状动脉粥样硬化斑块VSMC中miR-448表达水平升高，miR-448可通过靶向MEF2C促进VSMC增殖与迁移。由此可以推测，miR-448可能通过参与VSMC增殖的调控，引起动脉粥样硬化斑块不稳定，促进ACS发生及发展过程。

心肌肌钙蛋白是心肌坏死的敏感指标，其中hs-cTnT和cTnI具有心肌特异度，传统的检测方法对血液中低水平的cTn较难检出，hs-cTnT具有较高的灵敏度、特异度和较长诊断窗口期，对急性心肌梗死、ACS具有较高诊断价值，在临床应用广泛[14-15]。CK-MB是诊断急性心肌缺血的重要指标，本研究显示ACS组患者血清hs-cTnT、cTnI、CK-MB水平显著高于对照组，与以往报道一致[14-15]。本研究Logistic回归分析显示，miR-448、hs-cTnT、cTnI、CK-MB、LDLC是ACS的相关危险因素。ACS的病理基础包括动脉粥样硬化、冠状动脉血管内皮损伤、脂质代谢紊乱等，Gensini评分可反映冠状动脉狭窄程度[16]。本研究结果显示，ACS患者血清miR-448水平与血清hs-cTnT、cTnI、CK-MB、TG、TC、LDLC、Gensini评分呈正相关，与血清HDLC水平呈负相关，提示miR-448可能与ACS患者脂质代谢及心肌损伤程度密切相关，且miR-448水平越高，患者冠状动脉病变狭窄程度越严重。hs-cTnT对ACS的早期诊断具有一定临床意义。本研究发现，血清miR-448和hs-cTnT诊断ACS的AUC、灵敏度、特异度均高于cTnI、CK-MB，且联合诊断效能更高，表明检测血清miR-448、hs-cTnT水平对ACS具有一定诊断价值，血清hs-cTnT、miR-448与cTnI、CK-MB联合诊断效能更高，有一定临床应用价值。

综上所述，血清miR-448、hs-cTnT对ACS的诊断有一定价值，hs-cTnT、miR-448、cTnI、CK-MB联合诊断效能更高。