马婷婷，肖 凌

(湖北中医药大学，湖北 武汉 430065)

铅是对人体有害的重金属，随着工业的发展，铅污染存在于饮水、粮食[1]、化妆品[2]、药物[3]、PM2.5等[4]各个方面，铅是PM2.5中重金属的典型成分[5]。虽然人们日常通过PM2.5摄入的铅极其微量，但铅长期积累于体内难以排出。西医在驱铅治疗方面主要有螯合剂、金属硫蛋白、抗氧化剂等药物，但是存在恶心、呕吐、头晕、过敏等多种不良反应[6]。中医认为，铅是阴寒之邪，内通肝肾，应当以排毒利湿、温补肾阳、调和气血为治疗原则[7]。霾黄金中药茶主要由罗汉果、芦根、百合、甘草、薏苡仁、陈皮、余甘子、玉竹等组成，前期实验证实本茶饮无急性毒理作用[8]，并且对PM2.5所致的肺损伤具有防护作用[9]。

本实验主要探讨霾黄金中药茶是否具有改善铅毒作用，PM2.5中含铅量低微，难以通过PM2.5雾霾颗粒对大鼠进行造模染毒，因此本实验选择添加乙酸铅的饲料喂养大鼠构建短期铅暴露模型，同时在试验组的饮用水中加入霾黄金中药茶进行干预治疗，观察霾黄金中药茶对大鼠铅染毒模型的改善作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物：30只SPF级SD雄性大鼠购自湖北省实验动物研究中心，平均体重(233.4±13.0)g，动物合格证号42010200004222，单位许可证号SCXK(鄂)2017-0012，将大鼠在适宜条件下进行适应性喂养10 d。

1.1.2 实验药物与试剂：乙酸铅(批号L812498)，霾黄金中药茶(批号SC10642011801427)，ALT试剂盒(批号20201222，南京建成公司)，AST试剂盒(批号20201219，南京建成公司)，尿素氮试剂盒(批号20201215，南京建成公司)，大鼠白细胞介素-6(Interleukin 6,IL-6)ELISA试剂盒(批号MM-0190R2，江苏菲亚公司)，大鼠肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-α)ELISA试剂盒(批号MM-0180R2，江苏菲亚公司)。

1.1.3 实验仪器：水浴锅(型号DK-98-Ⅱ，天津市泰斯特仪器有限公司)，酶标仪(型号MB-580，深圳市汇松科技发展有限公司)，可见分光光度计(型号V-1000，上海翱艺仪器有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与造模：将适应性喂养10 d后的30只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和霾黄金组，每组10只。参考相关文献[10]，将醋酸铅以0.57 g/kg加入普通大鼠饲料中制成含铅饲料。模型组、霾黄金组大鼠每日给予充足的含铅饲料喂养，对照组喂养正常饲料，三组均饲喂4周。

1.2.2 给药：配制霾黄金溶液，取自霾黄金中药茶，根据专利“一种清肺润肺茶的生产方法”(专利号ZL201410124446.5)，人每日摄入剂量1.5 g，实验中大鼠剂量设为人的20倍，参考《药理实验方法学》的体表面积换算法，计算得出大鼠剂量为0.54 g/d，根据大鼠每日的大约饮水量为35 ml配制成15.4 g/L的霾黄金溶液。从实验第1天起，霾黄金组大鼠给予充足的霾黄金溶液饮用，对照组和模型组则予正常饮水，每隔6 d霾黄金组大鼠正常饮水1 d，共处理4周。

1.2.3 取材：给药4周后，予大鼠7%水合氯醛0.5 ml/100 g的剂量麻醉，采用促凝真空采血管、肝素抗凝管进行大鼠腹主动脉取血，然后取蚕豆大小的大鼠肝组织和肾组织置于30 ml的4%多聚甲醛中固定。

1.2.4 大鼠体重检测：从实验第1天起，每隔4 d记录各组大鼠体重，并观察大鼠每日行为饮食变化。

1.2.5 血铅含量检测：给药结束后腹主动脉采血至肝素抗凝管，检测各组大鼠血铅含量。

1.2.6 肝肾功能及IL-6和TNF-α水平检测：促凝真空采血管采血后静置30 min，离心分离血清，检测谷丙转氨酶(Alanine transaminase，ALT)、谷草转氨酶(Aspertate aminotransferase,AST)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、IL-6、TNF-α水平。

1.2.7 组织病理学形态观察：取4%多聚甲醛中固定过夜的肝组织、肾组织，石蜡包埋，切片，进行HE染色，观察大鼠肝肾组织的形态学变化。

2 结 果

2.1 各组大鼠体重比较 见表1。给药过程中发现模型组大鼠后期明显行为迟钝，毛色失去光泽，且进食大幅减少。与对照组相比，含铅饲料喂养的其他两组体重上升缓慢，模型组体重在后期存在停滞反减的现象；与模型组相比，霾黄金组大鼠体重平稳上升。

表1 各组大鼠体重比较(g)

2.2 各组大鼠血铅含量比较 见表2。与对照组比较，模型组、霾黄金组大鼠血铅含量均升高，差异有统计学意义(P<0.05)。霾黄金组大鼠血清含铅量与模型组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 各组大鼠血铅含量比较(μg/L)

2.3 各组大鼠肝肾功能及血清IL-6、TNF-α水平比较 见表3。与对照组比较，模型组大鼠血清AST、ALT、BUN水平均高，差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较，霾黄金组大鼠血清AST、ALT、BUN水平均低，差异有统计学意义(P<0.05)。三组IL-6、TNF-α水平比较，差异无统计学意义(均P>0.05)。

表3 各组大鼠肝肾功能及血清IL-6、TNF-α水平比较

2.4 各组大鼠肝、肾组织病理学形态 对照组大鼠肝小叶形态结构清晰规则，未见异常病理改变，肝细胞形态正常呈放射状排列整齐；模型组大鼠肝组织病变明显，肝细胞肿胀形态异常，且肝索排列紊乱，肝小叶结构消失，肝血窦充血病变明显；霾黄金组大鼠肝组织病变较模型组明显减轻(图1)。对照组大鼠的肾小球、肾小管等形态正常，结构清晰；模型组大鼠的肾组织形态异常，出现肾小球体积增大、肾小管空泡样变以及炎性细胞浸润等病理改变；霾黄金组大鼠的肾组织病理改变较模型组明显减轻(图2)。

A：对照组；B：模型组；C：霾黄金组

A：对照组；B：模型组；C：霾黄金组

3 讨 论

目前，车辆排放、工业排放、化石燃料燃烧等均会衍生重金属铅，重金属铅暴露可诱发广泛的生理、生化、行为障碍，且可能引起各种器官和组织的严重危害[11]，是人类肝肾毒性的最普遍原因之一[12]。

中医对铅毒有较为深入的认识，中医认为铅邪入体，可潴留脏腑，造成气机郁滞，血行不畅，脏腑机能因之受损，进而损伤肝、脾、肾诸脏[13]。中医学的多种治疗方法在驱铅治疗中取得较好疗效，本研究所用的霾黄金中药茶是一款清肺健脾专利中药茶，方中罗汉果、余甘子具有保肝、抗肿瘤等作用[14-15]，可以减轻肝损伤；薏苡仁可增强免疫功能，调节肠道菌群[16]；陈皮理气健脾[17]；玉竹健脾养胃[18]；甘草具有解毒抗病毒作用[19]，且富含钙[20]，余甘子富含锌[21]，生物态的锌钙等能与铅竞争细胞位点[22]，因此可降低铅的细胞毒性。

本实验结果显示，模型组大鼠短期铅暴露可引起明显的食欲减轻、体重下降，这与既往研究[23]一致，而饮用霾黄金中药茶的大鼠在体重上明显高于模型组，表明霾黄金中药茶可以缓解大鼠铅中毒所引起的食欲下降、体重减轻。另外，实验结果显示，各组大鼠血清IL-6、TNF-α比较差异无统计学意义，说明是实验剂量的铅暴露大鼠体内炎症因子未明显升高。肝脏与肾脏被视为铅毒性作用的靶器官。本实验中，模型组大鼠血清AST、ALT、BUN水平均高于对照组；霾黄金组大鼠血清AST、ALT、BUN水平均低于模型组；与既往研究[24]结果相一致。AST、ALT是肝功能的两个重要指标，其升高提示肝细胞受损，结合病理学切片结果发现，模型组大鼠铅暴露后的肝脏发生明显病变，肝细胞的损伤破坏导致肝细胞中的转氨酶入血，引起血清AST、ALT含量升高，说明铅暴露可引起大鼠肝脏损伤。BUN是评价肾脏滤过功能的一项指标，模型组大鼠BUN异常上升，结合其肾脏病理切片显示肾单位出现明显病变，提示铅暴露可引起大鼠肾脏损伤。本实验中霾黄金组大鼠血清AST、ALT和BUN水平均明显低于模型组，而且组织病理学形态变化低于模型组，说明霾黄金中药茶能减轻重金属铅引起的肝肾损伤。

然而，本实验结果显示，霾黄金组大鼠血铅水平与模型组比较差异无统计学意义，提示霾黄金中药茶并未降低大鼠的血铅水平。出现这一结果的原因可能为：模型组大鼠后期食欲明显下降，减少含铅饲料的食用，而霾黄金组大鼠体重高于模型组，说明霾黄金组后期较模型组摄入了更多的含铅饲料，但是模型组和霾黄金组血铅含量无明显差异，间接说明霾黄金组可能较模型组排出更多的铅。

综上所述，霾黄金中药茶可明显改善铅染毒大鼠食欲，增加体重，保护肝肾功能。另外，霾黄金中药茶是否能有效降低大鼠血铅水平，有待进一步实验验证。