沈楼怡，桂 春

（广西医科大学第一附属医院，南宁 530021）

miRNA 是一类高度保守的内源基因编码的非编码单链RNA，在细胞内有多种重要的调节作用，与成熟mRNA结合、调节蛋白质的表达有关。众多研究表明，许多miRNA 在心血管系统中表达，与心脏疾病的发展密切相关，可调控心肌梗死、肥大或心律失常等疾病发生发展[1-2]。然而，miRNA-29c在心肌细胞中的研究却十分有限。笔者经前期生物信息学筛查发现，VEGF可能是miRNA-29c 的靶基因。本实验旨在以大鼠H9C2 心肌细胞为对象，研究miRNA-29c是否通过调控VEGF对H9C2细胞产生生物学行为的影响，分析miRNA-29c对心肌细胞的调控作用，以期为心血管疾病的治疗提供新的思路和治疗策略。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 大鼠H9C2心肌细胞购自于上海中乔新舟生物科技有限公司。

1.1.2 实验试剂 胎牛血清（FBS）、高糖DMEM培养基购自于美国gibco 公司；逆转录试剂盒和PCR试剂盒购自日本TaKaRa 公司；miRNA-29c 模拟物（mimic）、阴性转染（NC）病毒购自上海吉凯基因有限公司；HRP 标记小鼠抗兔二抗购于美国Santa Cruz 公司；细胞计数试剂盒（CCK-8）购于大连美仑生物公司；兔抗大鼠多克隆GAPDH、VEGF、Bax、Bcl-2、caspase3抗体购自于沈阳万类生物科技公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 将大鼠H9C2心肌细胞株置于含10%胎牛血清的高糖DMEM完全培养基中培养，放入5%CO2饱和湿度的37 ℃培养箱培养，适时更换新鲜培养基及传代。

1.2.2 慢病毒转染细胞 将H9C2 心肌细胞分为：不作处理的空白对照（control）组、转染miRNA-29c模拟物的阳性转染（LV-miR-29c-mimic）组；转染空载病毒的阴性转染（LV-NC）组。转染方法：选取对数生长期的大鼠H9C2 心肌细胞，转染感染复数（MOI）为50 的miRNA-29c 模拟物（mimic）及阴性转染（NC）病毒，转染12 h 后更换新鲜培养基，继续培养48 h 后观察荧光情况，后续用含2µg/mL 嘌呤霉素的完全培养基培养及传代，形成混合克隆稳定株。……