张育铭，陈乔光，候照峰，刘丹丹，陶建平，许金俊

(1.扬州大学兽医学院，扬州 225009；2.江苏动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009)

microRNAs(miRNAs)是由动物、植物、病毒和部分单细胞生物表达的一种短的非蛋白编码RNA，大小约为22个核苷酸[1]。Lee等[2]在1993年从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)中首次发现可调控胚胎后期发育的小分子RNAlin-4，miRNAs对细胞信号网络具有不可忽视的调控作用。在真核生物中有2/3的编码基因受miRNAs的调控[3]，参与许多生理过程的调控，如发育、细胞分裂、增殖和调亡、脂类代谢、激素分泌等，并且在炎症反应、免疫相关途径、肿瘤发生相关途径、蛋白质修饰相关途径等过程中发挥着重要作用。随着测序技术的发展，miRNAs的研究也越来越深入，近年来研究发现，病原如病毒[4]、细菌[5]、寄生虫[6]感染鸡后均会引起miRNAs的变化。文章就近年来部分病毒、细菌、寄生虫感染后，鸡miRNAs的变化和调控机制的研究进行综述，以期为从miRNAs的角度对鸡病的诊断、治疗和防控提供一定的参考。

1 miRNAs的生物合成及其功能

在动物中，miRNAs的生物合成起始于细胞核内RNA聚合酶Ⅱ或RNA聚合酶Ⅲ对DNA的转录[7]，生成初级miRNA(primary-miRNA，pri-miRNA)。之后pri-miRNA在细胞核内被核酸内切酶RNase Ⅲ(drosha ribonuclease Ⅲ，Drosha)切割成具有特征性发夹结构的前体miRNA(precursor-miRNA，pre-miRNA)[8-9]。随后，转运蛋白Exportin-5识别pre-miRNA的3′-端，将其运送到细胞质中。在细胞质中，双链RNA专一性内切酶(Dicer酶)识别pre-miRNA双链的3′和5′-末端信号，将其剪切成22个核苷酸左右的成熟miRNA双链。随后，双链分离成2条单独的链，其中1条miRNA链通常被降解，另一条miRNA链与AGO蛋白、双链RNA结合蛋白、Dicer酶结合形成RNA诱导基因沉默复合物(RISC)后发挥功能[10]。miRNA 5′-区域存在一段2～8个核苷酸的种子序列，该段序列通常特异性的与其靶基因3′-非翻译区(UTR)部分或完全结合，在转录后水平抑制或降解mRNA介导的基因沉默[11]，调控生理机能如发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化等，参与免疫反应、代谢、生物合成，并可以作为疾病预后和诊断的生物标志物。此外，miRNAs的表达在真核生物不同发育阶段有其特定的表达模式，具有严格的组织和时间特异性。

2 病毒感染鸡体后miRNAs的调控

2.1 传染性法氏囊病病毒感染

雏鸡是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)的自然宿主之一，感染后会导致发病鸡法氏囊先肿大后萎缩，引起免疫功能障碍，造成严重的免疫抑制。IBDV感染后，会激活鸡体内的部分miRNAs，这些miRNAs可以靶向IBDV的衣壳蛋白(VP)或基因组的特定序列，抑制IBDV的复制[4，12]。 Wang等[4]筛选了5种抗VP2的miRNAs用于构建表达载体，并将其转染进鸡胚成纤维细胞(DF-1)中，可显著抑制VP2的表达。 随后选择了更有效的miR-VP2A和miR-VP2E转染进DF-1细胞中，之后感染IBDV，结果显示单独和共表达的miR-VP2A和miR-VP2E引起病毒滴度显著降低，抑制作用至少持续120 h。这表明靶向VP2的miRNAs可以有效抑制IBDV病毒的复制。Wang等[12]利用基因芯片技术从IBDV感染的DF-1和法氏囊中筛选出gga-miR-21，构建慢病毒载体使其在感染IBDV的DF-1中过表达，发现IBDV VP1的表达水平下降，IBDV的复制受到抑制。

树突状细胞(DC)作为一种抗原递呈细胞，在免疫系统中发挥着重要作用。干扰素(IFN)是机体受到病原刺激后，产生的一种具有抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增殖、调节免疫作用的糖蛋白。IFN的表达与宿主细胞中细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)的表达密切相关。Fu等[13]在感染IBDV的DF-1细胞中发现了一系列显著差异表达的miRNAs，其中gga-miR-130b可以通过靶向IBDV基因组片段A的特定序列抑制IBDV复制，并通过靶向宿主细胞中SOCS5增强IFN-β的表达。同时，Fu等[14]还发现，gga-miR-454可以靶向IBDV基因组片段B的特定序列抑制IBDV复制，并且gga-miR-454通过靶向SOCS6增加了IFN-β的表达。之后Duan等[15]的研究也发现了一种诱导性的抗IBDV感染的介质——gga-miR-27b-3p，它可以靶向SOCS3和SOCS6，从而增强Ⅰ型干扰素表达，提高信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1，STAT1)在701位酪氨酸的磷酸化水平，抑制IBDV的复制。

miRNAs的变化不只是有利于宿主的，也可能是有利于病毒的。IBDV感染DF-1后，会引起鸡p53(Chp53)表达上调，从而抑制IBDV的复制。Ouyang等[16]的研究表明，gga-miR-2127能够靶向Chp53 mRNA的3′-UTR，抑制Chp53的表达，从而促进IBDV的复制。 此外，Ouyang等[17]研究也发现，干扰素调节因子2(IRF2)的3′-UTR与gga-miR-9*有2个结合位点，gga-miR-9*通过靶向IRF2抑制抗病毒先天免疫中IFN的产生，负调节宿主的抗病毒天然免疫反应，促进IBDV复制。

2.2 J亚型禽白血病病毒感染

禽白血病是一种能够在鸡群中垂直传播的肿瘤性疾病，一直以来J亚型禽白血病病毒(Avian leukosis virus-J,ALV-J)被认为可以通过精子进行垂直传播，精子miRNAs的变化与该病的发生发展密切相关。Chen等[18]对ALV-J感染鸡的精子细胞外小泡进行深度测序，发现了9种差异表达的miRNAs，6个上调，3个下调，其中下调的miR-138-5p被认为是一种肿瘤抑制因子，在多种癌症中表达下调，包括乳腺癌[19]和肺癌[20]。该研究的结果表明，ALV-J感染后会引起鸡精子miRNAs发生变化，且部分变化的miRNAs被证明与肿瘤性疾病相关。

禽白血病的特征性病变是引起肝脏等器官出现淋巴瘤，导致肝脏破裂出血，引起感染鸡死亡。许多报告表明，差异表达的miRNAs可以促进癌症的发生和发展[21-23]。Li等[24]利用miRNAs微阵列技术在未感染和感染ALV-J的10周龄雏鸡肝脏中检测出12个差异表达的miRNAs，其中gga-miR-221、gga-miR-222、gga-miR-1456、gga-miR-1704、gga-miR-1777、gga-miR-1790和gga-miR-2127表达上调，gga-let-7b、gga-let-7i、gga-miR-125b、gga-miR-375和gga-miR-458表达下调。Wang等[25]利用miRNAs微阵列研究了ALV-J感染238 d后鸡肝脏肿瘤中miRNAs表达的变化，与对照组相比，4个miRNAs表达差异，gga-miR-221表达显著上调，gga-miR-193a、gga-miR193b和gga-miR-125b表达显著下调。差异表达的miRNAs与Li等[24]的研究结果略有不同，可能是鸡品种和日龄差异的原因导致。在Lambeth等[26]的研究中，差异表达的miRNAs中上调的miR-221和miR-222可抑制肿瘤抑制因子和细胞周期抑制因子p27Kip1的表达；在Garofalo等[27]的报道中，miR-221和miR-222的下调导致癌细胞凋亡。Ji等[28]的研究首次报道了ALV-J感染过程中DF-1细胞miRNAs表达水平的变化，选取了7个已报道的miRNAs(let-7b/7i、miR-221/222、miR-125b、miR-375b和miR-2127)，其中6个miRNAs与肿瘤发生相关。研究结果表明，在感染引起骨髓瘤的ALV-J株(NX0101)和引起血管瘤的ALV-J株(GD1109)的细胞中，除gga-miR-375外，其余6个miRNAs均在感染后1 h表达上调。在感染后第2天，7个miRNAs在感染的DF-1细胞中均表达上调。感染后第6天，2株不同表型的ALV-J株感染DF-1细胞后，gga-let-7b、gga-miR-125b和gga-miR-375表达下调，gga-miR-221和gga-miR-222表达上调。而感染NX0101的DF-1细胞中gga-let-7i的表达降低，感染GD1109的细胞中gga-let-7i的表达增强，而gga-miR-2127在感染和未感染细胞中的表达无显著差异。该研究加深了对肿瘤相关机制和ALV-J与宿主相互作用的理解，证明了在ALV-J感染过程中，miRNAs可动态调节靶基因的表达。

巨噬细胞在宿主防御入侵病原体中起着至关重要的作用。Dai等[29]采用全转录组分析的方法，对鸡原代单核细胞来源的巨噬细胞(MDM)中的宿主因子包括基因、miRNAs、长链非编码RNA(lncRNA)及其调控网络进行了分析。在ALV-J感染后3 h(3hpi)，在MDM中共检测到128个差异表达的lncRNAs和15个差异表达的miRNAs，在感染后36 h的MDM中分别检测到30个差异表达的lncRNAs和8个差异表达的miRNAs。该研究进一步构建了差异表达的lncRNAs-mRNAs、miRNA-mRNAs和lncRNAs-miRNA-mRNAs相互作用网络。结果提示，在ALV-J感染后3 h的MDM中，差异表达的lncRNAs和miRNAs通过互作网络参与了非受体酪氨酸激酶-信号转导与转录激活因子(janus kinase-signal transducer and activator of transcription，Jak-STAT)信号通路中细胞周期蛋白D3(CCND3)和SOCS5的调控。该研究结果全面揭示了鸡原代巨噬细胞中非编码RNA与ALV-J的关系。

环状RNA(circRNAs)在进化上是保守的，并且广泛存在，circRNAs比线性RNA更稳定，因此可能参与不同的生物学过程[30]。而且有越来越多的证据表明，circRNAs可以与癌症相关的miRNAs联系起来，通过circRNA/miRNA/mRNA轴作为癌症相关途径的调节因子[31-32]。miR-375是一种成熟的肿瘤抑制因子miRNA，在许多类型的癌症中异常表达，是潜在的抑制癌症和药物治疗的靶点[33]。miR-375的差异表达已被证明与肿瘤侵袭性和发展过程相关[34-35]。在Li等[36]的报道中，证明了下调的gga-miR-375可以作为一种肿瘤抑制因子，靶向Yes相关蛋白(YAP)基因，抑制细胞增殖，促使癌细胞凋亡。Zhang等[37]的研究证明了YAP1是gga-miR-375的靶基因，支持了Li等[36]的研究结果。随后在此基础上通过RNA免疫沉淀(RIP)、生物素化RNA下拉实验和RNA荧光原位杂交(RNA-FISH)实验，证实CIRC-Vav3是gga-miR-375的上游靶基因，证明了ALV-J可以通过CIRC-Vav3/gga-miR-375/YAP1轴影响上皮-间质转化(EMT)标志物从而促进肿瘤发生。

ALV-J感染鸡后miRNAs的变化，可能有利于宿主，也可能有利于病毒。Yu等[38]研究发现，在ALV-J感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中，gga-miR-148a-5p的表达明显下调。双荧光素酶报告基因分析表明，3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1(PDPK1)是gga-miR-148a-5p的直接靶基因，在体外，gga-miR-148a-5p过表达显著促进ALV-J感染的CEF细胞增殖，包括细胞周期，而抑制gga-miR-148a-5p则相反。抑制PDPK1可促进ALV-J感染细胞增殖和细胞周期，说明gga-miR-148a-5p靶向PDPK1可抑制ALV-J感染细胞的增殖和细胞周期。此外，Li等[39]在ALV-J感染鸡的脾脏与未感染脾脏167个差异表达的miRNAs中，验证了上调的miR-34b-5p可以直接靶向黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)，抑制MDA5可加速了ALV-J感染细胞的增殖、细胞周期和迁移，促进ALV-J的复制。此外，在Li等[40]先前的报道中，上调的miR-23b可以直接靶向干扰素调节因子1(IRF1)，显著降低IRF1 mRNA表达水平，从而降低IFN-β，负调节宿主的抗病毒天然免疫反应，从而促进ALV-J的复制。

2.3 禽流感病毒感染

禽流感是一种传染性强，传播速度快的人兽共患传染病，禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)变异速度快、基因型众多，给全球养鸡业造成了巨大的经济损失。Wang等[41]通过高通量测序技术在H5N3感染鸡的肺脏和气管中分别鉴定出73和36个差异表达的miRNAs，其中在感染和未感染肺脏的比较中，下调的miRNAs的靶基因显著富集在对病毒的应答、免疫系统反应、淋巴细胞和肺脏发育的过程，在感染和未感染气管的比较中，下调的miRNAs靶标中，白细胞介素12(IL-12)的产生和生物合成过程富集倍数最高；肺脏、气管感染组与非感染组比较表达上调miRNAs的靶点，在免疫相关的GO富集项中显著富集；在H5N3感染鸡后，肺脏和气管中下调的miRNAs调控几乎不同的过程，而上调的miRNAs调控几乎相同的过程，以应对病毒的感染；该结果表明，miRNAs即便存在组织特异性，但在病原感染后，相关联的组织如肺脏和气管中部分miRNAs依然能够发挥相同或相似的功能以应对病原感染。随后，Wang等[42]通过对H5N3感染鸡肺脏组织miRNAs表达与mRNA转录组的综合分析，发现了121个差异表达的miRNAs和508个差异表达的mRNAs；通过结合平行mRNA表达谱，发现某些mRNA在差异表达的miRNAs的调控下并没有发生差异表达，如在免疫相关基因IL-17受体D中预测了7个差异表达的miRNAs的结合位点，其中5个miRNAs在H5N3感染后上调，2个miRNAs下调，导致IL-17受体D在这些差异表达miRNAs不同的调控方向下没有发生差异表达。此外，病毒侵入后，细胞miRNAs也可以靶向病毒基因，如gga-miR-34a不仅有14个免疫相关靶基因，而且还针对AIVHA、NA、PA、聚合酶碱性蛋白1(PB1)和PB2基因，gga-miR-32可以靶向HA和NS基因，gga-miR-30b靶向M和NA基因。O’Dowd等[43]通过分析低致病性AIV H4N6感染鸡气管环后气管细胞释放的胞内和胞外小泡(EV)的miRNAs表达谱，在所有的细胞和胞外小泡样本中，有67个上调的miRNAs，157个下调的miRNAs。随后预测了差异表达miRNAs靶向的几个基因或通路，其中凋亡过程中的细胞凋亡蛋白酶(Caspase)受gga-miR-1784b-5p的调控，gga-miR-205b参与调控mRNA加工、p53转录因子和Ras-相关C3肉毒毒素底物1(RAC1)途径，gga-miR-282-5p参与了促癌基因(c-myc)途径。此外，该研究还发现了26种miRNAs可以靶向病毒基因组片段，如gga-miR-1784b-5p可以靶向H4N6病毒片段5(NP蛋白)和片段7(M1蛋白)。 这与Wang等[42]的研究结果一致。

DC的抗原递呈能力在识别和清除病毒方面发挥着不可替代的重要作用。Lin等[44]通过全基因组miRNAs图谱揭示了H9N2 AIV与禽DC的相互作用,发现H9N2 AIV的活性和非活性均增强了DC递呈抗原和激活T淋巴细胞的能力。其次，通过全基因芯片分析表明，H9N2 AIV刺激涉及蛋白质定位、核苷酸结合、白细胞内皮细胞迁移和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导。此外，该研究还证明了gga-miR-1644可以靶向肌盲蛋白2(MBNL2)以增强DC抑制病毒复制的能力，gga-miR-6675靶向PB1的核定位序列以触发PB1基因的沉默，从而抑制H9N2 AIV的复制。Yang等[45]通过分析H9N2 AIV感染DC后的miRNAs表达谱发现66个已知miRNAs和36个新miRNAs在感染后差异表达，其中72个上调，30个下调。对预测靶基因的GO富集分析显示，在细胞过程、蛋白质修饰过程、MAPK级联反应、对刺激的反应、蛋白质代谢等过程显著富集。KEGG分析表明，这些miRNAs的预测靶点在内吞、溶酶体、p53、Rig-I样受体和Nod样受体信号通路中显著富集。这些大多与DC促进感知入侵的病毒并且参与宿主抵御病原感染的第一道防线相关。

3 细菌感染后鸡体miRNAs的调控

3.1 肠炎沙门氏菌感染

肠炎沙门氏菌病是一种重要的食源性疾病之一，动物及动物性产品包括蛋、奶、奶制品均可能是肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis，SE)的载体，对人类健康造成威胁。Wu等[5]通过深度测序方法分析了SE感染白来航蛋鸡后盲肠miRNAs的表达，发现了37个差异表达的miRNAs，其中22个表达上调，15个表达下调。 通过对差异表达的miRNAs预测的靶基因进行GO富集分析发现，大多靶基因富集在免疫和代谢相关功能。说明在产蛋初期，miRNAs主要通过调节代谢和免疫之间的动态平衡，参与鸡体对SE感染的应答。

SE感染不同抗性和易感性鸡群时，鸡体的miRNAs调控途径具有不同的趋向性。Li等[46]通过高通量测序技术研究了SE易感组、抵抗组和对照组鸡脾脏miRNAs的表达，鉴定出32个差异表达的miRNAs，易感组和对照组之间有16个，抵抗组和对照组之间有13个，易感组和抵抗组之间有13个。对靶基因进行富集分析显示，细胞凋亡和NOD样受体(Nod-like receptor protein，NLRP)信号通路及获得性免疫应答明显丰富，且易感组与对照组相比凋亡途径显著丰富，抵抗组与对照组相比NOD样受体途径显著富集。此外，通过荧光素酶报告基因系统，证明了gga-miR-101-3p和gga-miR-155可以分别靶向免疫相关基因干扰素调节因子4(IRF4)和富含亮氨酸的重复序列蛋白59(LRRC59)的3′-UTR，从而负反馈促炎细胞因子的产生。

3.2 禽致病性大肠杆菌感染

禽致病性大肠杆菌病是鸡群中最常见的细菌性疾病之一，主要通过呼吸道在鸡群传播，引起不同年龄鸡的急性和慢性感染。与SE感染时相似，禽致病性大肠杆菌(avian pathogenicEscherichiacoli,APEC)感染不同抗性和易感性鸡群时，鸡体的miRNAs调控也具有差异。Jia等[47]通过高通量测序和整合分析鉴定易感组、抵抗组和对照组肉鸡脾脏miRNAs的表达，共鉴定出27个差异表达的miRNAs，其中13个在对照组与抵抗组之间、17个在对照组与易感组之间、14个在抵抗组与易感组之间。在这些差异表达的miRNAs中gga-miR-429的表达水平持续上调，抵抗组约为对照组的1.4倍，易感组约为抵抗组的2.3倍，因此，gga-miR-429可能与鸡对APCE的抗性有关。miRNAs的最终功能依赖于靶基因的活性，通过对靶基因的潜在功能分析，这些基因在12个与免疫相关的过程显著富集。说明在APEC感染过程中，鸡脾脏中差异表达的miRNAs可以对免疫相关靶点进行调控。Jia等[47]通过荧光素酶报告基因系统验证了gga-miR-429可以靶向跨膜蛋白(TMEFF2)的3′-UTR，在体外HD11巨噬细胞系中过表达gga-miR-429，显著抑制TMEFF2的表达，而TMEFF2参与脂多糖诱导的Wnt信号通路。该结果表明，gga-miR-429参与感染过程，是一个潜在的、新的与APEC抗性相关的基因。

宋祥军等[48]通过分析感染APEC的雏鸡脾脏miRNAs表达谱，鉴定出21个差异表达的miRNAs，其中差异表达的gga-miR-1416-5p和gga-miR-1662在Wu等[5]鉴定的SE感染的鸡盲肠miRNAs中也被发现，说明这2个miRNAs在鸡体内组织特异性较低，可以在不同细菌感染时广泛调控相关基因的表达，以应对病原感染。

3.3 空肠弯曲菌感染

鸡是空肠弯曲菌(campylobacter jejuni)的天然宿主，盲肠是其定植感染的主要场所，盲肠扁桃体作为鸡体最重要的免疫器官，在病原入侵后必然发挥重要的免疫功能。Liu等[49]通过Solexa测序分析鸡盲肠miRNAs在接种空肠弯曲菌后的变化，发现了4个差异表达的miRNAs:gga-miR-155、gga-miR-1416-5p、gga-miR-19a-3p和gga-miR-19b-3p;通过生物学软件预测的1 114个靶基因在14条通路中显著富集，其中有5种免疫相关通路，包括MAPK信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路、Wnt信号通路、胰岛素信号通路和Jak-STAT信号通路。

病原感染鸡后，miRNAs及其功能靶点会随时间的改变发生动态的变化。Wang等[50]通过实时荧光定量PCR分析了空肠弯曲菌感染后4、8、12、16、20和24 h鸡盲肠miRNAs与靶基因的表达情况，结果发现，gga-miR-1416-5p在感染后8 h表达显著上调，在20 h表达显著下调；gga-miR-30b和gga-miR-30c表达模式一致，在感染后8 h表达显著上调，24 h表达显著下调。表明gga-miR-30家族在抗菌感染中发挥重要作用，可能协同抑制空肠弯曲杆菌的增殖。此外，SOCS3在感染后8 h的调控方向与gga-miR-30b、gga-miR-30c、gga-miR-148a、gga-miR-1416-5p相反，表明SOCS3是这些miRNAs的潜在靶基因。

4 球虫感染后鸡体miRNAs的调控

由于在寄生虫方面仅有球虫与鸡体miRNAs相互作用的研究报道，所以作者仅对球虫感染后鸡体miRNAs的调控进行了综述。鸡球虫病是由鸡球虫引起的，在鸡群中最常见的寄生虫病，主要引起肠道黏膜的炎症病变，其病变部位差异表达的miRNAs大多参与细胞生长发育、免疫反应等过程。Hong等[6]通过分析坏死性肠炎抗性和敏感品系鸡混合感染巨型艾美耳球虫和C型产气荚膜梭菌后脾脏和肠上皮淋巴细胞(IEL)miRNAs和转录组表达情况。在2个品系脾脏和IEL中发现gga-miR-30b、gga-miR-30c和gga-miR-455-5p与SOCS3转录水平相反;Ⅰ型胶原蛋白α2(COL1A2)转录水平与gga-miR-196和gga-let-7之间，以及可溶性蛋白质(Calbindin-D28k,CALB1)转录水平和gga-miR-130b之间，也观察到类似的负调控;在炎症反应中发挥重要作用的趋化因子配体14(CXCL14)的转录水平只与2个品系脾脏中gga-miR-181a和gga-miR-181b呈负相关。此外，该研究通过对差异表达miRNAs的免疫相关靶基因进行了生物学过程和通路分析，生物学过程主要集中在炎症反应、免疫性疾病或癌症、细胞发育，细胞生长和增殖、血液系统发育和功能、组织形态、体液免疫反应等；显著富集的通路途径包括Ⅰ型糖尿病信号传导、肝纤维化/肝星状细胞活化、辅助T细胞分化、JAK2在激素样细胞因子信号传导中的作用以及IL-6信号传导等。

在球虫感染和炎症期间，肠道中常发生细胞增殖。胆固醇作为细胞膜的基本成分，是细胞增殖和生长所必需的。Sun等[51]通过分析堆型艾美耳球虫感染的十二指肠miRNAs表达谱，发现gga-miR-1699、gga-miR-7477-5p、gga-miR-1451-5p和gga-miR-1608表达显著增加与CYP27A1表达下调；通过双荧光素酶基因报告系统，验证了gga-miR-1608和gga-miR-1699可以靶向CYP27A1基因的3′-UTR;下调的CYP27A1蛋白降低了肠道中胆固醇的代谢水平，这可能是为了促进球虫感染诱导的炎症过程中上皮细胞的增殖。

之后的一项研究似乎支持了Hong等[6]和Sun等[51]的试验结果，即球虫感染后，会激活部分miRNAs参与调控肠道炎症部位的细胞增殖，以应对球虫感染。Liu等[52]通过高通量测序方法鉴定了毒害艾美耳球虫感染后108 h鸡小肠的miRNAs表达情况，鉴定出了35个差异表达的miRNAs，其中16个上调，19个下调;通过生物信息学软件预测差异表达miRNAs的靶基因，对靶基因进行KEGG富集分析，发现了一些与细胞增殖和凋亡相关的通路，如MAPK信号通路和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors，PPARs)信号通路,其中差异表达的gga-miR-1453、gga-miR-1464、gga-miR-34a-5p、novel-100-mature、novel-78-mature的靶基因参与了细胞分化和细胞黏附，表明这些差异表达miRNAs在细胞发育过程中起着重要的调节作用。此外，差异表达的gga-miR-1453、gga-miR-1464、novel-188-mature、novel-271-mature和novel-78-mature预测的靶基因显著集中在Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路和肿瘤坏死因子(TNF)信号通路，这2个通路已被鉴定为宿主抗艾美耳球虫感染的重要途径[53-54]。

宿主miRNAs还可以作为禽病早期的诊断标志物。Tim等[55]利用NextSeq500测序技术，比较了自然感染和亚临床感染巨型和堆型艾美耳球虫的罗斯308肉鸡肠道中miRNAs的表达，发现gga-miR-31-5p仅在临床感染组中差异表达，gga-miR-122-5p在临床和亚临床感染鸡中差异表达，gga-miR-144-5p和gga-miR-205b仅在亚临床感染鸡中差异表达。综合上述研究结果，确定gga-mir-122-5p、gga-miR-144-5p和gga-miR-205b可以用于诊断罗斯308肉鸡的亚临床巨型和堆型艾美耳球虫病。

5 小 结

病原微生物感染鸡体是一个非常复杂的对抗过程，既包括鸡体通过免疫系统清除病原微生物，又包括病原微生物对鸡体的侵害。宿主miRNAs作为一种参与转录后调节的小分子RNA，在病原感染过程中发挥着重要作用。病原侵入后，鸡体miRNAs可以靶向自身的基因来调控鸡体先天免疫信号，也可以靶向病原的基因从而影响病原的吸附、侵入、增殖。但同时，宿主miRNAs的变化不止是有利于鸡体的，也可能是有利于病原的，如IBDV体外感染DF-1，gga-miR-2127和gga-miR-9*可促进IBDV的复制。不同病原微生物感染鸡后，会激活相同的miRNAs调控途径，如gga-miR-32、gga-miR-30b、gga-miR-155和gga-miR-1416等在部分病毒、细菌、寄生虫感染鸡后均被检测为差异表达的miRNAs。此外，宿主miRNAs还可以作为禽病早期的诊断标志物，如gga-miR-122-5p、gga-miR-144-5p和gga-miR-205b可以用于诊断罗斯308肉鸡的亚临床巨型和堆型艾美尔球虫病。目前，对宿主miRNAs的研究还只是冰山一角，一些宿主miRNAs的功能、靶点和作用机制还需要进一步的研究。了解鸡miRNAs在病原感染和致病过程中的作用机制，有助于为鸡病的诊断、治疗和防控提供新的思路和理论依据。