谢文静 江裕 陈溶微 林丹琪 马国斌

【摘要】 目的 探討血清微小RNA223（miR-223）、微小RNA155（miR-155）检验对小儿肺炎支原体感染的诊断价值，为其临床诊治提供参考。

方法 选择福州市第二医院2019年2月至2020年12月收治的100例小儿肺炎支原体感染患儿（观察组）作为研究对象，另取同期体检的50名健康儿童作为对照组。比较两组受试者血清降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）、白细胞介素6（IL-6）及miR-223、miR-155水平，采用Pearson法对血清miR-223、miR-155水平与PCT、CRP、IL-6水平的相关性进行分析，并通过受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-223、miR-155检验对小儿肺炎支原体感染的诊断价值。

结果 观察组患儿血清miR-223、miR-155表达及PCT、CRP、IL-6水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。经Pearson相关性分析，小儿肺炎支原体感染患者血清miR-223、miR-155水平与血清PCT、CRP、IL-6呈正相关（P<0.05）。经ROC分析显示，miR-223+miR-155的AUC为0.926，明显高于miR-223和miR-155（P<0.05）;且miR-223与miR-155的截断值分别为11.29、4.35。

结论 miR-223与miR-155在小儿肺炎支原体感染患者中均呈现高表达，且与血清PCT、CRP、IL-6水平呈正相关，对小儿肺炎支原体感染具有较高的临床诊断价值，初步证实了miR-223与miR-155具有成为预防小儿肺炎支原体肺炎新靶点的潜力。

【关键词】 miR-223;miR-155;小儿肺炎支原体感染;诊断

中图分类号：R563.1+5   文献标志码：A   DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.04.006

Analysis of diagnostic value of serum miR-223 and miR-155 tests in children with Mycoplasma pneumoniae infection

XIE Wenjinga， JIANG Yua， CHEN Rongweia， LIN Danqia， MA Guobinb▲

（a.Department of Laboratory Medicine， b. Department of Cardiology， The Second Hospital of Fuzhou City， Fuzhou 350007， Fujian， China）

【Abstract】 Objective To explore the diagnostic value of serum microRNA223 （miR-223） and microRNA155 （miR-155） tests in children with Mycoplasma pneumoniae infection， so as to provide reference for its clinical diagnosis and treatment.

Methods 100 children with Mycoplasma pneumoniae infection admitted to The Second Hospital of Fuzhou City from February 2019 to December 2020 were selected as research objects （observation group）， and 50 healthy children who came to hospital for physical examination during the same period were selected as control group. And then， the serum levels of procalcitonin （PCT）， C-reactive protein （CRP）， interleukin 6 （IL-6）， miR-223 and miR-155 were compared between the two groups. Pearson method was used to analyze correlation between serum miR-223， miR-155 levels and PCT， CRP， IL-6 levels. And the diagnostic value of serum miR-223 and miR-155 in children with Mycoplasma pneumoniae infection was analyzed by receiver operating characteristic （ROC） curve.

Results The expression of serum miR-223， miR-155 and the levels of PCT， CRP and IL-6 in the observation group were significantly higher than those in the control group， and difference was statistically significant（P<0.05）. Pearson correlation analysis showed that serum miR-223 and miR-155 levels in children with Mycoplasma pneumoniae infection were positively correlated with serum PCT， CRP， and IL-6 （P<0.05）. ROC analysis showed that the AUC of miR-223+miR-155 was 0.926， significantly higher than that of miR-223 and miR-155 （P<0.05）. And the cutoff values of miR-223 and miR-155 were 11.29 and 4.35， respectively.

Conclusion Both miR-223 and miR-155 are highly expressed in children with Mycoplasma pneumoniae infection， and are positively correlated with serum PCT， CRP and IL-6 levels， they have high clinical diagnostic values for children with Mycoplasma pneumoniae infection， which have been preliminarily confirmed to have the potential to become new targets for the prevention of MPP.

【Key words】 miR-223; miR-155; children with Mycoplasma pneumoniae infection; diagnosis

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae）感染引起的小儿肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是一种临床较为常见的获得性肺部感染性疾病，全年均可发病，且发病率最高的季节为秋冬季[1]。调查显示[2]，儿童获得性肺炎中，MPP占比25%左右。主要以厌食、咳嗽、咽痛、发热及畏寒等为临床表现，可致使患儿出现神经损伤、扁桃体发炎及中耳炎等，对患儿身体的生长发育产生影响，严重者甚至可造成死亡。支原体感染是其主要发病机制，支原体是一种介于细菌和病毒之中的微生物，通过对支原体感染情况进行检测，制定相应方案对症治疗具有一定疗效[3]。目前临床上主要通过微生物培养和血清学检查对疾病进行诊断，虽方便快捷，但准确率仍未达到预期。微小RNA是一种长度在20～24 nt的内源性非编码单链RNA，其通过对特异性mRNA分子进行降解或者抑制，从而对基因转录后调控进行介导，在细胞多种生物学进程中发挥重要作用，与诸多疾病的发生发展关系密切。近年来有研究显示[4～5]，MPP患儿体内存在部分miRNA的异常表达，基因组学检测结果也间接证实了miRNA异常表达有可能作为MPP诊断的潜在标志物。故探讨血清微小RNA223（miR-223）、微小RNA155（miR-155）检验对小儿肺炎支原体感染的诊断价值具有重要意义，可为其临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2019年2月至2020年12月收治的100例小儿肺炎支原体感染患儿作为研究对象，另取同期来我院体检的50名健康儿童作为对照组。纳入标准：①观察组符合《儿童肺炎支原体肺炎诊治专家共识（2015 版）》中关于MPP的诊断标准[6];②无心包炎、心肌炎及哮喘等相关炎性疾病者;③入院前未进行大环内酯类抗生素或者类固醇激素治疗者;④临床资料完整者;⑤研究经本院伦理学委员会批准实施（180612）;⑥患儿家属同意并签署知情协议书者。排除标准：①合并严重智力障碍或者精神疾病者;②合并肺部器质性病变及内外科其他严重疾病者;③合并先天性心脏病、支气管发育不良等先天性疾病;④合并败血病、吸入性肺炎者;⑤细菌、病毒及衣原体等呼吸系统疾病;⑥依从性差，中途退出者。

对照组男35人，女15人，年龄2～8岁，平均（4.36±0.26）岁;观察组男68例，女32例，年龄2～9歲，平均（4.51±0.24）岁，病程（2.76±0.35）d，春季38例，夏季6例，秋季40例，冬季16例。两组受试者在年龄、性别等一般资料方面差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 血清PCT、CRP、IL-6水平

抽取两组受试者清晨5 mL的空腹静脉血，离心机（LB-3000型号，江苏克莱斯克生物技术有限公司）在3000 r/min的条件下离心15min，取上清-75℃条件下冰箱保存，待用。采用免疫比浊法对血清C反应蛋白（CRP）水平进行测定;通过酶标仪（ST-380型，上海科华实验系统有限公司），采用酶联免疫吸附法对血清白细胞介素6（IL-6）水平进行测定;通过全自动荧光免疫分析仪（DISKFLU，四川微康朴澜医疗科技有限责任公司）对血清降钙素原（PCT）水平进行测定，试剂盒均购于武汉赛培生物科技有限公司，具体操作方法严格按照说明书执行。

1.2.2 血清miR-223、miR-155水平

采用Trizol试剂（货号MN562J2，美国Sigma公司）对患儿的血清总RNA进行提取，RNA的纯度和浓度采用分光光度计（UV3672，美国Sigma公司）进行测定，RNA完整性采用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检验。之后以RNA为模板，通过PrimeScript RT reagent试剂盒（ND6527J，北京中衫金桥公司）进行逆转录反应，具体操作按照说明书执行。以cDNA为模板，通过SYBR Premix ExTaq试剂盒（N5643MJ，美国Sigma公司）进行PCR反应检验。反应体系20 μL：4.0 μL 的ddH2O，2.0 μL的上下游引物，2.0 μL的cDNA模板（25 ng/μL），10.0 μL的2UltraSYBR mixture。反应条件：95℃条件下，预变性30 s;95℃条件下，变性5 s;60℃条件下，退火30 s;72℃条件下，延伸20 s;共进行40个循环。引物由百奥迈科生物技术公司设计提供，U6作为miR-155、miR-223的内参基因，具体见表1。之后血清中的miR-155、miR-223相对表达水平采用2-△△Ct法进行测定。

1.3 统计学方法

应用SPSS 22.0进行数据分析，服从正态分布的计量资料描述为（±s），比较行配对t检验（组内比较）或成组t检验（组间比较）;计数资料以例数描述，比较行χ2检验;采用Pearson法对血清miR-223、miR-155水平与PCT、CRP、IL-6水平的相关性进行分析，并通过受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-223、miR-155检验对小儿肺炎支原体感染的诊断价值，检验水准：α=0.05，双侧检验。

2 结  果

2.1 两组受试者血清miR-223、miR-155水平

观察组患儿血清miR-223、miR-155表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.001）。见表2。

2.2 两组受试者血清PCT、CRP、IL-6水平

观察组患儿血清PCT、CRP、IL-6水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.001）。见表3。

2.3 肺炎支原体感染患儿血清miR-223、miR-155水平与PCT、CRP、IL-6的相关性

经Pearson 相关性分析，肺炎支原体感染患儿血清miR-223、miR-155水平与血清PCT、CRP、IL-6呈正相关（P<0.05）。见表4。

2.4 血清 miR-223 与 miR-155 对小儿肺炎支原体感染的诊断价值

经ROC分析显示，miR-223+miR-155的AUC为0.926，明显高于miR-223和miR-155（P<0.05）。见表5、图1。且此时miR-223与miR-155的截斷值分别为11.29、4.35，并以此截断值作为诊断MPP的标准，高于上述截断值即为阳性。

3 讨  论

近些年随着对MPP研究的不断深入，越来越多的研究证实细胞免疫及体液免疫中存在大量的炎症因子，对MPP的发病起到重要介导作用[7～8]。而患儿因自身免疫系统防疫能力相对较差，炎症因子在支原体感染过程中的炎症反应和免疫发生机制仍存在一定程度的争议，需要进一步探讨。而对于PCT、CRP、IL-6值及相关性分析结果，这可能是由于miRNA对介质及炎症因子表达均具有一定程度的调控作用。血清miR-223、miR-155是近年新发现的微小RNA，可通过对下游PCT、CRP、IL-6等炎症因子的表达产生影响，从而对相应疾病的发生发展具有促进作用。田伟等人[9]研究证实，miR-155可参与体内免疫应答反应，在T淋巴细胞免疫抑制反应中作用显著，对肺炎的发生发展具有促进效果。LI等[10]研究显示，在MPP血清中miR-223、miR-155也呈现高表达，是造成MPP发病的独立危险因素。以上研究均与本研究结果相符。

miRNA靶向主要是通过miRNA5端与mRNA的非翻译区和编码区内的位点之间特异性碱基对相互作用来完成的[11]。且miRNA在维持人体正常免疫稳态、正常功能以及免疫细胞谱系的成熟、分化及发生中扮演着重要的角色。有研究显示[12]，miR-223、miR-155在支原体感染肺炎模型小鼠、肺炎继发脓毒症患者中均具有较高的诊断价值。故而推测miR-223、miR-155的异常表达可致使小儿肺炎支原体感染的发生。而本研究对肺炎支原体感染患儿miR-223、miR-155水平表达进行探讨，并与微生物培养诊断相比较，以期寻找快速、有效、准确的MPP诊断新方法。颜保松等[13]研究显示，与健康人相比，肺结核患者的血清miR-223水平相对较高，且对肺结核具有显著的诊断价值。文中血清miR-223水平结果，提示miR-223可能与MPP的发生发展存在一定相关性。这主要是由于miR-223可以对下游的IL-10、IL-6等炎症因子表达产生影响，从而对MPP疾病的发生发展具有一定的促进作用。而文中血清miR-155水平结果也验证了miR-155在MPP发病中的作用。这可能是由于miR-155可通过对中性粒细胞趋化因子（CCL3、CXCL2）以及IL-6的表达进行调控，从而诱导中性粒细胞趋化，进而造成肺部损伤。另外，其还可通过对巨噬细胞内核因子κB活性进行增强，提高相关促炎症因子的表达，进而造成MPP疾病的发生。而经ROC分析显示，miR-223与miR-155的截断值分别为11.29、4.35，且联合的阳性诊断率明显高于微生物培养检测，提示miR-223+miR-155对MPP具有更高的诊断价值，miR-223与miR-155可能成为预防和治疗MPP的潜在靶点和标志物。

综上所述，miR-223与miR-155在小儿肺炎支原体感染患者中均呈现高表达，且与血清PCT、CRP、IL-6水平呈正相关，对小儿肺炎支原体感染具有较高的临床诊断价值，初步证实了miR-223与miR-155具有成为预防小儿肺炎支原体肺炎新靶点的潜力。

参 考 文 献

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（收稿日期：2021-12-28 修回日期：2022-03-01）

（编辑：潘明志）