杨 静，曹 静，赵亚宁，贾 健，杨永康

(陕西中医药大学第二附属医院产一科，陕西 咸阳 712000)

子痫前期(preeclampsia，PE)指妊娠20周后出现新发高血压、蛋白尿或其他终末器官损害，是妊娠过程中的主要并发症，全球约4%～5%的妊娠会受其影响，可导致胎儿早产和母亲长期心血管疾病，给母子健康带来巨大负担[1,2]。目前，关于PE的研究取得了重大进展，但其潜在发病机制仍不清楚。子痫前期涉及多种遗传、结构、血管生成和代谢途径，包括螺旋动脉重塑、胎盘氧合、母体-胎儿界面的氧化还原和免疫耐受、血管生成和抗血管生成因子的平衡等[3]。对于PE的预防和治疗仍需要寻找新的生物标志物，以提高诊疗的便捷性和准确性。微小RNA(micorRNA，miRNA)是一类短链非编码RNA分子，长度约为22个核苷酸，参与基因表达的转录后调节[4]。研究表明，体内miRNA机制失活可导致胎盘畸形[5]，体外胎盘外植体中敲除miRNA会导致滋养层细胞异常增殖[6]，可见miRNA在胎盘发育中起关键作用。此外，灵长类动物特异性19号染色体miRNA簇的成员在PE患者中表达显著失调，是PE的潜在生物标志物[7]。分析比较PE患者的miRNA表达谱，可以评估miRNA作为PE治疗新方案的潜在靶点。因此，本研究旨在分析PE患者和正常妊娠妇女血液和胎盘组织中miR-217的表达差异，评价其临床意义，为临床诊疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2020年1月至2021年12月在我院择期剖宫产结束分娩的32例PE患者和24例正常妊娠者为研究对象。纳入标准：未进入产程；剖宫产结束分娩；无妊娠合并症；PE的诊断参照子痫诊断标准[8]。排除标准：合并糖尿病、慢性高血压等基础疾病；合并贫血、血小板降低或其他血液系统疾病；既往心脑血管病史等。

1.2 研究方法

1.2.1血清收集

清晨空腹采集所有受试者外周静脉血4mL，室温自然凝固30min后，3 000r/min快速离心10min取上层血清待检测。

1.2.2胎盘组织收集

正常妊娠妇女和PE患者胎盘娩出后5min内，在其母体面中央避开钙化区，剪去1cm×1cm×1cm的组织块，生理盐水吸去血迹，吸干表面水分，将组织块剪碎放入冻存管中，-80℃保存。所有器具及耗材均经过高温烘干处理，冻存管用0.1‰ DEPC水浸泡后放入烤箱，去除RNA酶。

1.2.3血压测量

利用医院电子血压计(OMRONHEM-7012)准确测量受试者的收缩压和舒张压，每天早上九点安静状态下测量并详细记录。

1.2.4miR-217检测

采用半定量逆转录-聚合酶链技术(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)检测研究对象血清和胎盘组织中的miR-217表达。采用RNA提取试剂盒(SolarBio，中国北京)提取血清和胎盘组织中的总RNA，逆转录试剂盒(Thermo Fisher Scientific，美国)将RNA逆转录为cDNA。采用qRT-PCR仪(Bio-Rad，美国)对miR-217表达水平进行分析，包括40个循环，95℃ 30s，95℃ 5s以及60℃ 30 s。单基因相对表达水平用2-△△CT法计算。以U6为内部参照，引物信息为miR-217正向F：5′-TCGGCAGGGTACTGCATCAGGAA-3，反向R：5′-CT-CAACTGGTGTCGTGGA-3′；U6正向F：5′-CTC-GCTTCGGCAGCACA-3′，反向R：5′-AACGCTTCACGAATTTG-3′

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 两组患者一般临床资料的比较

两组患者的年龄和孕周间的差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。子痫前期组患者的收缩压、舒张压、尿蛋白平均含量均显著高于正常妊娠组，差异有统计学意义(t值分别是2.193、3.932、4.024，P<0.05)，详见表1。

表1 两组患者一般临床资料的比较

2.2 两组血清和胎盘组织中miR-217的表达水平

利用RT-PCR法分析两组患者血清和胎盘组织中miR-217相对表达量，结果显示子痫前期组患者血清和胎盘组织中miR-217相对表达水平都显著高于正常妊娠组，差异有统计学意义(t值分别是3.225、2.813，P<0.05)，见图1。这表明miR-217在子痫前期组表达上调，可能与疾病进展有关。

图1 两组患者血清和胎盘组织中miR-217相对表达量

2.3 子痫前期患者血清miR-217表达量与收缩压和舒张压的相关性分析

相关性分析显示(图2)，子痫前期患者血清miR-217相对表达水平与收缩压和舒张压均呈正相关(r值分别是0.703和0.720，P<0.01)，表明子痫前期患者血清中miR-217相对表达水平与疾病严重程度呈正相关。

图2 子痫前期患者血清中miR-217相对表达量与收缩压和舒张压的相关性

2.4 子痫前期患者胎盘组织中miR-217表达量与收缩压和舒张压的相关性分析

相关性分析显示(图3)，子痫前期患者胎盘组织中miR-217相对表达水平与收缩压和舒张压均呈正相关(r值分别是0.731和0.822，P<0.05)。相比血清miR-217，患者胎盘组织中miR-217相对表达水平与疾病严重程度的相关性更大。

图3 子痫前期患者胎盘组织中miR-217相对表达量与收缩压和舒张压的相关性

3 讨论

3.1 MiR-217表达水平与子痫前期患者的疾病严重程度呈正相关

子痫前期是一种复杂的综合征，每年造成约16%～18%的孕产妇死亡和约40%的胎儿和新生儿死亡[1]。子痫前期是一种全身性疾病，伴有全身内皮功能障碍和多器官衰竭，影响母婴健康。孕妇血压是诊断子痫前期及其严重性的重要参考，因此本研究将舒张压和收缩压作为子痫前期诊断参考，评估患者血清和胎盘组织中miR-217表达水平与血压相关性。研究发现，miR-217在子痫前期患者血清和胎盘组织中的相对表达水平较高，且与疾病严重程度呈正相关。

3.2 MiRNA与子痫前期的相关研究

MiRNA不翻译蛋白质，但可以调节基因表达，miRNA调节网络在许多病理生理过程中发挥重要作用，如细胞增殖和黏附、血管生成和免疫细胞发育等[9]。相关研究表明，妊娠期间miRNA可能影响和调节滋养层细胞的侵袭和迁移、调节血管生成和抗血管生成因子的表达以及间充质干细胞功能[10]。此外，心脑血管疾病相关的miRNAs在子痫前期者的妊娠中失调，可能在心脏对妊娠和妊娠高血压的适应中发挥关键作用[11]。Huang等人发现，与健康对照组相比，miRNA-181a-5p在PE者的胎盘中过度表达，且可通过抑制金属蛋白酶2、9的活性触发抗增殖，抑制细胞周期进展，诱导凋亡，抑制滋养层侵袭[12]。Brkic等人研究了miRNA-218-5p在PE发生中的作用，发现其在绒毛外滋养层中高表达，而在PE胎盘中显著下调，认为miRNA-218-5p的下调可能促进PE的发生[13]。Hu等人报道，miRNA-144-3p在PE胎盘中的表达降低，且与环氧化酶-2(cyclooxygenase-2，Cox-2)的表达呈负相关；Cox-2作为前列腺素合成的限速酶，可能在PE的发生中起重要作用[14]。综上，miRNA在PE进展中的作用已有一定研究基础，但尚未见miR-217与PE的相关报道。

3.3 MiR-217在心血管疾病发展中的作用

MiR-217可促进血管内皮功能障碍，增加血压，加剧动脉粥样硬化。Yebenes等人研究发现，miR-217的过度表达可诱导动脉粥样硬化载脂蛋白E中的一氧化氮生成降低，加剧大鼠的动脉粥样硬化程度；内皮细胞中miR-217表达增加可导致冠状动脉疾病发展和左心室心功能改变，诱导心脏舒张和收缩功能障碍[15]。多巴胺D2受体(dopamine D2 receptor，D2R)表达降低与高血压有关，而miR-217的表达直接受D2R的调控[16]。鉴于上述研究成果，本研究探索了miR-217在PE患者血清和胎盘组织中的表达水平与疾病相关性。结果显示，PE患者血清和胎盘组织中miR-217相对表达水平均显著高于正常妊娠组，说明miR-217的表达上调可能与PE疾病有关。此外，PE患者血清和胎盘组织中miR-217相对表达水平与其收缩压和舒张压均呈正相关，提示miR-217相对表达水平可能与疾病严重程度相关。

本研究不足之处主要为样本量偏小，且前期研究仅发现miR-217在子痫前期患者胎盘组织和血清中表达上调，并未对其作用分子机制进行深入研究，后续研究将进一步重点探讨。综上所述，miR-217在PE患者胎盘组织和血清中呈高表达，且与收缩压和舒张压呈正相关。