聂影

摘要：目的：通过制备新生Sprague-Dawley大鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic ischemic brain damage，HIBD）的动物模型。测定HIBD在不同时间点脑组织中NLRP6，Cleaved-caspase-1，IL-18，IL-1β的表达。方法：选择7日龄SD大鼠120只作为研究对象，将其随机分为3组，每组40只，空白组、假手术组、缺氧缺血性脑损伤组（HIBD组），在第6h、24h、48h、72h、7d取材，建立动物模型，行免疫组化分析、蛋白免疫印迹、PCR检测。结果：空白组、假手术组无阳性IL-1β、IL-18蛋白表达，Cleaved-caspase-1表达水平低，NLRP6、Caspase-1中的mRNA水平最低。HIBD组IL-1β、IL-18蛋白表达水平增加，72h最为显著，HIBD组Cleaved-caspase-1表达水平逐渐增加，72h最为显著，HIBD组NLRP6、Caspase-1的mRNA处理水平也开始显著提高，72小时达到高峰，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：7日龄新生儿SD大鼠模型建立成功且有实验意义。随着时间损伤逐渐加重，与NLRP6、Cleaved-caspase1、IL-1β、IL-18的表达上调存在相关性。

1 材料和方法

1.1 材料

选择7日龄SD大鼠120只作为研究对象，将其随机分为3组，每组40只，空白组、假手术组、缺氧缺血性脑损伤组（HIBD组），所有大鼠体重范围在（200±20）g，由长春市亿斯实验动物科技公司生产供应。佳木斯大学实验动物研究中心饲养，120只大鼠无性别差异，体重在（13±2）g范围内。试剂及器械均有佳木斯大学动物实验中心提供。

1.2 方法

动物模型建立：HI组： 参照改良Rice-Vannuncci法建立模型，具体流程包括：行左侧颈总动脉结扎后，92 % N+8 % O混合气体缺氧处理2.5 h，建立缺氧缺血脑损伤模型;Sham组：仅将左侧颈总动脉钝性分离，不给予结扎，不行缺氧缺血处理;Control组：不做任何处理。HE染色，尼式染色，免疫组化分析，WesternBlot和荧光定量PCR检测组脑组织标本采集均需在冰上操作，随后将其置入-80℃的低温冷冻冰箱贮存备用。

1.3 统计学处理

应用统计学软件SPSS21.0分析实验数据，计数资料采取卡方检验，用率（n%）表示，计量资料行t检验，用（均数±标准差）表达，若P<0.05，证明统计学意义存在。……