蓝x洋

二代测序（Next-generation sequencing， NGS）又称为高通量测序是一种基因测序技术，通过可逆终止末端测序法把基因序列上的核苷酸一个一个地测出来。与一代测序相比，可以一次对几十万到几百万条DNA片段进行并行测序，降低了测序成本并缩短了检测时间。

临床上，肿瘤患者多需要做此项检查。因为肿瘤是一种多基因疾病，基因变异在肿瘤的发生发展、治疗指导中的作用已经毋庸置疑。而与传统检测方法相比，二代测序可同时对多基因多位点进行突变、重排及扩增的检测，避免浪费样本、节约检测时间及检测费用；可检测到罕见突变位点和罕见融合，避免失去精准治疗机会；可检测肿瘤突变负荷（TMB）和微卫星不稳定性（MSI），帮助筛选免疫治疗潜在获益的患者；可检测同源重组修复缺陷（HRD）状态，筛选出更多PARP抑制剂可能获益的患者。

做过二代测序检测的患者常问医生：这报告为啥要等这么久呢？这还得从检测流程说起。二代测序要经历3个主要步骤，分别是二代测序实验操作、测序仪运行及生信分析和数据的人工校验及解读。二代测序检测时间的长短受检测基因的数目、测序平台的不同及上机样本的数目影响。

从接收样本到下机测序数据的产生需要经历样本接收及质控、核酸提取、预文库构建、终文库构建、文库定量和上机6个步骤，完成检测通常需要约4个工作日。

2.测序仪运行及生信分析部分

从样本上机后到下机数据的产生，需要经历约26～28个小时，从下机测序数据到突变列表的生成需要经历质控、比对参考基因组、排序去重、突变检出等分析过程，这就需要约8～10小时。因此，从数据的产生到数据的分析完成需要约2个工作日。

这一步骤主要经历4个过程，质控评估、体系变异复核、胚系变异复核及用药解读复核，整个过程需要经历约1～2个工作日。

最后，报告还需要经副高职称以上的有经验的病理医师对结果进行审核，该过程需要约1个工作日。因此，二代测序检测从样本接收到报告的发出，一般需要约8～9个工作日。

影响二代测序报告时间还有一个很重要因素，就是测序轮次。因为测序仪每次检测样本必须在8～12个样本，如果不够8个样本，即使文库已经构建完成也需要等待其他样本一起上机，而超过12个样本则需要等待下一次上机，那么最长等待时间约为3个工作日。

此外，若在检测过程中遇到样本质量差、肿瘤细胞比例不足、检测需要重新上机、检测结果需要验证、有疑问样本需要与病理医生或临床医生沟通等问题，也会影响报告的发出时间。遇到这些情况，通常我们会及时和临床医生或患者及其家属沟通。