刘春辉　刘兆润　董丽　丁宁

【摘要】 目的：探討一氧化氮合酶（NOS）、环氧合酶-2（COX-2）在不同类型胃食管返流病中的表达水平与意义。方法：回顾性分析2017年1月-2020年1月鞍钢集团公司总医院收治的200例胃食管返流病患者的临床资料。根据患者的诊断结果，将全部胃食管返流病患者分为三组，非糜烂性胃食管返流病为A组（n=73），返流性食管炎为B组（n=68），Barrett食管为C组（n=59）。选择同时间段内在医院进行健康体检的患者80例作为对照组。比较四组患者的NOS mRNA和COX-2 mRNA表达水平。分析全部患者的NOS mRNA和COX-2 mRNA之间的相关性。分析NOS mRNA和COX-2 mRNA对非糜烂性胃食管返流病的诊断价值。结果：四组NOS mRNA和COX-2 mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（P<0.05）。两种指标的数值均为C组>B组>A组>对照组（P<0.05）。全部患者的NOS mRNA与COX-2 mRNA呈正相关（r=0.500，P<0.05）。利用NOS mRNA和COX-2 mRNA对非糜烂性胃食管返流病患者进行诊断，最佳截断值分别为1.38和1.56，AUC分别为0.794和0.838，灵敏度分别为76.27%和64.41%，特异度分别为73.76%和88.65%，约登指数为0.500和0.531。结论：NOS和COX-2在胃食管返流病不同亚型的患者人群中均呈现明显的高表达状态，其中以Barrett食管患者的表达水平最高，其次为返流性食管炎患者，非糜烂性胃食管返流病患者的表达水平最低。NOS和COX-2对非糜烂性胃食管返流病的诊断具有一定的价值。

【关键词】 胃食管返流病 消化系统 非糜烂性胃食管返流病 返流性食管炎 胃镜

Expression Levels and Significance of NOS and COX-2 in Different Types of Gastroesophageal Reflux Disease/LIU Chunhui， LIU Zhaorun， DONG Li， DING Ning. //Medical Innovation of China， 2022， 19（07）： 0-021

[Abstract] Objective： To explore the expression levels and significance of nitric oxide synthase （NOS） and cyclooxygenase-2 （COX-2） in different types of gastroesophageal reflux disease. Method： The clinical data of 200 patients with gastroesophageal reflux disease admitted to General Hospital of Anshan Iron and Steel Group Corporation from January 2017 to January 2020 were retrospectively analyzed. According to the diagnosis results of patients， all patients with gastroesophageal reflux disease were divided into three groups， non-erosive gastroesophageal reflux disease was group A （n=73）， reflux esophagitis was group B （n=68）， and Barretts esophagus was group C （n=59）. 80 patients who underwent physical examination in the same period were selected as the control group. The expression levels of NOS mRNA and COX-2 mRNA in four groups were compared. The correlation between NOS mRNA and COX-2 mRNA in all patients was analyzed. The diagnostic value of NOS mRNA and COX-2 mRNA in non-erosive gastroesophageal reflux disease were analyzed. Result： The expression levels of NOS mRNA and COX-2 mRNA in the four groups were significantly different （P<0.05）. The values of the two indexes were group C>group B>group A>control group （P<0.05）. NOS mRNA was positively correlated with COX-2

mRNA in all patients （r=0.500， P<0.05）. The optimal cut-off values were 1.38 and 1.56， AUC was 0.794 and 0.838， sensitivity was 76.27% and 64.41%， specificity was 73.76% and 88.65%， the Yoden index was 0.500 and 0.531 respectively， with NOS and COX-2 mRNA for the diagnosis of patients with non-erosive gastroesophageal reflux disease. Conclusion： The expression levels of NOS and COX-2 in patients with different subtypes of gastroesophageal reflux disease are significantly highly， with the highest expression level in patient with Barretts esophagus， follow by patients with reflux esophagitis and the lowest expression level in patients with non-erosive gastroesophageal reflux disease. NOS and COX-2 are valuable in the diagnosis of non-erosive gastroesophageal reflux disease.gzslib202204021619

[Key words] Gastroesophageal reflux disease Digestive system Non-erosive gastroesophageal reflux disease Reflux esophagitis Gastroscope

First-authors address： General Hospital of Anshan Iron and Steel Group Corporation， Anshan 114002， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.07.005

胃食管返流病是臨床工作中较为高发的一类消化系统疾病，研究结果显示，该疾病主要分为三个常见的亚型：非糜烂性胃食管返流病、返流性食管炎、Barrett食管[1-2]。三种亚型的独立性很强，治疗策略及疾病的预后也存在较大的差异[3-5]。近些年以来，随着病理生理学研究深度的增加及相关临床工作的广泛开展，针对胃食管返流病的研究深度也在持续增加，对于该疾病诊断的准确程度及治疗的效果，较以往出现很明显的改善[6]。但由于胃食管返流病的病因多样，发病机制十分复杂，且不同亚型的疾病之间呈现出较大差异的病理学表现。目前在胃食管返流病的诊断过程中，返流性食管炎及Barrett食管能够借助胃镜采样后进行病理检查确诊，但非糜烂性胃食管返流病即使在胃镜下仍然无法捕捉到食管损伤的客观证据，其诊断依然需依靠临床症状进行鉴别[7-8]。近些年的研究结果显示，一氧化氮合酶（nitric oxide synthetase，NOS）及环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）可能参与到了胃食管返流病的病变过程中，但关于两种指标在不同亚型胃食管返流病患者表达情况差异的研究目前较少[9-10]。本研究收集部分患者的数据资料进行回顾性分析，探讨NOS、COX-2在不同类型胃食管返流病中的表达与意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2017年1月-2020年1月鞍钢集团公司总医院收治的200例胃食管返流病患者的临床资料。纳入标准：（1）因确诊为胃食管返流病入院接受治疗，诊断依据参考文献[11]中华医学会消化病学分会颁布的《2014年中国胃食管反流病专家共识意见》，患者经过食管pH值监测及病理学检查最终确诊;（2）年龄≥18岁，采集标本之前未接受可能对结果产生影响的治疗;（3）相关数据可完整捕捉以备分析。排除标准：（1）有腹部手术史或合并幽门螺杆菌感染;（2）入院7 d之内有呼吸道感染或处于其他急性感染期内;（3）合并恶性肿瘤等严重疾病;（4）消化道内出现溃疡或出血等疾病需合并治疗。根据患者的诊断结果，将全部胃食管返流病患者分为3组，其中非糜烂性胃食管返流病为A组（n=73），返流性食管炎为B组（n=68），Barrett食管为C组（n=59），另外选择同时间段内在医院进行健康体检的80例人员作为对照组。本研究已经通过医院所属医学伦理委员会的审批，入组人员均自愿接受本研究所提供的干预方案，患者及家属均签署相应的知情同意书。

1.2 方法 全部患者均接受内镜检查。要求接受内镜检查前14 d停止使用抑制胃酸，抑制NOS等的相关药物。内镜检查前12 h患者常规禁食禁水。利用电子内镜完成检查，记录胃内的病理变化表现，依据所见情况完成患者的分组。若内镜检查结果显示为返流性食管炎或Barrett食管，则需在病变部位进行活检取样，采集1、2块组织。若内镜下显示可能为非糜烂性胃食管返流病或者正常，则需在食管远端鳞状上皮同柱状上皮交界处上方约2 cm处采集1、2块组织。将采集组织放置在-80 ℃液氮中冷藏待检。

1.3 观察指标与判定标准 （1）比较四组NOS mRNA和COX-2 mRNA表达水平。利用实时荧光定量PCR法完成NOS mRNA和COX-2 mRNA表达水平测定，采取2^-ΔΔCt法对NOS mRNA和COX-2 mRNA在组织中的相对表达量完成计算。试剂盒均购自上海科奥生物技术有限公司，全部操作均严格按照说明书完成。（2）分析全部患者的NOS mRNA和COX-2 mRNA之间的相关性。（3）分析NOS mRNA和COX-2 mRNA对非糜烂性胃食管返流病的诊断价值。

1.4 统计学处理 采用SPSS 24.0统计软件进行数据分析，计量资料采用（x±s）表示，两组比较采用t检验，四组比较采用方差分析（ANOVA）;计数资料采用率（%）表示，比较采用χ²检验;变量间相关性采用Pearson相关进行分析;利用受试者工作特征（ROC）曲线的方法对诊断价值进行计算。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 四组一般资料比较 四组一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

2.2 四组NOS mRNA和COX-2 mRNA表达水平比较 四组NOS mRNA和COX-2 mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。两种指标的数值均为C组>B组>A组>对照组，组间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 全部患者的NOS mRNA和COX-2 mRNA之间的相关性 全部患者的NOS mRNA和COX-2 mRNA之间呈正相关（r=0.500，P<0.05）。

2.4 分析NOS mRNA和COX-2 mRNA对非糜烂性胃食管返流病的诊断价值 利用NOS mRNA和COX-2 mRNA对非糜烂性胃食管返流病患者进行诊断，最佳截断值分别为1.38和1.56，AUC分别为0.794和0.838，灵敏度分别为76.27%和64.41%，特异度分别为73.76%和88.65%，约登指数为0.500和0.531。见表3、图1。gzslib202204021619

3 讨论

罹患胃食管返流病可以造成患者个体的胃部灼热感，胸痛，反酸及吞咽疼痛感，该种疾病不仅对人体的消化系统产生损伤，而且也会破坏呼吸系统[12-13]。目前已经可以证明的是，其中的亚型之一，返流性食管炎可持续进展为食管癌[14]。在传统上一般认为该种病变的出现是因为胃内容物因故返流进入食管之后，导致人体食管腔内接触胃液过度，诱发食管黏膜损伤而发病，但是该理论在动物模型的研究结果中未得到证明[15-16]。近些年逐渐倾向于由炎性介质所介导的食管上皮局部炎症反应，才是导致胃食管返流病发病的核心病因[17]。

NOS是人体内介导一氧化氮生成的酶之一，而一氧化氮为人体肠道系统的非胆碱能神经和非肾上腺素能神经系统内主要的抑制性神经递质，对于肠胃动力具有明显的调节功效[18-19]。从研究所得到的结果可见，三组诊断为胃食管返流病患者的NOS mRNA水平明显高于对照组，而不同病变亚型之间的NOS mRNA水平也存在明显的数据差异。以非糜烂性胃食管返流病的数值最低。该结果提示，NOS可能在食管下括约肌神经支配中具有抑制性神经元的调节功效，体内水平异常后诱发食管平滑肌功能紊乱，加重了胃食管返流病的严重程度。可能是NOS的表达水平增高导致体内NO含量上升，NO能够调节食管括约肌的张力，NO水平上升可导致括约肌松弛。尤其是Barrett食管患者的胃食管黏膜损伤程度高于其他两个亚型病变的患者，具有黏膜糜烂的表现，所以NOS的表达水平更高，而且Barrett食管的患者具有部分细胞的局部不正常增殖，病变情况更为严重，这也成为该类患者NOS表达水平最高的原因。

COX-2在出现炎症反应的组织中呈现高表达的状态，但是在正常组织或者炎症反应剧烈程度较低的组织中，表达水平极低或根本不表达。作为一种蛋白复合体，COX-2不仅对免疫细胞具有显著的趋化作用，其合成产物前列腺素E2同组织炎症反应相关性极强，而且能够使神经纤维的阈电位水平下降。本研究中的数据结果显示，胃食管返流病患者的COX-2表达水平明显高于健康人群，同NOS的数据十分类似，COX-2也是在Barrett食管患者的表达水平最高，而非糜烂性胃食管返流病患者的表达水平最低。推测其可能的原因如下：COX-2能够定向趋化胃食管黏膜的白细胞并诱导免疫细胞进入到发生感染的区域内，合成前列腺素E2，发挥出促炎症反应的功效，导致局部炎症组织损伤发生，诱发细胞的异常增殖。而Barrett食管患者的COX-2表达水平高，因为该类患者的病变严重程度最高，甚至具有进展为癌变的可能。而返流性食管炎同非糜烂性胃食管返流病的主要区别为是否发生胃食管黏膜的糜烂，返流性食管炎的胃食管黏膜出现糜烂，炎症反应程度高，因此其COX-2的表达水平也相应较高。

研究中对于COX-2及NOS之间的相关性进行分析，结果呈正相关。提示两种因子共同参加食管黏膜的炎症反应及食管下括约肌功能的调节。非糜烂性胃食管返流病属于较为常见的胃食管返流病，但是在内镜检查下不会表现出食管的损伤，所以在临床诊断方面具有相当的难度，本研究中利用NOS及COX-2的数据，采用ROC曲线的方法进行诊断价值的计算，结果显示两种指标均具有一定的诊断价值。但单独指标的诊断均具有一定的错误率，因此建议采用联合诊断的方法，提升诊断的准确程度。

综上所述，NOS和COX-2在胃食管返流病不同亚型的患者人群中均呈现明显的高表达状态，以Barrett食管患者的表达水平最高，返流性食管炎患者的表达水平第二，非糜烂性胃食管返流病患者的表达水平最低。NOS和COX-2对非糜烂性胃食管返流病的诊断具有一定的价值。

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