廖诗为 王春阳

1 天津市环湖医院神经康复科 300350； 2 天津医科大学总医院神经病学研究所

视神经炎谱系病变属于中枢神经系统免疫炎性病变，主要临床特征为长节段横贯性脊髓炎、视神经炎、颅内典型特征等，常反复发作[1]。视神经炎谱系病变的特异性抗体为水通道蛋白4抗体，在病理机制中起到关键性作用。血脑屏障中的星形胶质细胞足突成分AQP4特异性结核水通道蛋白4抗体，可引发星形胶质细胞严重受损，大量丢失标志性成分纤维酸性蛋白，出现视神经炎谱系病变根本性病理损害，形成星形胶质细胞病[2]。调节性B细胞可间接反映脑组织受损程度。本研究选择100例在天津医科大学总医院接受诊治的视神经脊髓炎谱系病变患者，观察其外周血肿CD19+CD24highCD38high调节性B细胞和相关细胞因子的改变，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选择2017年9月—2020年10月在天津医科大学总医院接受诊治的视神经脊髓炎谱系病变患者100例作为研究组，纳入标准：符合世界卫生组织制定的视神经炎谱系病变的诊断标准[3]；经临床实验室资料、影像学检查、临床特征明确诊断；均为急性期病变，EDSS评分增高>1分，持续时间超过24h无法缓解。排除标准：恶性肿瘤、急性感染性病变、血液系统病变、其他原发性眼部病变、免疫系统病变、肝肾功能异常、颅脑外伤、临床资料缺失、精神疾患、妊娠期及哺乳期女性。其中男20例，女80例，年龄34～68岁，平均年龄(43.6±2.3)岁；同期选择体检健康者100例作为对照组，其中男21例，女79例，年龄34～68岁，平均年龄(43.5±2.4)岁；两组年龄、性别等临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 采集标本：晨起抽取2ml两管空腹静脉血，分别置于EDTA管、柠檬酸钠管内，EDTA管即刻送检，用于调节B细胞监测。柠檬酸钠管在-80℃环境下置存备用，用于监测细胞因子。PCR法监测外周血的TGF-β、IL-10的mRNA指标，严格根据试剂说明书完成，由北京Invitrogen公司合成Real Time PCR的基因引物，样本总RNA提取：RNA的纯度和浓度应用NanoDrop ND-2000分光光度计检测，样本总RNA予以Trizol法提取，cDNA逆转录合成：(1)去除基因组DNA反应：冰上完成反应混合液的配制， 5XgDNA Eraser Buffer 2.0μl，1μg Total RNA，1.0μl gDNA Eraser，添加RNase Free H2O，总体积为10μl，42℃进行2min孵育；(2)反转录反应：以上反应液加入4.0μl RNase Free H2O，4.0μl 5XPrimeScript Buffer2，1.0μl RT Primer Mix，1.0μl PrimeScript RT Enzyme Mix I，总体积为20μl，37℃孵育15min，放入85℃ 5s，-20℃环境下置存cDNA。PCR监测样本：RT-PCR反应体系分别配制cDNA样品，配制体系为10μl 2XMaster Mix，0.5μl 10μmol的PCR特异引物F、R，加水至18μl总体积，5 000rpm短暂离心；在96-PCR板对应的孔内分别加入cDNA 2μl，混匀，予以PCR反应，30s 95℃，95℃ 5s PCR循环40个；40s 60℃(荧光采集)；构建PCR产物的溶解曲线，缓慢加热至99℃。3个复孔监测样本。流式细胞学监测CD19+CD24highCD38high调节性B细胞指标。

2 结果

2.1 两组外周血调节B细胞及TGF-β、IL-10指标对比 与对照组相比，研究组的CD19+CD24highCD38high调节性B细胞数量及TGF-β、IL-10的mRNA指标显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组外周血调节B细胞及TGF-β、IL-10指标对比

2.2 研究组急性期与非急性期各项指标对比 与研究组非急性期比，研究组急性期的CD19+CD24highCD38high调节性B细胞数量及外周血TGF-β、IL-10的mRNA指标显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 研究组急性期与非急性期各项指标对比

3 讨论

本研究观察视神经脊髓炎谱系病变外周血中CD19+CD24highCD38high调节性B细胞和相关细胞因子的改变及其临床意义，结果显示：与对照组相比，研究组的CD19+CD24highCD38high调节性B细胞数量及外周血TGF-β、IL-10的mRNA指标显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)，与王炜[4]的研究结果大体一致，调节B细胞的主要特点是激活后生成抗体，活化后大量增殖且分化为记忆B细胞亚群及效应B细胞亚群(浆细胞)，浆细胞可分泌特异性抗体，对抗原进行中和执行免疫保护功能，同时可因攻击具有免疫原性的自体组织引发的自身免疫性病变[5-6]。记忆B细胞亚群再次受到刺激后可直接分化、增殖为浆细胞，生成大量抗体，同时B细胞具有分泌各种趋化因子、细胞因子、呈递抗原等多种抗体肺依赖性功能[7-8]；研究发现调节B细胞同时参与了肿瘤、感染性病变、自身免疫系统病变等多种病变的发病过程，可对炎性反应细胞如T细胞、DC细胞的免疫应答进行抑制，同时可诱导活化Treg细胞[9-10]；IL-10是主要的抗炎细胞因子，可经对过度炎性反应进行抑制而调控免疫反应，同时可诱导Th0发育为Th2，对Th2细胞因子进行诱导，对Th1/Th2的平衡产生影响，阻断呈递抗原[11-12]。本研究发现研究组抑制性细胞因子IL-10分泌下降，说明视神经脊髓炎谱系病变患者的外周血肿IL-10数量下降、功能损伤。TGF-β可负向免疫调节B细胞，同时B调节细胞可通过产生转化生长因子而促使Treg的扩增增强。视神经脊髓炎谱系疾病外周血B调节细胞功能出现异常，数量下降，急性期增强其免疫活性，激活大量炎性因子，免疫平衡失衡，相应的抑制功能降低，引发组织受损严重。

综上所述，视神经脊髓炎谱系病变急性发病期CD19+CD24highCD38high调节性B细胞的功能受损，数量显著降低，具有重要的临床价值。