黄 山，孙溪若，吕松琴，许宝妹，聂 磊，王义娜，李晓非

[1.昆明市第三人民医院（云南省传染性疾病临床医学中心），云南 昆明 650041；2.上海荣盛生物药业有限公司，上海 201108]

在人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染的初筛试验中[1]，酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）因有较好的敏感性和特异性，对场地和设备要求不高，所以应用最为广泛[2]，但存在检测耗时长、需手工操作、易出错、易污染等缺点[3]。因此，为了克服ELISA的不足，临床亟需一种可自动操作、简便、检测耗时短的HIV初筛方法。本研究拟初步探讨干式荧光发光法在HIV感染筛查中的应用价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2020年6月1日—12月31日昆明市第三人民医院感染一科收治的疑似HIV感染患者351例，其中男186例、女165例，年龄（47.79±12.35）岁。收集所有患者的血清样本，对所有HIV抗体筛查试验有反应的样本采用HIV确证试验（免疫印迹法）检测，最终确认HIV抗体阳性165例、阴性186例。本研究经昆明市第三人民医院伦理委员会审核通过，研究前向患者及家属讲述本研究的目的和实施方案，征得同意后并签署知情同意书，临床试验严格遵循赫尔辛基宣言和中国有关临床试验研究规范、法规进行。

1.2 仪器与试剂

HIV检测试剂盒（干式荧光发光法）、HIV诊断试剂盒（ELISA）均购自上海荣盛生物药业有限公司。人类免疫缺陷病毒（HIV 1+2型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法）购自新加坡MP生物医学亚太私人有限公司。AFS-1000干式荧光免疫分析仪、AFS-1200干式荧光免疫分析仪均购自广州蓝勃生物科技有限公司，ELX808酶标仪、ELX50洗板机均购自美国BioTek公司。

1.3 方法

1.3.1 HIV抗体补充试验 采用人类免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法）检测HIV，严格按试剂盒说明书操作，根据试剂说明书提供的标准判定阴阳性。

1.3.2 HIV筛查实验 （1）干式荧光发光法：严格按试剂盒说明书操作。吸取100 μL血清，滴加到试剂卡的加样孔中，反应15 min后立即上机检测，S/CO值≥1为阳性，S/CO值＜1为阴性。（2）ELISA：严格按试剂盒说明书操作。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析。呈非正态分布的计量资料以中位数（M）[四分位数（P25～P75）]表示，组间比较采用Mann-WhitneyU检验。计数资料以率或例表示，组间比较采用χ2检验。采用Kappa值评估2种方法之间的一致性。采用Spearman相关分析评估2种方法的相关性。以HIV确证试验（免疫印迹法）为金标准，分别计算2种方法的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值和阴性预测值。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 干式荧光发光法与ELISA S/CO值的比较

ELISA的S/CO值为0.233（0.156～17.453），显著高于干式荧光发光法[0.573（0.132～2.432）]（Z=5.608，P＜0.001）。见图1。

图1 干式荧光发光法与ELISA的S/CO值比较

趋势分析结果显示，干式荧光发光法的S/CO值随ELISA S/CO值的升高而升高，呈正相关（r=0.715，P＜0.001）。在ELISA S/CO值=31.639和干式荧光发光法S/CO值=2.432时，2种方法的趋势线交叉，自该交叉点起，随着检测结果数的增多，ELISA S/CO值的升高趋势更明显。见图2。

图2 干式荧光发光法与ELISA的S/CO值趋势比较

2.2 干式荧光发光法与ELISA的检测性能分析

以HIV确证试验（免疫印迹法）为金标准，在351例样本中，干式荧光发光法阳性165例、阴性186例，ELISA阳性168例、阴性183例。2种方法的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值和阴性预测值差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 干式荧光发光法与ELISA的检测性能分析

干式荧光发光法与ELISA的阳性符合率为95.83%（161/168），阴性符合率为97.27%（178/183），总符合率为96.58%（339/351），一致性好（Kappa=0.931）。

3 讨论

在HIV筛查试验中，ELISA对仪器、设备要求不高，且具有较高的敏感性和特异性，因此应用最为广泛[4]。但ELISA从加样到结果判读需要2个多小时，从加样一直到最后的终止反应，所有检测步骤基本为手工操作，极易出错或被污染。当操作出错或受污染时，多数情况下需重新检测，不仅浪费了人力、物力，提高了检测成本[5]，还会耽误患者的就诊、确诊时间[6]。干式荧光发光法仅需一台小型荧光免疫分析仪，对设备的要求比ELISA更低，一份样本的检测时长只需15 min，整个检测过程不涉及大量的手工操作，滴加样本后只用等待上机判读结果，出错或被污染的概率很低。该技术采用双抗原夹心法原理设计[7]，在硝酸纤维素膜检测线（T线）位置包被HIV重组抗原1，检测时样本中的待测物先与固化在玻璃纤维上的荧光微球标记的HIV重组抗原2结合，并继续向硝酸纤维素膜层析，通过硝酸纤维素膜T线时，被包被在硝酸纤维素膜上的HIV重组抗原1捕获。在荧光免疫分析仪上检测时，阳性样本的T线产生明显信号，荧光数值的高低与样本中的待测物浓度成正比。在硝酸纤维膜质控线（C线）包被羊抗兔多克隆抗体，在玻璃纤维膜上固化有荧光微球标记的兔IgG，无论样本中是否含有待测物，C线羊抗兔多克隆抗体始终可以捕获兔IgG荧光标记物，因此C线始终有荧光信号产生。

本研究结果显示，干式荧光发光法检测HIV的敏感性和特异性均＞90%，准确性高。与ELISA比较，虽然2种方法的S/CO值存在显著差异，但变化趋势基本一致，阳性符合率、阴性符合率和总符合率均＞90%，一致性好（Kappa=0.931）。由此可见，干式荧光发光法与ELISA具有较高的一致性。

综上所述，干式荧光发光法各项检测性能与ELISA相当，且具备检测快速、操作简便等优势，在检验技术人员紧缺、场地及设备受限的部分欠发达地区和基层医院可采用该技术开展HIV抗体筛查；该技术也为即时检验[8]及HIV快速检测替代策略[9]提供了一种适宜的选择，具有很好的应用前景。